Métodos de análise Biomoléculas

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Métodos	
  de	
  análise	
  de	
  
Biomoléculas	
  
ELETROFORESE	
  EM	
  GEL	
  DE	
  AGAROSE	
  
VISUALIZAÇÃO	
  DO	
  DNA	
  EM	
  LUZ	
  
ULTRAVIOLETA	
  
SDS-­‐PAGE	
  
SDS-­‐PAGE	
  (Eletroforese	
  de	
  proteínas)	
  
BIBLIOTECAS	
  
BIBLIOTECA	
  GENÔMICA	
  
Todo o conteúdo genético (genoma) 
de um indivíduo inserido em vetores 
de clonagem, formando assim uma 
“biblioteca de genes”. 
BIBLIOTECA	
  DO	
  cDNA	
  
•  cDNA	
  -­‐	
  DNA	
  complementar	
  
•  Purificação	
  dos	
  mRNAs	
  
–  Oligos	
  dT	
  
•  Transcrição	
  reversa	
  
•  Clonagem	
  
BIBLIOTECA	
  DE	
  DNA	
  E	
  cDNA	
  
DNA 
 
Fragmentação 
 
Inserção em vetores 
 
Transformação 
mRNA 
 
Síntese de cDNA 
 
Inserção em vetores 
 
Transformação 
COMO	
  LOCALIZAR	
  A	
  BACTÉRIA	
  
CONTENDO	
  DNA	
  DE	
  INTERESSE	
  EM	
  UMA	
  
BIBLIOTECA	
  GENÔMICA	
  
SONDA	
  PARA	
  LOCALIZAR	
  BACTÉRIA	
  COM	
  
DNA	
  DE	
  INTERESSE	
  
SOUTHERN-­‐BLOTTING	
  –	
  DETECÇÃO	
  DE	
  DNA	
  
SOUTHERN-­‐BLOTTING	
  –	
  DETECÇÃO	
  DE	
  DNA	
  
COMO	
  AVALIAR	
  A	
  EXPRESSÃO	
  DIFERENCIAL	
  DE	
  
GENES	
  EM	
  DIFERENTES	
  CÉLULAS/TECIDOS?	
  
NORTHERN-­‐BLOTTING	
  –	
  DETECÇÃO	
  DE	
  RNA	
  
S P S P S P 
4A1 4A2 
Tubulina 
Prociclina 
pGEM Sondas 32P 
NORTHERN-­‐BLOTTING	
  –	
  DETECÇÃO	
  DE	
  RNA	
  
COMO	
  LOCALIZAR	
  A	
  BACTÉRIA	
  CONTENDO	
  
O	
  DNA	
  DE	
  INTERESSE	
  NUMA	
  BIBLIOTECA	
  
DE	
  cDNA?	
  
WESTERN-­‐BLOTTING	
  –	
  DETECÇÃO	
  DE	
  PROTEÍNA	
  
WESTERN-­‐BLOTTING	
  –	
  DETECÇÃO	
  DE	
  PROTEÍNA	
  
ANTICORPOS	
  PARA	
  LOCALIZAR	
  BACTÉRIA	
  
CONTENDO	
  cDNA	
  DE	
  INTERESSE	
  
ANTICORPOS	
  PARA	
  LOCALIZAR	
  BACTÉRIA	
  
CONTENDO	
  cDNA	
  DE	
  INTERESSE	
  
Soro	
  de	
  
pacientes	
  
Rastreamento	
  
ANTICORPOS	
  PARA	
  LOCALIZAR	
  BACTÉRIA	
  
CONTENDO	
  cDNA	
  DE	
  INTERESSE	
  
IDENTIFICAÇÃO	
  DOS	
  GENES/PROTEÍNAS	
  E	
  
APLICAÇÃO	
  BIOTECNOLÓGICA	
  
Gene	
  /	
  PTN	
  
?	
  
KIT	
  DiagnósKco/Vacina