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Nutrição de Micro-organismos Estudo de micro-organismos em laboratório: Fornecimento de condições químicas e físicas adequadas Crescimento celular: - identificação - caracterização - controle do crescimento 1) Condições químicas: - Nutrientes: - síntese dos componentes celulares - obtenção de energia - Uso de nutrientes na classificação de microrganismos: - grande diversidade de nutrientes utilizados - exigências nutricionais típicas para cada espécie - localização em determinadas regiões - Macronutrientes – grandes quantidades: - Fonte de Carbono: - Formação de componentes estruturais, obtenção de energia Fonte inorgânica (CO2) → Célula autotrófica Fonte orgânica (carboidratos, lipídios, proteínas) → Célula heterotrófica - Fonte de energia: Compostos químicos → Célula quimiotrófica (orgânicos e inorgânicos) Luz → Célula fototrófica Fonte de Carbono Fonte de energia Exemplos Quimioheterotrófico Compostos orgânicos Compostos orgânicos Várias bactérias, algumas arqueas, protozoários, fungos, animais Quimioautotrófico CO2 Compostos inorgânicos Bactérias nitrificantes, várias arqueas Fotoautotrófico CO2 Luz Algumas bactérias fotossintéticas, algas, vegetais Fotoheterotrófico Compostos orgânicos Luz Algumas bactérias fotossintéticas Bactérias quimioheterotróficas: - Importância médica → obtenção de moléculas orgânicas em hospedeiro animal ou vegetal - Importância industrial → degradação de poluentes (pesticidas, plásticos, hidrocarbonetos) - Versatilidade do metabolismo: Algumas bactérias → uso exclusivo de glicose Pseudomonas → uso de diferentes carboidratos, aminoácidos, hidrocarbonetos, pesticidas Polímero Composição Na natureza Enzima extracelular Microrganismos que hidrolisam Amido Glc α 1-4 Plantas Amilase Várias bactérias e fungos Celulose Glc 1-4 Plantas Celulase Várias bactérias e fungos Glicogênio Glc α 1-4 Animais Amilase Várias bactérias e fungos Ácido hialurônico GlcNAc, GlcA Animais Hialuronidase Clostridium Bactérias quimioheterotróficas: - Uso de polímeros → necessidade de hidrolases extracelulares: Produção de amilase - Fonte de Nitrogênio: - Componente estrutural, obtenção de energia - Proteínas, carboidratos, ácidos nucléicos Fonte inorgânica: N2, NO3 -, NO2 -, NH3 Fonte orgânica: aminoácidos, peptídeos Uso de peptídeos → necessidade de hidrolases extracelulares - Fonte de Enxofre: - Componente estrutural, obtenção de energia - Proteínas Fonte inorgânica → SO4 2-, H2S Fonte inorgânica → aminoácidos sulfurados (cisteína, metionina) - Fontes de Potássio, Magnésio, Cálcio, Sódio, Ferro, Fosfato - Micronutrientes ou elementos-traço: - Necessários em pequenas quantidades - Presença na água e outros componentes - Zn → cofator de enzimas - Co → vitamina B12 - Mn, Vn - Fatores de crescimento: - Compostos orgânicos que não são sintetizados por determinado microrganismo - Não são utilizados para obtenção de energia - Variável para cada espécie - Aminoácidos, nucleotídeos, vitaminas - Microrganismo prototrófico: - Não necessita de fatores de crescimento - Grande capacidade biossintética - Microrganismos do solo, água - Ex: Escherichia coli, algumas leveduras - Microrganismo auxotrófico: - Precisa de fatores de crescimento - Menor capacidade biossintética - Microrganismos de alimentos, mucosas, sangue Microrganismos patogênicos - Ex: Staphylococcus aureus, Salmonella typhi, Bacillus anthracis - Meios de cultura: - Grande quantidade de água (70-80% peso celular) - Nutrientes necessários - Meio básico: - fonte de Carbono - fonte de Nitrogênio - sais minerais - Meio mínimo: - mínimo necessário para o desenvolvimento de um microrganismo - sem fatores de crescimento - cultivo de microrganismos prototróficos - Meio definido: - constituintes conhecidos qualitativamente e quantitativamente - com fatores de crescimento - cultivo de microrganismos auxotróficos de metabolismo conhecido - Meio complexo: - composição química indefinida - todos os fatores de crescimento presentes - sangue, extrato de levedura, extrato de carne, peptona, leite - cultivo de microrganismos auxotróficos de metabolismo desconhecido - Bactérias que não crescem em meios de cultura: - Falta de um meio de cultura universal - Necessidade de grande quantidade de fatores de crescimento - Patógenos intracelulares obrigatórios - Uso de culturas de células, animais de laboratório, ovos embrionados - ex: Treponema pallidum 2) Condições físicas: - Temperatura: - Faixa de temperatura ideal (30-40°C) - Classificação de microrganismos quanto à temperatura de crescimento: - Microrganismos psicrófilos: - Crescimento abaixo de 20°C - Bactérias e arqueas do Ártico, Antártica, geladeira - Limitação: presença de água em estado líquido Água do mar, alimentos: congelamento abaixo de 0°C - Microrganismos mesófilos: - Crescimento entre 20°C e 40°C - Microrganismos patogênicos - Microrganismos psicrotolerantes: mesófilos que também crescem na faixa de microrganismos psicrófilos → deterioração de alimentos Bactérias psicrotróficas: Listeria monocytogenes Staphylococcus aureus - Microrganismos termófilos: - Crescimento entre 40°C e 70°C - Bactérias e arqueas do solo - Microrganismos hipertermófilos: - Extremófilos - Crescimento acima de 70°C - Arqueas de fontes termais, gêiseres Adaptações a baixas temperaturas: - membrana plasmática com ácidos graxos insaturados - proteínas com predomínio de estruturas α-hélice e aminoácidos polares Aumento de temperatura Diminuição de temperatura Adaptações a altas temperaturas: - membrana plasmática em monocamada, ácidos graxos saturados e ligações do tipo éter em fosfolipídeos - proteínas com aminoácidos hidrofóbicos no interior da estrutura - teor GC em ácidos nucleicos Membrana de arqueas hipertermófilas - pH: Microrganismo acidófilo: pH abaixo de 7 - Fungos, bactérias, arqueas - Presença em certos alimentos → impedem a contaminação por outros microrganismos: iogurte, mucosas Microrganismo neutrófilo: pH 7 – 8,5 - Bactérias e protozoários patogênicos Microrganismo basófilo: pH acima de 8,5 - Bactérias, arqueas - Lagos e solos especiais - Aplicação industrial: produção de hidrolases extracelulares basófilas → proteases de detergentes pH do citoplasma sempre mais próximo da neutralidade: - Passagem de íons pela membrana plasmática - Estabilidade de macromoléculas (proteínas, DNA, RNA) Controle do pH em meio de cultura: tampões de pH - O2 (potencial de oxi-redução): Microrganismo aeróbio obrigatório: - necessidade da presença de O2 → aceptor final de elétrons na respiração aeróbia - capacidade de remoçãode radicais livres de Oxigênio → presença de 3 enzimas: Superóxido dismutase (SOD), Peroxidase e Catalase Microrganismo aeróbio microaerófilo: - necessidade de pequena quantidade de O2 - presença de moléculas sensíveis a altos níveis de O2 Microrganismo anaeróbio: - sobrevivência apenas na ausência de O2 → não usa O2 como aceptor final de elétrons na respiração aeróbia - incapacidade de remoção de radicais livres de Oxigênio → ausência de SOD, peroxidase e catalase - Anaeróbio estrito: O2 é letal - Aerotolerante: - tolera pequenas quantidades de O2 - remoção de O2 por oxidação de compostos orgânicos: glicose → ácido glicônico Microrganismo facultativo: - crescimento na presença ou ausência de O2 - metabolismo versátil - presença de SOD, peroxidase e catalase Grupo Metabolismo Exemplo Habitat Aeróbio Respiração aeróbia Micrococcus luteus Pele, meio ambiente Facultativo Respiração aeróbia ou anaeróbia, fermentação Escherichia coli Trato intestinal de animais Microaerófilo Respiração aeróbia Spirillum volutans Lagos Aerotolerante Fermentação Streptococcus pyogenes Trato respiratório superior Anaeróbio estrito Respiração anaeróbia ou fermentação Clostridium spp., Methanobacterium spp. Alimentos enlatados, sedimentos de lagos, digestores de lixo Tioglicolato: agente redutor (redução de O2 a H2O) Resazurina: indicador redox Crescimento de bactérias anaeróbias: - Osmolaridade: Arqueas Atividade de água (aw): razão da pressão de vapor da água em equilíbrio com uma substância em relação à pressão de vapor da água pura; quantidade de água livre disponível Osmose: Microrganismo aw mínima Soluto acumulado Bactérias em geral 0,97 – 0,90 Glicina betaína, glutamato Algas marinhas 0,92 Manitol, prolina Cianobactérias marinhas 0,90 – 0,75 Glicina betaína Bactérias halofílicas 0,90 – 0,75 Glicina betaína, ectoína, trealose Arqueas halofílicas 0,75 KCl Leveduras, fungos xerofílicos 0,83 – 0,61 Glicerol -Solução hipertônica: diminuição da atividade de água; interrupção do crescimento - Para contrabalançar: acúmulo de solutos compatíveis intracelulares para manter o equilíbrio entre o meio intracelular e extracelular
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