Imuno unidade 3

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Questões sobre Técnicas de Imunodiagnóstico 
 
1- Explique uma reação de aglutinação direta e uma indireta. Cite exemplos de cada 
uma 
A aglutinação é caracterizada pela formação de agregados visíveis como resultado da 
interação de anticorpos específicos e partículas insolúveis que contém determinantes 
antigênicos na superfície. 
TESTE DE AGLUTINAÇÃO DIRETA: Ac + Ag = Complexo precipitado. ocorre com 
partículas que apresentam determinantes antigênicos naturais em sua superfície. Ex.: 
Tipagem sanguínea, Toxoplasmose, Salmoneloses, Tripanossomíase. 
 
TESTE DE AGLUTINAÇÃO INDIRETA: (Ag + Partícula Inerte) + Ac = utiliza-se partículas 
inertes (ex: látex) ou células antigenicamente não relacionada (ex: hemácia de galinha) 
adsorvidas (ligadas) com os antígenos solúveis 
 
2- O que é precipitação? Explique o teste de imunodifusão radial, citando exemplo de 
Ag que podem ser dosados por esse teste. Entre aglutinação direta e precipitação, 
qual é mais sensível? O que significa essa sensibilidade? 
 
É geralmente um teste simples, de fácil execução e baixo custo, baseada na presença de 
precipitados visíveis formados pela atração Ag-Ac. teste de imunodifusão radial simples 
permite determinar a concentração de uma amostra de antígeno, é um teste no qual no qual 
os reagentes (Ag e Ac) se misturam por difusão, esses testes são utilizado para a detecção 
de antígenos solúveis (proteínas, glicoproteínas).Teste de aglutinação é altamente sensível, 
utilizado no diagnóstico de vírus, bactérias, protozoários e fungos; doenças auto-imunes; 
detecção de hormônios e tipagem de grupos sanguíneos. De fácil execução (leitura visual) e 
baixo custo, apresenta boa especificidade e reprodutibilidade. Tem baixa sensibilidade ou 
seja necessita de uma quantidade de Ac 500 vezes menor (partículas amplificam a reação) 
que a precipitação e pouca estabilidade Ag-Ac. 
 
3- Explique o teste de imunofluorescência direta e indireta. Dê exemplos de doenças 
diagnosticadas por cada um desses testes. 
O teste de imunofluorescência direta se trata da pesquisa do Ag em substrato particulado 
(células ou tecidos), fixados em lâmina, utilizando Ac específico marcado com moléculas 
reveladoras chamadas fluorocromos. Aplicações: Detecção direta de microrganismos 
(secreções, urina, cortes de tecidos). Doenças diagnosticadas: estreptococos, bacilo 
diftérico, clamídea, E. coli 
 
O teste de imunofluorescência indireta se trata da pesquisa de Ac no soro do paciente. 
Aplicações: detecção de anticorpos específicos contra diversos microrganismos. Doenças 
diagnosticadas: diagnóstico sorológico da toxoplasmose, sífilis, doença de Chagas, LES. 
 
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4- Discuta sobre a aplicação do teste de imunofluorescência indireta no diagnóstico 
de doenças infecciosas de transmissão congênitas como rubéola e sífilis 
O teste de imunofluorescência indireta detecta a presença de anticorpos no soro contra 
determinado antígeno. Deste modo, ele pode ser aplicado no diagnóstico de doenças 
infecciosas de transmissão congênita, já que existe a transferência de anticorpos maternos 
via placenta. 
 
5-Explique a citometria de fluxo e sua aplicação para a contagem de linfócitos T CD4 
e CD8. 
A citometria de fluxo é comumente usada para coloração da célula com marcadores 
fluorescentes que são específicos para aquelas moléculas e medida da quantidade de 
fluorescência emitida pela célula. Ela pode detectar a fluorescência de células individuais 
em uma suspensão e, assim, determinar o número de células que expressam a molécula à 
qual o marcador fluorescente se liga. Sendo assim, ela é uma boa técnica para realizar a 
contagem de células TCD4 e TCD8 em indivíduos com AIDS para avaliação do estado de 
saúde. 
 
6-Explique o teste de ELISA indireto. Em que tipo de patologia o teste pode ser 
aplicado? 
Para realizar o ELISA indireto, os poços da placa de ensaio são revestidos com o antígeno 
de interesse. Para início dos testes, os poços são preenchidos com diferentes diluições do 
soro do paciente, se houver presença de anticorpos contra o antígeno, eles irão se ligar aos 
antígenos que estão fixados no fundo dos poços. Mas, apenas os anticorpos específicos ao 
antígeno se ligarão aos poços. Os poços são então lavados para remover os anticorpos que 
não se ligaram. Em seguida, é adicionada uma solução contendo anticorpo animal contra os 
anticorpos humanos. Esse segundo anticorpo é covalentemente conjugado a uma enzima. 
Os poços são lavados novamente para remover qualquer anticorpo conjugado à enzima que 
não se ligou. Para finalizar, um substrato cromogênico é adicionado, a interação entre o 
substrato e a enzima conjugada ao segundo anticorpo gera cor visível. Essa cor pode ser 
vista a olho nu ou quantificada com o leitor eletrônico da placa. O teste de ELISA é 
responsável pela detecção de diferentes doenças infecciosas, uma vez que a maioria dos 
agentes patológicos leva à produção de imunoglobulinas. Também pode ser utilizado no 
diagnóstico de doenças auto-imunes ou alergias. 
 
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Kamila joyce 
7- Explique uma reação ELISA competitivo 
O método de Elisa se baseia na identificação de anticorpos e ou antígenos, por anticorpos 
marcados com uma enzima, de maneira que esta enzima age sobre um substrato e a 
reação faz com que o cromógeno mude de cor. O produto da reação, além de colorido, é 
insolúvel para não difundir do local da formação. 
Como é feito:método competitivo é mais usado para identificação de antígenos, mas pode 
também ser empregado para a detecção de anticorpos. Neste método primeiro se adsorve o 
anticorpo no poço da microplaca. Após a adsorção do anticorpo, uma solução que 
possivelmente contém o antígeno é adicionada sobre os anticorpos adsorvidos. O próximo 
passo é adicionar o antígeno marcado com uma enzima. Os poços que não possuem o 
antígeno primário (da solução problema) aderido ao anticorpo ficam coloridos, enquanto que 
os poços que possuem antígenos aderidos aos anticorpos não mudam de cor. 
 
8-Explique a técnica de Western blotting utilizada no diagnóstico da infecção pelo 
HIV. 
Western blotting é uma técnica analítica usada para detectar proteínas específicas em uma 
dada amostra de homogeneizado de tecido ou extrato​. A técnica consiste na detecção de 
pequenas quantidades de proteínas adsorvidas em uma membrana de nitrocelulose pela 
reação com anticorpos específicos desenvolvidos para reconhecer o polipeptídeo em 
exame. O anticorpo específico é adicionada à membrana e deixado reagir por certo período 
de tempo, após o qual uma fração do anticorpo fica retida na região da membrana que 
contém o polipeptídeo específico. Em um segundo estágio, esse anticorpo adsorvido 
especificamente sobre o polipeptídeo é detectado com um anti-soro, ou seja, um anticorpo 
anti-anticorpo específico (ou segundo anticorpo/ conjugado) que foi quimicamente 
modificado pelo acoplamento covalente de uma ou mais moléculas de uma enzima. Esse 
reagente tem como função detectar o anticorpo específico e permitir a sua visualização em 
razão da atividade enzimática associada​.9-Explique o Teste de Radioalergoadsorvente (RAST). Cite um estado patológico em 
que ele é utilizado. 
Entre outros fins, permite determinar qual a substância a que a pessoa é mais alérgica, em 
caso de testes cutâneos repetidamente positivos a alergénios diferentes. Só é utilizado 
numa fase inicial de despiste ou quando não é possível recorrer aos testes cutâneos, devido 
a inflamações na pele ou à impossibilidade de interromper tratamentos com antidepressivos 
ou anti-histamínicos, por exemplo. Consiste numa análise ao sangue, para quantificar os 
anticorpos da classe IgE, libertados em reações alérgicas, face a um determinado alergénio 
ou grupo de alergénios (por exemplo, vários alimentos). Os níveis de imunoglobulina 
(anticorpos) estão, muitas vezes, elevados em pessoas que têm alergias ou asma e 
também em quem tem parasitas no intestino​. 
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Vacinas 
10-O que é imunidade ativa e como pode ser adquirida? 
A imunização ativa ocorre quando o próprio sistema imune do indivíduo, ao entrar 
em contato com uma substância estranha ao organismo, responde produzindo anticorpos e 
células imunes (linfócitos T). Os dois meios de se adquirir imunidade ativa são contraindo 
uma doença infecciosa (forma natural) e a vacinação(forma artificial). 
11-Qual é a função do adjuvante nas vacinas? 
Para que se inicie as respostas imunes contra Ag proteicos (T dependentes), usando 
as seguintes ações: 
Retarda eliminação do Ag, 
Induz expressão de moléculas coestimulatórias 
Estimula produção de citocinas (ex: IL-12) 
Problema dos adjuvantes: efeito tóxico e reações adversas 
12-Quais são as vias de inoculação das vacinas? 
As vias para a inoculação das vacinas podem ocorrer da seguinte forma: 
Sub-cutânea (SC), intramuscular (IM): resposta imune potente, imunidade sistêmica 
Oral: produção local de IgA, imunidade na porta de entrada (Sabin (VOP)=poliomielite)) 
Intravenosa (IV): Não é usada, induz ausência de resposta imune ou tolerância 
13- Discuta sobre as vacinas atenuadas. Dê exemplos. 
Constituídas de microrganismos obtidos através da seleção de cepas naturais 
(selvagens), atenuadas através de passagens em meios de cultura especiais, ou em 
diversos hospedeiros, ou por manipulação genética. Ex: Rubéola, sarampo, caxumba 
(tríplice viral), poliomielite (Sabin ), febre amarela, catapora, BCG, rotavírus. 
Provocam infecção similar à natural, em geral, induzem proteção com apenas uma 
dose, conferem imunidade de longa duração (humoral e celular) 
14-Como se apresentam os patógenos (Ag) nas vacinas inativadas? Dê exemplos 
Patógeno inativado quimicamente (formaldeído, fenol), calor ou radiação. 
Ex: raiva, gripe, cólera, coqueluche (Bordetella pertussis na DPT), hepatite A 
15- Quais são as vantagens e riscos (ou desvantagens) das vacinas atenuadas e das 
inativadas? 
Para as vacinas atenuadas a principal vantagem é a maior eficiência de atuação e a 
desvantagem é a maior indução de respostas inflamatórias locais e sistêmicas levando a 
possível possibilidade de causar a doença. 
Para as vacinas inativadas a vantagem é a menor tendência de induzir reação e a 
desvantagem é requerer doses de reforço para manutenção da imunidade. 
16-Como são preparadas as vacinas de proteínas recombinantes? Cite um exemplo 
desta vacina 
PCR do antígeno de interesse (ex: HBsAg) → Clonagem em vetor de expressão 
para bactéria, levedura, células → Transformação de bactéria, levedura com o plasmídeo → 
Purificação do antígeno recombinante → Adição de adjuvantes (ex: Hepatite B) 
 Foi apenas o que eu achei 
 
17- Discuta sobre as vacinas de polissacarídeos conjugados às proteínas. Dê 
exemplo 
Utilizam porção do microorganismo (geralmente carboidrato) conjugado a uma 
proteína carreadora 
18-O que é imunização passiva e como pode ser adquirida? 
Soroterapia: administração de soros imunes para combater infecções ou toxinas 
específicas. ​A imunização passiva é obtida pela transferência ao indivíduo de anticorpos 
produzidos por um animal ou outro ser humano. Esse tipo de imunidade produz uma rápida 
e eficiente proteção, que, contudo, é temporária, durando em média poucas semanas ou 
meses. A imunidade passiva natural é o tipo mais comum de imunidade passiva, sendo 
caracterizada pela passagem de anticorpos da mãe para o feto por meio da placenta e 
também pelo leite. A imunidade passiva artificial pode ser adquirida sob três formas 
principais: a imunoglobulina humana combinada, a imunoglobulina humana hiperimune e o 
soro heterólogo. A transfusão de sangue é uma outra forma de se adquirir imunidade 
passiva, já que, virtualmente, todos os tipos de produtos sanguíneos contêm anticorpos. 
 
19- Cite as situações em que utiliza-se soroterapia. 
Para combater infecções ou toxinas específicas, por exemplo: contra o veneno de 
animais peçonhentos, contra infecções por tétano ou contra a hepatite B. 
20- O que é soro imune homólogo e heterólogo? Cite alguns exemplos de cada tipo. 
Soros imunes homólogos: obtidos de humanos vacinados 
Anti-Hepatite B: utilizado para recém-nascidos de mães infectadas, equipe médica após 
contato com sangue de infectado, contato sexual com infectado. 
Anti-tetânico: em casos de ferimentos 
Anti-vírus da raiva + vacina: mordedura por cães possivelmente raivosos) 
Rho-Gam: mães Rh negativas após gestação de filho Rh positivo 
Soros imunes heterólogos: Ac produzidos em espécie diferente daquela em que é aplicado. 
No Brasil produzidos pelo Instituto Butantan: 
Antibotrópico: contra veneno de jararaca, jararacuçu, urutu, caiçaca, cotiara. 
Anti Crotálico: cascavel. 
Antilaquético: surucucu. 
Antielapídico: coral. 
Antibotrópico-laquético: jararaca, jararacuçu, urutu, caiçaca, cotiara e surucucu. 
Antiaracnídico: contra aranhas do gênero Phoneutria (armadeira), Loxosceles (aranha 
marrom) 
Antiescorpiônico: contra escorpiões brasileiros do gênero Tityus.. 
21- Quais são as vantagens e desvantagens da imunização ativa e passiva? 
Vantagem da imunização ativa: ​O indivíduo após o contato, seja por forma natural 
ou artificial adquirirá memória imunológica, o que já poderia ajudá-lo numa possível 
reinfecção. 
Desvantagem da imunização ativa: ​Imunização ativa pode causar febre, mal estar 
e desconforto. Algumas vacinas podem causar também dores nas juntas ou artrite 
(rubéola), convulsões, às vezes fatal (coqueluche), ou desordens neurológicas (influenza). 
Alergias ao ovo pode ser desenvolvida como consequência de vacinas virais produzidas no 
ovo (sarampo, caxumba, influenza, febre amarela). Injeções de reforço levam a efeitos 
inflamatórios mais pronunciados do que na imunização primária 
Vantagem da imunização passiva: ​ produz uma rápida e eficiente proteção 
Desvantagem da imunização passiva: ​é temporária, durando em média poucas 
semanas ou meses. 
 
 só para lembrar.