Microbiota Nasal - Staphylococcus Aureus - Relatório da Aula Prática

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CURSO	
  DE	
  NUTRIÇÃO	
  DISCIPLINA	
  DE	
  MICROBIOLOGIA	
  PROTOCOLO	
  DE	
  AULA	
  PRÁTICA	
  MICROBIOTA	
  DO	
  
VESTÍBULO	
  NASAL	
  
NOME:	
  Carolina	
  Gonzatto	
  Ayres	
  –	
  Turma	
  B	
  
	
  
INTRODUÇÃO:	
  
	
  
Os	
  estafilococos	
  são	
  cocos	
  Gram-­‐positivos,	
  	
  para	
  o	
  teste	
  	
  de	
  catalase,	
  que	
  tendem	
  a	
  formar	
  agrupamentos	
  
semelhantes	
  a	
  cachos	
  de	
  uva,	
  devido	
  aos	
  seus	
  arranjos	
  irregulares.	
  São	
  bactérias	
  anaeróbias	
  facultativas	
  de	
  
fácil	
  crescimento.	
  
Dentre	
  os	
  agentes	
  de	
  infecção	
  hospitalar,	
  o	
  Staphylococcus	
  aureus	
  é	
  o	
  microrganismo	
  com	
  maior	
  índice	
  de	
  
morbidade	
  e	
  mortalidade,	
  podendo	
  causar	
  endocardite,	
  osteomelite,	
  meningite	
  e	
  choque	
  tóxico,	
  gerando	
  
febre,	
  hipotensão,	
  vertigem,	
  descamação,	
  vômito,	
  cefaleia,	
  	
  faringite.	
  
O	
  principal	
  reservatório	
  do	
  Staphylococcus	
  aureus	
  na	
  natureza	
  é	
  o	
  ser	
  humano.	
  Cerca	
  de	
  70%	
  da	
  
população	
  carrega	
  essa	
  bactéria	
  em	
  seu	
  vestíbulo	
  nasal	
  em	
  algum	
  momento	
  da	
  vida.	
  	
  
A	
  preocupação	
  maior	
  é	
  que	
  quando	
  esses	
  microrganismos	
  invadem	
  indivíduos	
  imunocomprometidos,	
  
como	
  é	
  o	
  caso	
  dos	
  pacientes	
  internados	
  nas	
  UTIs,	
  podem	
  causar	
  danos	
  graves	
  que	
  podem	
  culminar	
  com	
  a	
  
morte	
  do	
  indivíduo.	
  Diante	
  desta	
  situação	
  é	
  que	
  o	
  uso	
  dos	
  equipamentos	
  de	
  proteção	
  individual	
  (EPI),	
  tais	
  
como	
  máscara	
  e	
  luvas,	
  faz-­‐se	
  necessário	
  no	
  momento	
  da	
  realização	
  de	
  quaisquer	
  procedimentos	
  para	
  
evitar	
  a	
  contaminação.	
  	
  
	
  
PRÁTICA:	
  	
  
	
  
A	
  prática	
  foi	
  realizada	
  em	
  dois	
  dias,	
  em	
  duas	
  etapas	
  diferentes.	
  No	
  primeiro	
  dia	
  foi	
  realizada	
  a	
  coleta	
  da	
  
secreção	
  do	
  vestíbulo	
  nasal	
  com	
  o	
  auxilio	
  de	
  um	
  swab.	
  A	
  turma	
  foi	
  dividida	
  em	
  duplas	
  e	
  cada	
  um	
  realizou	
  a	
  
coleta	
  no	
  colega	
  da	
  dupla.	
  Com	
  o	
  mesmo	
  Swab	
  que	
  contem	
  o	
  material	
  coletado,	
  fez	
  estrias	
  na	
  superfície	
  
do	
  ágar	
  manitol,	
  utilizando	
  a	
  técnica	
  de	
  esgotamento.	
  No	
  final	
  as	
  duas	
  placas	
  de	
  ágar	
  sangue	
  e	
  ágar	
  
manitol	
  ficaram	
  incubadas	
  por	
  24hrs	
  a	
  37°C,	
  ar	
  ambiente.	
  A	
  técnica	
  foi	
  realizada	
  para	
  descobrirmos	
  a	
  
presença	
  de	
  Estafilococos	
  e	
  sua	
  classificação.	
  
	
  
PLACA	
  DE	
  MANITOL	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  	
  PLACA	
  DE	
  ÁGAR	
  SANGUE	
  
	
  
	
  
	
  
	
  
No	
  segundo	
  dia	
  observamos	
  o	
  crescimento	
  na	
  placa	
  e	
  selecionamos	
  colônias	
  com	
  características	
  de	
  
estafilococos,	
  que	
  em	
  placas	
  de	
  ágar	
  manitol	
  normalmente	
  são	
  de	
  coloração	
  mais	
  amarelada.	
  
	
  
Já	
  nas	
  placas	
  de	
  ágar	
  sague	
  deveríamos	
  observar	
  hemólise	
  se	
  estas	
  tivessem	
  sido	
  colonizadas	
  por	
  
staphylococcus	
  aureus,	
  na	
  placa	
  de	
  alguns	
  colegas	
  o	
  ágar	
  sangue	
  cuja	
  coloração	
  era	
  vermelho,	
  com	
  a	
  
reação	
  hemolítica	
  ativa	
  passou	
  a	
  apresentar	
  um	
  fundo	
  amarelo-­‐esverdeado	
  de	
  aspecto	
  brilhante	
  e	
  colônias	
  	
  
cremes,	
  confirmando	
  a	
  presença	
  de	
  staphylococcus	
  aureus,	
  como	
  na	
  placa	
  abaixo:	
  
	
  
	
  Após	
  observarmos	
  as	
  colônias	
  macroscopicamente	
  realizamos	
  a	
  
coleta	
  das	
  colônias	
  com	
  o	
  auxilio	
  de	
  uma	
  alça	
  micológica	
  
previamente	
  esterilizada	
  utilizando	
  um	
  bico	
  de	
  Bunsen.	
  Retirando	
  a	
  
colônia	
  da	
  placa	
  de	
  ágar	
  manitol	
  e	
  colocando	
  em	
  uma	
  lamina	
  com	
  
uma	
  gota	
  de	
  água	
  realizando	
  o	
  esfregaço.	
  Após	
  coramos	
  com	
  o	
  
método	
  de	
  Gram	
  para	
  observarmos	
  no	
  microscópio	
  no	
  aumento	
  de	
  
100x	
  em	
  óleo	
  de	
  imersão	
  a	
  colônia	
  coletada,	
  assim	
  podíamos	
  
determinar	
  se	
  eram	
  cocos	
  ou	
  bacilos	
  e	
  também	
  identificar	
  se	
  eram	
  
bactérias	
  Gram	
  positivas	
  ou	
  negativas.	
  	
  
	
  
Após	
  a	
  realização	
  das	
  laminas	
  para	
  observação	
  no	
  microscópio	
  
utilizamos	
  mais	
  um	
  teste,	
  o	
  teste	
  da	
  catalase.	
  Para	
  isto	
  selecionamos	
  
uma	
  colônia	
  da	
  placa	
  de	
  ágar	
  sangue	
  e	
  com	
  o	
  auxilio	
  de	
  uma	
  alça	
  
micológica	
  previamente	
  esterilizada	
  em	
  um	
  bico	
  de	
  Bunsen	
  colocamos	
  esta	
  colônia	
  em	
  uma	
  lâmina	
  de	
  
vidro	
  e	
  colocamos	
  sobre	
  as	
  bactérias	
  uma	
  gota	
  de	
  reativo	
  (água	
  oxigenada).	
  Observamos	
  imediatamente	
  a	
  
formação	
  de	
  borbulhas.	
  O	
  que	
  ficou	
  evidente	
  que	
  o	
  teste	
  foi	
  positivo	
  para	
  catalase.	
  Todos	
  os	
  
Staphylococcus	
  produzem	
  catalase	
  ,	
  que	
  catalisa	
  a	
  conversão	
  do	
  peróxido	
  de	
  hidrogênio	
  tóxico	
  em	
  água	
  e	
  
oxigênio.	
  O	
  peróxido	
  de	
  oxigênio	
  pode	
  acumular-­‐se	
  durante	
  o	
  metabolismo	
  bacteriano	
  é	
  após	
  a	
  fagocitose.	
  
Sendo	
  assim	
  ele	
  reage	
  com	
  a	
  água	
  oxigenada	
  confirmando	
  a	
  presença	
  de	
  estafilococos.