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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS FACULDADE DE BIOTECNOLOGIA JOAQUIM DA SILVA PINTO NETO BIOLOGIA CELULAR RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA II Belém/PA 2019 ✔ Introdução O DNA (ácido desoxirribonucleico) é um tipo de ácido nucleico que possui destaque por armazenar a informação genética da grande maioria dos seres vivos. Essa molécula é formada por nucleotídeos e apresenta, geralmente, a forma de uma dupla-hélice. Nos organismos eucarióticos, o DNA é encontrado no núcleo da célula, nas mitocôndrias e nos cloroplastos. Nos procariontes, o DNA está localizado em uma região que não é delimitada por membrana, denominada de nucleóide. A Extração de DNA é muitas vezes o passo inicial em muitos processos de Biologia Molecular, segmentos laboratoriais e investigações forenses. Diversos métodos foram estabelecidos para isolar as moléculas de DNA a partir de materiais biológicos como sangue, saliva, células epiteliais, urina e outros fluidos corporais. O isolamento do DNA ou RNA é um processo de extração desse material que pode ser realizado em qualquer tipo de organismo e através de diferentes tipos de amostra. ✔ Objetivo Verificar o aspecto do DNA, observar a forma que o DNA se encontra em diversos tipos de células e debater e aprofundar questões científicas relacionadas à biologia celular. ✔ Materiais, métodos e resolução das perguntas do roteiro Os materiais usados para o experimento foram a cebola e o fígado, e o procedimento para a extração de DNA dos dois é feito da mesma forma. Inicialmente foi feita a solução de lise, que é assim denominada devido a sua função de rompimento da membrana plasmática e outras membranas, é composta de ¼ de colher de sopa de NaCl; 4 colheres de sopa de detergente; 74 ml de água e depois foi misturado tudo um becker com capacidade de 100ml. O detergente permite a desestruturação das moléculas de lipídios das membranas biológicas; e o sal proporciona o ambiente favorável para a extração de DNA, neutralizando a carga negativa dos grupos fosfatos dessa molécula. O processo de maceração foi feito logo em seguida, onde o material (cebola e fígado, separadamente) foi cortado, ao máximo, por uma lâmina de bisturi e amassado até ficar consistente e o mais homogêneo possível, em seguida foi adicionado a um becker com a solução lise até completar 25 ml e, após misturado foi coado com o auxílio do funil e o papel de filtro, e a solução foi adicionada a dois tubos de vidros, fazendo uma duplicata para cada material, cebola e fígado. A duplicata foi tampada e foi levada para o banho maria à 60°C por 15 minutos, já que temperatura elevada promove agitação das moléculas, facilitando a ação do detergente. Após, foram dispostos os dois tubos para um banho em gelo, que diminuiu a temperatura do álcool e fez com que as moléculas de DNA se aglutinassem, formando uma massa filamentosa e esbranquiçada que foi possível enxergar sem muito esforço. A razão pela qual podemos observar o DNA na nossa experiência é que temos milhões de cadeias de DNA e RNA aglomerados, para além de imensas proteínas. Já a dupla hélice de cada molécula de DNA é pequena demais para se poder observar a olho nu e em um microscópio óptico. Apesar de o DNA ser uma maior molécula na célula, só pode ser visto com um microscópio eletrônico, pois, este tem um alcance superior. Figura 1: DNA extraído da cebola Figura 2: DNA extraído do fígado (Fornecida pelo autor) (Fornecida pelo autor) ✔ Conclusão Com a desnaturação de algumas proteínas nos processos citados acima, foi possível a observação do DNA emaranhado, se apresentando em uma tonalidade esbranquiçada no caso da cebola e em uma tonalidade amarelada no caso do fígado. Não foi possível a observação das hélices do material genético pois estas necessitam de aparelhos mais técnicos para serem visualizadas. O DNA é o material genético que compõe os organismos celulares e a maior partes dos vírus, o estudo deste permite a identificação de doenças e permite a sua correção, além de permitir modificações com a finalidade de melhoramento genético de espécies. ✔ Referências bibliográficas SANTOS, Vanessa Sardinha dos. "DNA"; Brasil Escola. Disponível em <https://brasilescola.uol.com.br/biologia/dna.htm>. Acesso em 01 de maio de 2019. OLIVA, Cristina. SERRANO, Maria Ilda. EXTRACÇÃO DE DNA. Disponível em <http://materiais.dbio.uevora.pt/LBM/Foco/Extraccao/Extraccao_DNA.html>. Acesso em 30 de abril de 2019. Redação Mundo Estranho. COMO FUNCIONA O MICROSCÓPIO ELETRÔNICO? Disponível em <https://super.abril.com.br/mundo-estranho/como-funciona-o-microscopio-eletronico/>. Acesso em 01 de maio de 2019. Práticas de laboratório. EXTRAÇÃO DO DNA DA CEBOLA (Allium cepa). Disponível em <http://praticasdelaboratorio.blogspot.com/2009/05/extracao-do-dna-da-cebola-allium-cepa.ht ml?m=1 >. Acesso em 01 de maio de 2019. MALACINSKI, G. M. Fundamentos de Biologia Molecular. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan. 4ªed. 2005.