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RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA Nome do Aluno: Viviane Aparecida Ferreira Disciplina: Ciências Moleculares e Celulares Título do Roteiro de Aula Prática: Núcleo Celular II Polo: Anhanguera Telêmaco Borba Turma: A Curso: Enfermagem Semestre: 2º Data da aula prática: 26/09/2018 Aula Prática: 7 OBJETIVOS: Descrever os objetivos da aula prática. Observar o aspecto do DNA (material hereditário) Compreender a técnica de extração do DNA MATERIAL E MÉTODOS: Descrever de forma sucinta quais foram os materiais e equipamentos utilizados. Banana Saco plástico comum transparente Detergente Água Becker Colher de medida (de café) Proveta Álcool etílico 95º (gelado) Tubo de ensaio Cloreto de sódio (sal de cozinha) Funil Faca Bastão de vidro Conta-gotas Peneira Mascara Luvas Método Macere bem a banana, para aumentar a superfície de contato, o que facilita a extração do DNA, colocamos 13,3 ml de detergente, 2 gramas de sal em um Becker e 125 a 150 ml de água morna. Depois adicionamos a banana e com um bastão de vidro homogeneizamos a solução, então levamos para o banho-maria à 40°c por cerca de 15 minutos, depois retiramos a mistura do banho-maria e resfriamos rapidamente; colocando o Becker no gelo durante 5 minutos, posteriormente colocamos o algodão no funil e filtramos para um Erlenmeyer. No filtrado adicionamos 200 a 250 ml de álcool gelado, deixando-o escorrer vagarosamente pela borda, foi nesse momento que observamos duas fases distintas, no fundo uma base constituída por um preparado de sal, detergente e filtrado, com uma camada fina de álcool acima. DESENVOLVIMENTO DA AULA: Descrever os resultados obtidos durante a aula prática. Procedimento 1- Extração do DNA da banana A sigla DNA significa ácido desoxirribonucleico, esta molécula foi descoberta por volta de 1969 por Johann Friedrich Miescher. O DNA tem papel importante para os seres vivos, é através dele que a magia da vida acontece. Ele é o responsável por todas as informações genéticas necessárias para criação de um organismo, ele controla toda a atividade celular que é transmitida de geração em geração. Hoje os estudos para compreender e aperfeiçoar estas moléculas tem crescido rapidamente, pois suas aplicações se tornaram inúmeras para a humanidade. Um dos ramos que tem investido nestes estudos é o da agricultura pois as alterações genéticas em legumes, frutas e verduras, buscando o melhoramento das mesma contra pragas ou para torna-las mais saborosas e resistentes tem despertado grande interesse. Isso ocorre não apenas em plantas, mas essas técnicas também têm sido desenvolvidas para criação de animais de para consumo humano ou para criação em residências. Outro grande aplicação do DNA se encontra na investigação de paternidades e descoberta de crimes, uma vez que em todas as células do organismos é possível encontrar fragmentos de DNA que possibilitam o desvendamento de diversos crimes através do decodificação dos mesmos. Além de serem aplicados na área medica, na procura por tratamento, prevenção e até mesmo a cura de doenças. Utilizando procedimentos e instrumentos muito simples é possível extrair o DNA e visualiza-lo sob forma de filamentos brancos. Como mostra na figura: Depois de misturarmos essas fases, observamos no topo uma massa esbranquiçada, pois o DNA é insolúvel em álcool. Como mostra na figura abaixo: Existe várias forma de desnaturar as proteínas, entre elas podemos destacar através de agentes químico e físicos. As proteínas da banana, nós quebramos através do calor e maceração, o álcool foi importante para o DNA se isolar e formar uma nuvem esbranquiçada, o DNA não é solúvel em álcool, o que permitiu o seu isolamento. O detergente teve como papel quebrar (lise) a membrana para que o conteúdo celular, incluindo as proteínas e o DNA se soltasse e se dispersasse na solução. O sal usado no começo possibilitou que as moléculas de DNA aparecessem no final dessa prática através da precipitação das proteínas. 1) QUAL A FUNÇÃO DO SAL? A função do sal proporcionou o DNA um ambiente favorável, pois o sal contribuiu com os íons positivos que neutralizaram a carga negativa do DNA, para que assim as numerosas células de DNA pudessem coexistir na solução, através da precipitação das proteínas. 2) O QUE ACONTECE QUANDO SE ADICIONA O DETERGENTE? O detergente irá alisar as membranas, visto que estas são constituídas de lipídios, estes são insolúveis em água, mas são solúveis em detergente. Com a ruptura dessa membrana o conteúdo celular, incluindo as proteínas e o DNA, soltou-se e dispensou-se na solução. 3) QUAL O PAPEL DO ÁLCOOL? Como o DNA é insolúvel em álcool, esta forma uma aglomeração de moléculas, portanto o álcool permite o isolamento do DNA. 4) PORQUE VOCÊ NÃO PODE VER A DUPLA HÉLICE? Porque para vermos a dupla hélice, necessitamos do microscópio eletrônico. Essa prática permitiu a visualização do DNA, através de substâncias usadas, agentes físicos e químicos, permitindo que no final da prática conseguíssemos ver o DNA da banana, através da alise da membrana, a precipitação salina e o isolamento do DNA. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Descrever quais são as conclusões da aula, segundo os objetivos descritos no primeiro item e sua aplicabilidade na vida profissional. Nos tubos de ensaio pode-se observar duas fases após o adicionamento do álcool resfriado, na parte inferior formou-se uma fase aquosa e na parte superior a fase alcoólica (sobrenadante). A trituração foi realizada para romper as paredes celulares e as membranas celulares, liberando o conteúdo celular. A filtração permitiu separar as paredes celulares e as membranas citoplasmáticas do restante do conteúdo celular. O detergente dissolve as membranas lipídicas além de desintegrar os núcleos e os cromossomos das células da banana, liberando o DNA. Com a ruptura das membranas, o conteúdo celular, incluindo o DNA e proteínas, se soltam e se dispersam na solução. Um dos componentes do detergente, o lauril sulfato de sódio, desnatura as proteínas, separando-as do DNA cromossômico. A adição de sal, no início da prática, proporcionou ao DNA um ambiente favorável. O sal contribuiu com íons positivos Na+ que neutralizaram a carga negativa do DNA, precipitando-o na solução aquosa. O álcool gelado, além de proporcionar uma mistura heterogênea (duas fase) em ambiente salino, faz com que as moléculas de DNA se aglutinem não se dissolva no álcool, na concentração e na temperatura que se usou nesta prática. Pelo fato de o DNA ser menos denso que a água e a mistura aquosa dos restos celulares, ele se localiza na interface da fase alcoólica e aquosa. Apesar de o DNA ser a maior molécula da célula a sua estrutura não pode ser observada a olho nu, devido ao seu tamanho microscópico. Tal como não podemos observar a maior parte das células a olho nu, mas podemos observar um organismo constituído por milhões de células, também não podemos observar uma moléculas de DNA, mas podemos observar como verificamos na pratica, milhões de cadeias de DNA aglomerados. OBSERVAÇÕES GERAIS DE PRÁTICAS E RELATÓRIOS O Projeto Pedagógico do Curso (PCC), provisiona carga horária específica de tele aula e carga horária específica para aula prática, sendo assim, os cronogramas estabelecidos pela coordenação levam em consideração que o aluno deverá comparecer pelo menos 3 vezes na semana ao Polo, uma vez dedicada ao dia da oferta do curso, sendo a presença na tele aula e os outros dois para o desenvolvimento de aula prática, quando necessário; O relatório deverá ser desenvolvido individualmente e entregue ao tutor presencial, observando o cronograma disponibilizado pela coordenação de curso; A coordenação pedagógica do polo também deverá providenciar uma validação do relatório, que poderá ser desenvolvida com um carimbo. _______________________ _______________________ ALUNO: Viviane Apº Ferreira TUTOR: Érica Fabiana Gazola MATR.: 2795593661
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