Meios_de_cultura

Prévia do material em texto

12/03/2015
1
Disciplina: Bacteriologia clínica
Meios de cultura
Profª Drª Ana Paula Rocha 
profanapaularocha@outlook.com
Fevereiro/2015
Meios de cultura
Soluções nutrientes utilizadas para promover o crescimento de
microrganismos em laboratório.
Inóculo: microrganismos que são colocados em um meio de
cultura para iniciar o crescimento.
Cultura: microrganismos que crescem e se multiplicam nos meios
de cultura.
Microrganismos em meio de cultura
Meio de cultura satisfatório
Deverá conter
Em certos casos
§ Crescimento e multiplicação
§ Síntese de seus próprios monômeros
§ Fonte de carbono
§ Nitrogênio
§ Sais inorgânicos
§ Vitaminas (tiamina, biotina, cobalamina...)
§ Outros fatores de crescimento
§ (Aminoácidos, purinas, pirimidinas)
Meios
de 
Cultura
Quimicamente definidosQuimicamente definidosQuimicamente definidosQuimicamente definidos
Quantidades precisas de compostos
químicos inorgânicos ou orgânicos
altamente purificados, adicionados a
água destilada.
Complexos (ou indefinidos):Complexos (ou indefinidos):Complexos (ou indefinidos):Complexos (ou indefinidos):
Não se conhece a composição precisa
de alguns componentes.
Empregam produtos de digestão da
caseína (proteína do leite), de carne,
de soja, de leveduras, extratos de
plantas, entre outros....
Meios de cultura comerciais
Contém todos os componentes desejados, na forma
liofilizada.
Adiciona-se água destilada.
Esteriliza-se* 121ºC durante 20 minutos.
Distribui-se em tubos ou placas de Petri estéreis.
Armazena-se em geladeira embaladas em sacos plásticos
para diminuir a desidratação.
* Alguns meios não suportam autoclavação.
12/03/2015
2
Meios de Cultura
Quanto à consistência os meios de cultura podem ser
líquido, semi-sólido e sólido.
Meio líquido à Os nutrientes estão dissolvidos em
solução aquosa. São os caldos.
Meio semi sólido à Possui na sua composição além dos
nutrientes, ágar (polissacarídeo extraído de algas marinhas)
a 0,5%.
Meio sólido à Possui na sua composição nutrientes e
um teor de ágar que varia de 1 a 2%. Apresentado em
placas ou tubos inclinados ou não.
Meios de Cultura
Quanto à função o meio de cultivo pode ser:
Enriquecedor ou enriquecido
Seletivo
Diferenciador
Transporte e conservação
Meio enriquecedor ou enriquecido
É aquele que permite o crescimento de microrganismos
exigentes que necessitam de fatores de crescimento.
É suplementado com sangue, soro, suplementos vitamínicos
e extrato de levedura para isolar microrganismos exigentes.
Ex: Ágar sangue (ágar Mueller Hinton suplementado com 5%
de sangue de carneiro), ágar chocolate, BHI (Brain heart
infusion).
Ágar sangue – Padrões de hemólise Meio enriquecedor ou enriquecido
Ágar chocolate
É amplamente utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes
(Haemophilus spp., Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e Moraxella
spp), embora cresçam nesse meio quase todos os tipos de
microrganismos.
 À base do meio é adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho e
levado para “achocolatar” em banho-maria a 80-85°C por 15 minutos, o
que faz com que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina,
compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos
exigentes.
12/03/2015
3
Meio seletivo
Favorece o crescimento da bactéria de interesse impedindo o
crescimento de outras bactérias.
Inibidores: substâncias capazes de inibir algumas bactérias
que não são de interesse.
Corantes: verde brilhante, eosina, cristal violeta...
Metais pesados: Bismuto;
Substâncias químicas: azida, citrato, desoxicolato, selenito
e álcool feniletílico...
Agentes antimicrobianos: vancomicina, cloranfenicol
Meio hipertônico: alta concentração de sal (7,5%)
Meio diferencial
Utilizado para fácil detecção da colônia da bactéria de interesse
quando existem outras bactérias crescendo na mesma placa do meio.
Substâncias utilizadas como indicadores de atividade enzimáticas
que auxiliam na identificação:
Indicadores de pH: fucsina, azul de metileno, vermelho
neutro, vermelho de fenol e púrpura de bromocresol à Medem
as variações de pH que resultam do metabolismo bacteriano de
certos substratos.
Indicadores diversos: detectam produtos bacterianos
específicos. Ex.: íons ferro e ferroso para a detecção de sulfato de
hidrogênio.
Meio seletivo e diferencial
Muito utilizado na rotina laboratorial
Exemplo: Ágar MacConkey – Seletivo e Diferencial
Seletivo: Cristal violeta e sais biliares – inibem bactérias
Gram positivas;
Diferencial:
Possui indicador de pH - Vermelho neutro: quando o
meio fica ácido a cor fica rosa.
Possui lactose que a bactéria pode degradar (fermentar)
produzindo ácido que diminui o pH do meio.
Ágar MacConkey
Cultura Mista
1. Lactose –
2. Lactose +
1 2
Meio seletivo e diferencial
Exemplo: Ágar manitol hipertônico
Indicador de pH - vermelho de fenol
NaCl 7,5% - Inibidor de algumas Gram positivas e das
Gram negativas
Manitol - Manitol +
Staphylococcus epidermidis Staphylococcus aureus
Meio seletivo e diferencial
Exemplo: E.M.B. (Eosina Azul de metileno)
Para isolamento de Enterobactérias (Gram negativos)
Corantes (Eosina e Azul de metileno) à Indicadores de
organismos fermentadores da lactose e são inibidores de
Gram positivos
12/03/2015
4
Meio seletivo e diferencial
Exemplo: Ágar Salmonella/Shigella
Indicador de pH - vermelho de fenol
NaCl 7,5% - Inibidor de algumas Gram positivas e das
Gram negativas
Meio de enriquecimento seletivo
Incrementa o crescimento de certas espécies bacterianas ao
mesmo tempo que inibe o desenvolvimento de microrganismos
que não sejam de interesse.
Semelhante ao seletivo, mas suplementado por nutrientes
especiais, com a característica de aumentar o número da
bactéria de interesse tornando-a detectável.
Ex.: Caldo tetrationato e Caldo selenito.
Meios de transporte e conservação
São constituídos essencialmente de uma solução de tampão,
isento de carboidratos, peptonas e outros nutrientes e fatores de
crescimento, formulado para conservar a viabilidade das bactérias
durante o transporte sem permitir a multiplicação das mesmas.
Exemplos:
Meio de transporte Cary Blair à Transporte de material fecal e
consequente conservação dos microrganismos.
Salina tamponada à Meio líquido tamponado que mantém a
bactéria viável à Meio de transporte de fezes.
Meios de transporte e conservação
Meio Stuart à A carência de uma fonte de nitrogênio impede
consideravelmente a multiplicação de microrganismos e a
composição nutritiva garante a sobrevivência deles.
 Transporte de diversos materiais e consequente conservação
dos microrganismos. Conservação de micro-organismos
patogênicos como: Haemophilus spp., Streptococcus pneumoniae,
Salmonella spp., Shigella spp. entre outros.
Meios de transporte e conservação
Ágar nutriente à É um meio relativamente simples, de fácil
preparação e barato, muito usado nos procedimentos do
laboratório de Microbiologia.
Pode ser utilizado para análise de água, alimentos e leite como
meio para cultivo preliminar das amostras submetidas a exames
bacteriológicos e isolamento de organismos para culturas puras.
 Uso mais frequente é para a conservação e manutenção de
culturas em temperatura ambiente nesse Ágar, como método
opcional para os laboratórios que não dispõem do método da crio
conservação (congelamento das cepas em freezer à – 70ºC).
12/03/2015
5
Técnicas de semeadura
Isolamento de colônias para posteriormente obter cultura pura
Objetivo à Diminuir a população microbiana, assim as células
individuais estarão localizadas a uma certa distância umas das outras.
Para obter uma cultura pura, uma colônia individual é transferida
do meio para outro em placa ou tubo.
Zona asséptica/De segurança
Métodos de isolamento de microrganismos
Espalhamentoem placa
Alça Drigalski
12/03/2015
6
Métodos de isolamento de microrganismos
Esgotamento por estrias
Métodos de isolamento de microrganismos
Esgotamento por estrias
Métodos de isolamento de microrganismos
Esgotamento por estrias