Aula Coloração de esfregaços

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Análises parasitológicas
Preparação e coloração 
de esfregaços 
permanentes e outros 
métodos parasitológicos
Principais sintomas
Gastroenterite: inflamação que acomete todo sistema 
gastrointestinal, principalmente estômago e intestino delgado, e 
inclui sintomas como: náuseas, vômitos, diarreia e desconforto 
abdominal.
Diarreia: liberação de fezes anormais, caracterizada por 
evacuações frequentes e/ou líquidas e envolve perda 
aumentada de fluidos e eletrólitos 
Disenteria: distúrbio inflamatório do TGI associado com sangue 
e pus nas fezes e acompanhado por sintomas de dor, febre, 
cólicas abdominais 
Enterocolite: inflamação da mucosa do intestino delgado e 
grosso
Parasitológico de fezes
Coloração de esfregaços permanentes
Vantagens
• Permite o estudo minucioso da 
morfologia do microrganismo;
• O material (lâmina) pode ser 
arquivada para futuros estudos;
As colorações são utilizadas para identificação de 
trofozoítos, confirmação de diagnóstico e 
raramente para identificação de cistos 
Derivados da hematoxilina
Hematoxilinas são corantes nucleares capazes 
de evidenciar estruturas internas delicadas
Progressivo Regressivo
Corante bem 
diluído e usado 
por longos 
períodos. Não é 
utilizado um 
diferenciador
Corante não diluído 
ou pouco diluído. 
Cora-se em excesso e 
depois remove o 
corante com um 
diferenciador
Mais rápido, mais 
controlável e há 
possibilidade de 
remover partículas do 
corante que ficam 
aderidas a superfície do 
parasito
Hematoxilina
• Corante natural extraído da árvore da Hematoxylon Campechianum;
• Para ter “cor” tem que sofrer oxidação e transformar-se em hemateína;
• É necessário uso de um mordente que pode ser : cobre, ferro ou 
tungstênio;
• Corante nuclear;
• Quando o mordente utilizado é o ferro, a hematoxilina cora os núcleos, 
mas também evidencia outras estruturas (musculo estriado, mielina, 
queratina, fibras elásticas, organelos celulares)
Extração
oxidação
Hemateína
Hematoxilina férrica, segundo 
Heidenhain, modificada por Burrows
Esfregações preparados de amostras frescas ou preservadas em líquido de
Shaudinn, fixador álcool polividinico (APV) e ainda fixador acetato de sódio ácido
acético-formaldeído (SAF).
Este método é mais usado quando se pretende
diagnosticar a amebíase em pacientes portadores de
síndromes diarreicas ou disentéricas, ou quando as fezes são
obtidas após a aplicação de purgativo salino ou enema.
Características da coloração de hematoxilina 
férrica, segundo Heidenhain
Os organismos corados apresentam cor azulada ou cinzenta com
estruturas nucleares pretas. Corpos cromatóides de cistos e inclusões
como bactérias no citoplasma de trofozoítos também coram-se de preto
Modificações da coloração de hematoxilina 
férrica
Modificada por Melvin e Brooke (FNP): utilizada 
para amostras fecais não preservadas (FNP)
Modificada por Melvin e Brooke (FP): utilizada para 
amostras fecais preservadas (FP) principalmente pelo 
APV
Hematoxilina férrica-ácido fosfotungstenio
Tompkins e Miller
Procedimento rápido de coloração para propósitos
diagnósticos. Os organismos apresentam características
semelhantes aqueles descritos pela hematoxilina férrica de
Heidenhain
Colorações pelo tricômio
Mais rápida, revelam mais detalhes para identificação do parasita, 
técnica simples
•A solução A, também chamada corante de plasma, contém fucsina ácida, Xilidina
Ponceau, ácido acético glacial, e água destilada.
•A solução B contém ácido fosfomolíbdico em água destilada.
•A solução C, também chamada corante de fibra, contém verde luz amarelado. É usado
para colorir colágeno.
Colorações pelo tricômio
Mais rápida, revelam mais detalhes para identificação do parasita, 
técnica simples
Método Gomori, modificado Wheatley
Método Brooke
Características:
Citoplasma de cistos e trofozoítos tomam cor verde-
azulada. A cromatina nuclear, células vermelhas e 
bactérias, coram-se de vermelho
Trofozoíto
Entamoeba histolytica
Mas nós avaliamos apenas as 
fezes?
OUTROS MÉTODOS 
PARASITOLÓGICOS
Para as parasitoses que possuem parte de seu ciclo evolutivo na corrente sanguínea,
pode-se realizar a técnicas de pesquisa no sangue. Em geral, as amostras são colhidas de
sangue periférico, sem anticoagulante, por punção da polpa digital ou do lobo da orelha.
Para exames como a pesquisa de microfilárias pelo exame a fresco, o sangue venoso é
colhido em EDTA, e imediatamente analisado ao microscópio diluído ou não em salina,
onde se evidenciam as microfilárias móveis.
EXAMES PARASITOLÓGICOS DO SANGUE
Preparo da lâmina
1- coleta
2- pipetar 10µl 
de amostra na lâmina
3- homogeneizar com 
lamina extensora
4- corar
http://www.nano-macro.com/2015/10/a-magica-do-diagnostico-post-4.html
Coloração do esfregaço
COLORAÇÕES PANÓTICAS OU COLORAÇÕES SEGUNDO 
ROMANOWSKY
+
Azul de metileno Eosina
A mistura é dissolvida 
em álcool (metanol)
Solução alcoólica de 
complexo eosinato de azul e 
“azures” de metileno
Leishman, May-Grunwald, Giemsa, Wright 
http://www.nano-macro.com/2015/10/a-magica-do-diagnostico-post-4.html
Anisaquíase gástrica
Larvas do gênero Anisakis spp. e 
Phocanema decipiens
Diagnóstico por endoscopia 
Anisaquíase gástrica 
https://www.mdsaude.com/2017/05/anisaquiase-verme-do-sushi.html
Sistema urogenital
Sistema urogenital
Esfregaço do 
material coletado
Coloração de Gram- Técnica SIMPLES
Técnica
• Cristal violeta
• Lugol
•Álcool cetona
• Fucsina
http://biomedicinaparatodos.blogspot.com.br/2015/06/coloracao-de-gram-sabe-o-que-e-entenda.html
https://heavenly96.tumblr.com/post/157415117216/finish-your-antibiotics