meios de cultura

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MEIOS DE CULTURA DE 
MICRORGANISMOS
Prof. Mirian Coelho de Assis
Disciplina Microbiologia Básica
 
Meios de Cultura
- Conjunto de substâncias, formuladas de maneira adequada, capazes de promover o 
crescimento bacteriano, em condições de laboratório.
- A maioria das bactérias pode ser cultivada em laboratório, utilizando-se meios 
nutrientes;
- Diferentes espécies de bactérias, variam extensivamente quanto as exigências 
mínimas de substâncias nutrientes;
Meios de Cultura
Características Básicas dos Meios de 
Cultura:
Fonte de Carbono e Nitrogênio;
Fonte de Energia;
Sais Minerais;
Fatores de Crescimento;
Condições Físicas;
Esterilização.
MEIOS DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA
SÓLIDOS
- Usa ágar, um polímero de galactose como agente solidificante na 
concentração de 1,35 a 2,0%
- Funde-se à 100ºC, Líquido à 40ºC e sólido à 37ºC
- São feitos em frascos, placas de petri e tubos de ensaio.
SEMI-SÓLIDOS
- Usa ágar, como agente solidificante na concentração de 0,2 à 0,75%
.- Funde-se à 100ºC, Líquido à 40ºC e Semi-sólido à 37ºC
.- São feitos em tubos de ensaio
 
MEIOS DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA
LÍQUIDOS
- São os meios isentos de ágar.
- São sempre líquidos mesmo até a 37ºC e em temperaturas 
inferiores.
- São feitos em tubos de ensaio.
MEIOS DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA
Seleção dos Meios de Cultura:
A escolha dos meios de cultura, para o processamento inicial das 
amostras é muito importante e está condicionada à flora patogênica 
desse local;
Em geral é usado mais de um tipo de meio, no sentido de fornecer 
condições de crescimento a todos os patógenos possíveis de estarem 
presentes;
Seleção dos Meios de Cultura:
Para cada caso em particular, existem os meios utilizados 
rotineiramente na semeadura primária;
Atualmente, o procedimento mais utilizado é a aquisição de meios 
pré-fabricados e fornecidos de forma desidratada, onde é necessário 
apenas a pesagem criteriosa da quantidade necessária ao volume 
desejado, seguido de dissolução e esterilização.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS COMPLEXOS
- São meios quimicamente indefinidos, mas tem como função similar ao 
ambiente natural da bactéria.Ex: Ágar sangue, Ágar chocolate.
MEIOS SINTÉTICOS
- São meios de composição química conhecida. São utilizados para estudo 
de necessidades nutricionais de determinadas bactérias. Ex: Meio para 
micobactérias.
MEIOS DIFERENCIAIS
- São meios que permitem a distinção (diferenciação) entre dois 
ou mais tipos de bactérias pelas simples observação das características 
apresentadas pelas suas colônias que neles se desenvolvem. 
- Os meios diferenciais permitem o crescimento de várias espécies ao mesmo 
tempo, que facilita a discriminação entre os diferentes microrganismos.
- Exemplo: Mac Conkey: Permite a distinção entre bactérias fermentadoras da 
lactose (lactose positiva - apresenta colônias rosa) e 
bactérias não fermentadora (lactose negativa - apresenta colônias incolor)
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS SELETIVOS
- São meios cuja composição promovem e/ou inibem o crescimento de um 
determinado microrganismo ou grupo de microrganismos. Os meios seletivos 
proporcionam o meio pelo qual podemos isolar uma determinada 
espécie ou categoria de bactérias.
- São usadas substâncias seletivas como os corantes tais como cristal violeta, 
azul de metileno, eosina e verde brilhante.
- Ex. MacConkey além de seus nutrientes contém cristal violeta e sais biliares 
que inibe o crescimento de bactérias Gram- positivas e permitindo o 
crescimento de Gram-negativas.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DE ENRIQUECIMENTO
- São meios utilizados para isolar um microrganismo de um meio em que 
está presente em pequena quantidade.
- São meios enriquecidos com sangue, soro ou outros nutrientes.
- Ex: Ágar sangue, Ágar chocolate.
MEIOS DE TRANSPORTE
- São meios utilizados para o transporte e manutenção de amostras 
biológicas como fezes e secreções.
- São meios inertes, pois, permitem a viabilidade da maioria dos patógenos 
sem alterar a sua concentração.
- Exemplo: Meio de Stuart ou Amies usado para o transporte com swabs. 
Exemplo: Meio Cary-Blair e salina glicerinada tamponada útil no transporte 
de fezes para o isolamento de shigella e Salmonella.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DE MANUTENÇÃO
- São meios utilizados para a preservação das bactérias para a realização de 
exames complementares para estudos futuros como pesquisa clínica, 
epidemiológica ou educacional.
- Exemplo: Caldo TSB, caldo nutriente, água destilada.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
- Curto período de tempo: temperaturas de 2 a 8ºC ou de 4 à 10ºC 
(refrigerador): duração por semanas. Fazer subculturas em caldo TSB ou 
caldo nutriente.
- Longo período de tempo:temperaturas de -70 à -196ºC.
- Duração por anos (1 até 10 anos).- Nitrogênio líquido: (-196ºC )-
- Freezers: (-70 à -120ºC) temperatura ultra baixa.
- Liofilização: congelamento à seco.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DE IDENTIFICAÇÃO
- São meios utilizados na identificação das bactérias 
Gram-positivas e Gram-negativas.
- Exemplos: EPM (fermentação da glicose e produção de gás), MILI testes 
de motilidade (indol e descarboxilação da lisina) para identificação de 
Enterobactérias (Gram-negativas) e 
Rugai Ágar Bile esculina. Identificação de Gram-positivas.
CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO:
- o crescimento de bactérias é visualizado pela formação de colônias.
MEIO SEMI-SÓLIDO:
- o crescimento de bactérias é visualizado pela 
turvação.Meio muito utilizado para verificar a motilidade (movimento) da 
bactéria.
MEIO LÍQUIDO:
- o crescimento de bactérias é visualizado pela turvação do meio.
MEIO SÓLIDO
- COLÔNIAS:
- são milhares de células bacterianas derivadas de uma única célula 
bacteriana semeada na superfície do ágar.
- TEMPO PARA VISUALIZAÇÃO DAS COLÔNIAS:
- Maioria dos microrganismos cresce de 12 à 48 horas.- Outros exigem 
semanas e até meses.
CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO
- Exemplos: Ágar Sangue, Ágar chocolate, Ágar MacConkey, Ágar SS 
(Salmonela-Shigella), Ágar VB (Verde-Brilhante), Ágar CLED (Cisteína, 
Lactose e Eletrólitos Deficientes), Ágar Base, Ágar Citrato de Simmons, 
Ágar Nutriente, Ágar TSI (Triplice Açúcar e Ferro), Ágar Müller Hinton, etc...
MEIO SEMI-SÓLIDO 
- Exemplos: Ágar SIM (Motilidade Indol Sulfeto) etc....
MEIO LÍQUIDO 
- Exemplos: BHI (Infusão de cérebro e coração), Tetrationato, Selenito, 
Uréia, etc...
CRESCIMENTO MICROBIANO
Presença / ausência de E.coli e coliformes 
 em amostras de água 
Técnica líquida.
Aparência típica de microrganismos 
E.coli → Liquido azul para Verde 
Coliformes Outros → líquido amarelo
AquaCHROM ™
CHROMagar Orientação ™
Para o isolamento e diferenciação de 
patógenos do trato urinário. 
Aparência típica de microrganismos 
E.coli → vermelho
Enterococcus → azul turquesa
Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter → azul 
metálico 
Proteus → halo marrom
E.coli CHROMagar ™
CHROMagar ™ ECC
Para a detecção simultânea e enumeração 
de E. coli e outros coliformes em amostras 
de alimentos ou água. 
Aparência típica de microrganismos
E.coli → Azul
Outros Coliformes → Vermelho
Outras bactérias → incolores ou inibida
Para a detecção e enumeração de E.coli 
em amostras de alimentos e água.
Aparência típica de microrganismos 
E.coli → azul
Outras bactérias gram negativas → incolor 
Gram positivos → inibidos
CHROMagar ECC ™ Liquid
CHROMagar Salmonella ™Plus
Para a detecção simultânea e enumeração 
de Paratyphi e Salmonella lactose positiva 
agora é necessário em microbiologia de 
alimentos pela norma ISO 6579:2002. 
Aparência típica de microrganismos 
Salmonella (incluindo S. Typhi, S. 
A Paratyphi e Salmonella lactose positiva)
→ Mauve
Para a detecção simultânea e 
enumeração de E. coli e outros coliformes 
em amostras de alimentos ou água.
Aparência típica de microrganismosE.coli → Azul
Coliformes Outros → Vermelho 
Outras bactérias → incolores ou 
inibida.
Exemplos de meios específicos
■ Agar Batata – Leveduras
■ Agar Bismuto Sulfito – 
Salmonella spp (centro 
negro, borda clara e brilho 
metálico)
Exemplos de meios específicos
■ Ágar Cled – Gran Positivo e 
Gran Negativo
■ EMB (Eosina Azul de 
Metileno) – Seletivo para Gran 
Negativo
■ Agar Loeffler – isolamento de 
Corynebacterium diphtheriae
CONDIÇÕES FÍSICAS PARA A CULTURA 
DAS BACTÉRIAS
- TEMPERATURA
- pH
- ATMOSFERA GASOSA
- PRESSÃO OSMÓTICA
- PRESSÃO HIDROSTÁTICA
- LUZ
TEMPERATURA
- Psicotróficos: 0 à 7ºC – Comum em contaminação de laticinios 
(Aeromonas, Klebsiella, Pseudomonas, Staphylococcus, Vibrio ) 
- Psicrófilos: 0 à 20ºC - ambientes marinhos 
- Mesófilos: 20 à 45°C - bolores e leveduras 
- Termófilos: 45 à 90°C – Bacillus e Clostridium
- A maioria são mesófilas.- Temperatura ótima: 36,5 a 37°C em 
estufa bacteriológica.
TEMPERATURA
- pH (potencial Hidrogenionico)
- Acidófilos: pH 0,1 à 5,4 - Bactérias láticas, acéticas,
Bacillo, Clostridium)
- Neutrófilos: pH 5,4 à 8,5 (estreptococos )
- Alcalófilas: ph 7,0 à 11,5 
- A maioria na faixa de 4,0 a 9,0. Ideal: próximo da neutralidade 6,8 a 7,2
PRESSÃO OSMÓTICA
- Meios hipertônicos: as bactérias perdem água e 
sofrem plasmólise ou enrugamento da célula. 
- Meios isotônicos: concentrações iguais, é o mais 
recomendado.
- Meios hipotônicos: as células ganham água e 
sofrem lise.
LUZ
- Bactérias fotossintetizantes – Cianobactérias, Deinococcus e 
Thermus
- Bactérias fotossensíveis. Streptococcus mutans causador da cárie
PRESSÃO HIDROSTÁTICA
- Água dos oceanos e lagos exercem pressão hidrostática.
- Bactérias barófilas: vivem em alta pressão profundidade.
ATMOSFERA GASOSA
- Microrganismos aeróbios: 21% de oxigênio 
- Jarra de microaerofilia para microrganismos que necessitam de 
CO2.
- Microrganimos anaeróbios facultativos: crescem na presença de ar 
ou anaeróbiose.
- Microrganimos microaerófilos: Não resistem á níveis de oxigênio 
(1-15%).
TEMPO
- Aumento no número da população na cultura: 1→2→4→8→16... 
Progressão geométrica : 1→2¹→2² →2³ →24 → ... 2n 
- n = número de gerações, portanto, 2n = número total de células em 
uma cultura.
- De 30 em 30 minutos para cada geração.
- PERÍODO DE INCUBAÇÃO: 24 (trilhões) a 48 horas em estufa 
bacterilógica.