Relatorio aula staphylococcus - Gladstony

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Universidade Federal de Minas Gerais 
Faculdade de Farmácia 
Bacteriologia Clínica (ACT010) 
Aluno: Gladstony de Oliveira Souza – 2016102106 
 
Relatório de Aula Prática 
Identificação de bactérias do gênero Staphylococcus 
Introdução 
O gênero Staphylococcus pertence à família Micrococcaceae, são cocos Gram positivos agrupados em 
cachos, com colônias pequenas (1-2 mm de diâmetro), anaeróbios facultativos, catalase positivos, 
halotolerantes, possuindo metabolismo respiratório e fermentativo. São responsáveis por um grande número 
de infecções bacterianas no homem. Este gênero está presente na microbiota normal do ser humano, podendo 
atuar como residentes ou transitórios sem causar qualquer sintoma. São encontrados em várias partes do 
corpo, como faringe, mãos, garganta e intestino. As infecções estafilocócicas podem ser causadas pelas 
bactérias da microbiota em sítios não colonizados ou adquiridas de outros portadores. A transmissão ocorre 
de pessoa para pessoa ou por meio do contato indireto (via aérea). Eles possuem elevada capacidade de 
desenvolver resistência a vários antibióticos, principalmente dentro do ambiente hospitalar, onde esses 
medicamentos são amplamente utilizados. 
Objetivo 
Identificar a espécie de bactéria do gênero Staphylococcus presente na amostra, por meio de diferentes testes 
diagnósticos, técnica de Gram, crescimento bacteriano em meios sólidos e de teste de sensibilidade a 
antibióticos, analisando parâmetros químicos, morfológicos e de reação tintorial. 
Materiais e Metodologia 
Preparação da Técnica de Gram 
A reação tintorial foi realizada de acordo com o procedimento relatado no relatório nº 1. 
Preparação da Prova da Catalase 
Esta técnica é capaz de detectar a presença da enzima catalase, que converte o H2O2 em água e oxigênio 
gasoso. Neste teste, as bactérias são classificadas em catalase positivas ou catalases negativas, e ele se dá 
pela produção de bolhas (oxigênio) na superfície da lâmina após pingar uma gota de água oxigenada 10 
volumes. As bactérias do gênero Staphylococcus são catalase positivas. 
Preparação da Prova da Coagulase – Em tubo: Coagulase Livre 
Esta técnica é capaz de detectar a presença da enzima coagulase secretada extracelularmente pela bactéria e 
que reage com a protrombina presente no plasma de coelhos gerando a trombina. A trombina, por sua vez, 
reage com o fibrinogênio, dando origem à fibrina, que leva à formação de coágulo no fundo do tubo. Este 
teste se dá pela ressuspenção de uma colônia isolada em 0,5 ml de plasma de coelho EDTA e após isso 
incuba-lo em estufa a 37°C durante 4 horas. Se há a formação de coágulo, o teste é considerado positivo, e na 
ausência do coagulo indica resultado negativo ao teste. 
As bactérias da espécie Staphylococcus aureus são classificados como coagulase positivos e as espécies de 
Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus e Staphylococcus haemolyticus são classificados 
como coagulase negativos. 
Prova do plantio em Agar Hipertônico Manitol (AHM) 
Esta técnica é capaz de determinar a capacidade da bactéria em utilizar o manitol como substrato para a 
fermentação. É um meio seletivo que permite o crescimento de microrganismos do gênero Staphylococcus, 
uma vez que a alta concentração de sal (7,5%) presente neste meio é capaz de selecioná-los. A presença de 
manitol, como fonte de carbono, possibilita sua utilização por via fermentativa, que poderá ser evidenciada 
pela viragem do pH do meio de cultura. O teste se dá pela inoculação da amostra por estrias através de 
esgotamento e após isso, deve-se incubar a placa inoculada à 37ºC por 24 horas. O resultado é obtido através 
do crescimento bacteriano e pela mudança de coloração do meio. Em resultados positivos, há a fermentação 
do manitol e formação de colônias grandes, levando a acidificação do meio apontada pelo indicador, o que 
leva a uma coloração amarelada do meio. Não havendo crescimento bacteriano e nem mudança da coloração 
do meio, o resultado é tido como negativo. As bactérias da espécie Staphylococcus aureus são AHM 
positivos. 
Preparação da Prova da DNAse 
Esta técnica é capaz de detectar a produção das enzimas desoxirribonuclease-dnase e endonucleases pelas 
bactérias. Estas enzimas são consideradas termoestáveis e capazes de hidrolisar o ácido nucléico. Este teste 
se dá pela inoculação da bactéria em um meio de cultura DNAse e após isso incubar a placa por 24 horas em 
estufa a 37°C. Após este período, para se obter o resultado do teste, deve gotejar uma solução de azul de 
ortotoluidina. Se há a visualização de halo violeta ao redor do plantio, indicando hidrólise do DNA, o 
resultado é tido como positivo. Se for observado ausência de halo violeta, permanecendo a cor azul ao redor 
da colônia, o resultado é tido como negativo. As bactérias da espécie Staphylococcus aureus são DNAse 
positivos. 
 
Teste de Resistência a Novobiocina – Método de difusão em disco (Kirby-Baur) 
A preparação do padrão 0,5 da escala Mac Farland foi descrito conforme relatório nº 3. A bactéria deve ser 
inoculada em técnica de tapete na placa com meio Muller Hinton e acrescida de um disco de novobiocina 
contendo 5 µg. As amostras resistentes mostram halos de inibição menores que 16 mm, indicando 
resistência. As bactérias da espécie Staphylococcus saprophyticus são resistentes e as bactérias da espécie 
Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus haemolyticus são sensíveis. 
Preparação da Prova da Urease 
Esta técnica é capaz de determinar a capacidade da bactéria em transformar a uréia em amônia por meio da 
enzima urease, o que por fim resulta na alcalinização do meio. A técnica é feita num meio semissólido, em 
tubo, com o indicador vermelho de fenol. Este teste se dá pela inoculação vertical da colônia de bactéria no 
meio (inoculação em 2/3 do meio) e incuba-lo em estufa a 37ºC durante 24 horas. O resultado é obtido 
através da mudança de coloração do meio, no qual em resultados positivos, o meio adquire uma coloração 
rosácea resultante da conversão da ureia. Em resultados negativos, a coloração do meio permanecerá 
amarelada. As bactérias da espécie Staphylococcus epidermidis são urease positivos e as bactérias da espécie 
Staphylococcus haemolyticus são urease negativos. 
 
Resultados e Discussões 
Por meio dos testes, foram encontrados os seguintes resultados: 
 
Foi utilizado a amostra Espécie 1 (cultivada em meio Agar Sangue) para identificar a qual espécie do gênero 
Staphylococcus se trata. As bactérias presentes na amostra são Cocos Gram positivos, dispostos em cachos, 
conforme analisado na técnica de Gram, e as colônias isoladas obtidas através de plantio qualitativo 
apresentam forma circular, de elevação convexa, com margens regulares e íntegras, de tamanho pequeno, 
com aparência de superfície lisa e brilhante, húmidas e de coloração leitosa. As colônias da Espécie 1 foram 
submetidas ao teste da catalase, o qual obtiveram resultado positivo, confirmando tratar-se do gênero 
Staphylococcus. Quando submetidos ao teste da coagulase, ágar hipertônico manitol e teste da DNAse, todos 
esses testes obtiveram resultado negativo, assinalando não tratar-se da espécie Staphylococcus aureus. Sendo 
a amostra coagulase negativa, quando submetida ao teste de susceptibilidade contra novobiocina, foi visto 
formação de halo de inibição, entretanto, houve leve crescimento bacteriano dentro do halo, o que pode ser 
sugestivo de má adsorção e distribuição da droga no meio (o disco estava levemente acizentado). O halo de 
inibição media 26 mm, portanto, considerei o teste como sensível. Sendo a amostra sensível a novobiocina, 
quando submetido ao teste da uréase, foi visto mudança da coloração do meio e, portanto, obteve resultado 
positivo,o que permite-se afirmar que a amostra trata-se da espécie Staphylococcus epidermidis. 
 
Laudo Final 
- Material Clínico: Colônias isoladas do gênero Staphylococcus em meio de cultivo – Espécie 1; 
- Quantificação: 3+ 
- Morfologia: Cocos; 
- Agrupamento: Dispostos em cachos 
- Reação Tintorial: Gram positivos; 
- Teste Catalase: Positivo 
- Agar Hipertônico Manitol: Negativo 
- Teste DNAse: Negativo 
- TSA Novobiocina: Sensível 
- Teste Urease: Positivo 
 
Conclusão: Trata-se da espécie de Staphylococcus epidermidis na amostra analisada. 
Referências Bibliografias 
- MADIGAN, Michael T. et al. Microbiologia de Brock. 14. ed. Porto Alegre: ArtMed, 2016. 
- ANVISA; http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/microbiologia/mod_5_2004.pdf 
- SCIELO; http://www.scielo.br/pdf/jbpml/v45n5/v45n5a04.pdf