Bioquímica Experimental - Curva Padrão

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Curva Padrão
Discente: Cynthia Camargos
Docente: Lídia Andreu Guillo
Disciplina: Bioquímica Experimental
Definição
A curva-padrão corresponde à relação gráfica 
entre os valores de absorbância (A) e os de 
concentração.
Definição
Com base na análise gráfica é possível verificar 
a linearidade da reação e calcular um fator de 
conversão de valores de absorbância em 
concentração.
Espectro de Absorção
Como a interação da luz com a matéria 
depende da estrutura química dos compostos, 
o espectro de absorção é uma forma de 
caracterização que permite verificar qual a 
faixa de comprimento de onda em que um dado 
composto apresenta sua maior afinidade de 
absorção.
Espectro de Absorção
Determinação do espectro de 
absorção de corantes e construção 
da curva padrão
● Determinar o espectro de absorção de 
soluções de azul de bromofenol (ABF);
● Caracterizar o comprimento de onda onde 
ocorre absorção máxima;
● Construir uma curva padrão para cada um 
dos corantes nos comprimentos de onda (λ) 
adequados.
Objetivos
Materiais
Tubos de 
ensaio
Solução de 
ABF 0,01 mg/mL
Espectrofotômetro Água
destilada
Materiais
Micropipeta Cubetas
Metodologia
● O ABF foi colocado na cubeta e mediu-se a 
absorbância nas frequências entre 460 e 640;
● Água destilada foi usada como branco.
Resultados
Resultados
Resultados
Conclusão
O pico de absorbância do ABF foi no 
comprimento de onda de 580 nm.
Determinação colorimétrica pela 
reação de biureto
Quantificar colorimetricamente a proteína 
presente em uma amostra de concentração 
desconhecida, usando os conhecimentos 
adquiridos nas aulas de espectrofotometria
Objetivos
A função do Biureto é detectar a presença de 
ligações peptídicas, sendo positiva em 
amostras com proteínas e peptídeos com 3+ 
resíduos de aa.
A intensidade da cor varia de acordo com a 
concentração de proteínas.
Reação com Biureto
Solução de 
Glicina 1%
Materiais
Tubos de 
ensaio
Água
destilada
Solução de 
Caseína 1%
Materiais
Micropipeta Cubetas EspectrofotômetroSolução de 
NaOH 1,0 
mol/L
Reativo de 
biureto (sulfato 
de cobre 0,5%)
Metodologia
● Os tubos foram numerados e a cada um 
foram aliquotados cada uma das soluções 
da seguinte forma:
Metodologia
1 mL água 
destilada
+
3 mL NaOH
+
0,4 mL 
reativo de 
biureto
0,2 mL 
caseína
+
0,8 mL água 
destilada
+
3 mL NaOH
+
0,4 mL 
reativo de 
biureto
1 mL glicina
+
3 mL NaOH
+
0,4 mL 
reativo de 
biureto
0,6 mL 
caseína
+
0,4 mL água 
destilada
+
3 mL NaOH
+
0,4 mL 
reativo de 
biureto
1 mL caseína
+
3 mL NaOH
+
0,4 mL 
reativo de 
biureto
Metodologia
● Após 15 minutos, uma amostra de cada tubo 
foi analisada em espectrofotômetro a 530 nm.
Resultados
Tubo 1 2 3 4 5
Absorbância 0,000 0,048 0,063 0,078 0,091
Resultados
Tubo 1 2 3 4 5
Absorbância 0,000 0,048 0,063 0,078 0,091
Resultados
Resultados
Resultados
No tubo 1 não ocorreu a reação, visto que a 
água destilada não continha proteínas;
No tubo 2 não ocorreu a reação, pois a Glicina é 
um aminoácido e, portanto, não possui ligações 
peptídicas.
Conclusão
A amostra com concentração desconhecida 
não foi fornecida, porém foi possível a 
construção da curva padrão.
O tubo 2 foi desconsiderado para a curva pois 
era composto de substância diferente.
Obrigada!