Aula microbiologia Clínica Cultura Secreção Trato Respiratório Superior

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Cultura Secreção Trato 
Respiratório Superior - 
Pesquisa de 
Streptococcus pyogenes 
Tatiana Elias Colombo 
2013 
• Orofaringe 
• Nasofaringe 
• Faringe 
• Amigdala 
• Secreção nasal 
• Raspado de lesão de boca 
Material clínico 
• Material clínico coletado – swab de algodão estéril 
• Instruir o paciente a respirar profundamente e com o auxílio de um 
abaixador de língua abaixa-se delicadamente a língua 
• Pressionar e rolar o swab sobre as amigdalas e faringe posterior – 
área hiperemiada 
 
 
 
 
*Evitar tocar na língua, bochecha ou dentes para evitar a 
contaminação com bactérias da microbiota oral 
 
Coleta e transporte 
• O paciente não deve se alimentar e nem fazer uso de 
antissépticos bucais antes da coleta 
 
• Após a coleta da amostra clínica, o swab deve ser 
imediatamente processado para que o patógeno seja 
isolado e identificado no laboratório clínico. 
Coleta e transporte 
• Rolar delicadamente o swab sobre a superfície da 
lâmina 
• Deixar secar ao ar e fixar no calor 
• Esfregaço corado pelo método de Gram 
Bacterioscópico 
• Material clínico depositado em uma pequena área do 
ágar sangue e semeado pela técnica do esgotamento 
• Incuba-se por 24 – 48 horas, + ou - 36
 
C (jarra de 
microaerofilia) 
Bacteriológico 
Jarra de microaerofilia 
- Meios inoculados 
- Vela acesa 
- Jarra fechada hermeticamente 
- Vela queima enquanto há O2 suficiente para manter a combustão 
- Atmosfera: O2 CO2 
• Após 24 – 48 horas realiza-se a análise macroscópica 
 
 
 
 
 
 
• Bacterioscopia (coloração de Gram) 
• Semeia-se em tubo contendo ágar nutriente ou BHI 
(obter quantidade considerável de material para 
realização de provas bioquímicas) 
• Tubo incubado 12 – 24 horas, + ou - 36
 
C (colônia nova) 
Bacteriológico 
• Prova da catalase 
Diferenciação do gênero Staphylococcus (catalase 
positivo) de Streptococcus (catalase negativo) 
Diferenciação dos estreptococos 
Estreptococos do grupo A e do grupo viridans são 
sensíveis a bacitracina (teste positivo) – Bacitracina: o halo 
deve ser maior ou igual a 13 mm 
Prova da Bacitracina 
Optoquina 
(discos de 6 mm) - Amostras sensíveis: halo maior ou igual a 14 mm 
(discos de 10 mm) - Amostras sensíveis: halo maior ou igual a 16 mm 
 
Prova da Optoquina 
Outros estreptococos alfa-hemolíticos 
• Identificação dos estreptococos beta-hemolíticos do 
grupo B (S. agalactiae) 
- Semear a amostra de estreptococos em ágar sangue 
perpendicularmente a uma amostra de Staphylococcus 
aureus produtora de beta-hemólise (em fita) 
- As duas estrias devem ficar próximas porém sem se 
tocarem 
- Incubar 24 horas, + ou - 35
 
C 
Prova de CAMP 
A zona de junção das duas hemolisinas quando se 
encontram, apresenta-se na forma de uma seta (CAMP +) 
Prova de CAMP 
Streptococos agalactiae 
Staphylococcus aureus 
Streptococcus agalactiae Streptococcus agalactiae 
- Esculina presente no meio é hidrolizada, formando esculetina e 
dextrose. A esculetina reage com sais de ferro presentes no meio 
tornando-o enegrecido 
- Diferenciar Enterococcus spp. e Streptococcus bovis 
(Streptococcus do grupo D) de Streptococcus spp 
Prova da bile-esculina 
- A amostra teste deve ser semeada utilizando alça de 
platina em agulha 
- Picar o meio e na volta semear a superfície 
- Incubar até 48 horas, + ou - 35
 
C 
Prova da bile-esculina 
Coloração preta no ápice 
e na base 
O meio não altera a cor ou 
fica levemente enegrecida 
no ápice da superfície 
 inclinada 
• Capacidade do microrganismo crescer em altas concentrações de 
sal 
• Diferenciar Enterococcus spp. de Streptococcus spp. 
• Inoculam-se 2 a 3 colônias a serem testadas em um caldo BHI 
suplementado com 6,0% de NaCl (com ou sem indicador) 
• Incubam-se a 35
 
2ºC por até 72 h 
Positivo: amarelo ou turvação do meio (Enterococcus faecalis) 
Negativo: meio límpido, sem turvação, 
ou mudança de cor (Streptococcus bovis, 
Streptococcus grupo viridans) 
 
Crescimento em meio hipertônico 
• Streptococcus pyogenes é o único estreptococo que 
apresenta reação positiva 
• Reação revelada pela adição do reagente N,N,dimetil-
aminocinamaldeído, originando cor vermelha 
• Microrganismo teste semeado num meio líquido adicionado de 
substrato e incubado por 4 a 5 horas a 35ºC 
• Adicionar uma gota do revelador Após 1 minuto haverá 
desenvolvimento de coloração vermelha 
 (MO produtor de PYRase) 
 
Teste PYR