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BIOTERISMO CEUA – COMISSÃO DE ÉTICA NO USO DE ANIMAIS Lei Arouca - É condição indispensável para o credenciamento das instituições com atividades de ensino ou pesquisa com animais a constituição prévia de Comissões de Ética. As CEUAS são integradas por: I. Médicos veterinários e biólogos II. Docentes e pesquisadores na área específica III. I representante de sociedade protetoras de animais legalmente estabelecidas no País Cursos x Aulas Práticas Biologia, biomedicina, medicina, psicologia A utilização de animais em atividades educacionais fica restrita a: I. Estabelecimentos de ensino superior II. Estabelecimentos de educação profissional técnica de nível médio da área de biomédica Tipos de biotério - Biotério de Criação: local destinado a reprodução e manutenção de animais para fim de ensino ou pesquisa - Biotério de Manutenção: local destinado à manutenção de animais para fim de ensino ou pesquisa - Biotério de Experimentação: local destinado à manutenção de animais em experimentação por tempo superior a 12h Laboratório de Experimentação: local destinado à realização de procedimentos com animais. MODELOS ANIMAIS X AULAS PRÁTICAS Ratos, camundongos, rãs, suínos, aves e peixes Filo Chordata: animais que possuem, como características exclusivas, ao menos na fase embrionárias, a presença de notocorda, fendas branquiais na faringe e tudo nervoso dorsal único Fatores controlado no Macroambiente - Temperatura: na faixa de 22°C - Ventilação: suprir o ambiente com oxigênio, remover calor, diluir gases e remover partículas em suspensão, por exemplo, amônia. - Umidade Relativa do ar: em torno de 55% - Luz: recomenda-se 12/12 ou 10;14h de período de luz/escuridão - Ruídos Boas práticas em bioterismo/biossegurança - Treinamento: básico para o ínicio de atividade experimental - Vacinação: recomendada, por exemplo, para raiva, febre amarela, tétano - Autorização: * De acesso às instalações – pelo responsável de biotério * Para uso de animais em experimentação – autorizado pela comissão de ética - Fluxos operacionais: entrada das instalações mantidas trancadas, liberado somente entrada para autorizados - Fluxos na introdução de materiais: sala própria 3 R’s - Substituição: Substituí o modelo animal por outro que não seja animal vertebrado. (Cultura de células) - Redução: Reduzir o número de animais por aluno/pesquisador, usar quantidade estatística para dar base na quantidade ou reproduzir um protocolo que já foi usado a partir de 2008 - Aprimoramento: Aprimorar o bem-estar do animal e técnicas humanitárias. MACRO E MICRO AMBIENTE Micro é a gaiola do animal, utiliza-se maravalha para o conforto, higiene e ninho, precisa ser trocada de 3 em 3 dias. Pode-se utilizar sabugo de milho para redução de gastos. A esterilização é feita pela autoclave. Macro é a sala onde ficam os animais, a temperatura deve-se estar até 22° C , suprir o ambiente com O2 MODELO ANIMAL Porque roedores? - Facilidade de cuidar e manusear - Curto tempo de geração e de vida - Grande número de linhagens bem definidas - Riqueza de informações - Alta capacidade reprodutiva CAMUNDONGO Espécie: Mus musculus Ordem: Rodentia Características gerais: - Dócil e de fácil manipulação, - Nascem sem pelos (crescimento de pelos em uma semana), corpo avermelhado, olhos fechados (abertura em 10 dias), com peso médio de 1 a 2 g (adulto = 30 a 60g). - Com duas semanas alimentam-se de ração e desmame de 3 a 4 semanas. - Audição e olfato desenvolvidos (altamente sensíveis a ultrassom e barulhos agudos), - Visão pouco desenvolvida (retina com poucos cones, o que não lhes permite distinguir cores. - Períodos de vida: - “Neonatal” – do nascimento até 3a semana de vida - “Puberdade” – 3a semana aos dois meses completos - “Adulto” – aqueles com 3 a 12 meses - “Idoso” – fase dos 13 a 24 meses - Ciclo estral – 4 a 5 dias - Período gestacional – 19 a 21 dias - Tamanho da ninhada – 5 a 20 filhotes Identificação dos animais: - Uso de cartões nas gaiolas (linhagem, sexo, número, pesquisador, protocolo experimental). - Identificação temporária (canetas marcadoras na cauda ou cortes no pelo). - Identificação permanente com furos nas orelhas (pode ser mascarada por sinais de luta) Sexagem de camundongos Machos e fêmeas podem ser diferenciados através da observação da distância entre o ânus e a papila genital (distância anogenital): maior nos machos. RATO Espécie: Rattus norvegicus Ordem: Rodentia Comportamento: São geralmente curiosos, dóceis e, se manipulados com freqüência e gentilmente, tornam se domesticados e treinados contanto que não sejam perturbados durante esta operação. Os ratos mordem sem aviso, porém não repetidamente. Diferentemente dos camundongos, grupos do mesmo sexo podem ser alojados na mesma gaiola sem luta. São ativos primariamente durante a noite quando se alimentam. O ciclo claro é utilizado para repouso, dormida e digestão. A manipulação do animal durante a noite é mais difícil. Características gerais: - Ratos sadios vivem de 24 a 36 meses - Peso de um rato adulto = 250 a 800g. Ao nascimento pesam por volta de 5 g. - Desmame aproximadamente no 21o dia. - Possuem alta sensibilidade olfativa - Audição acentuada - Visão pobre, incapazes de detectar cores - Ciclo estral – 4 a 5 dias - Período gestacional – 20 a 23 dias (podendo prolongar-se até 30 dias) - Tamanho da ninhada – 8 a 15 filhotes COBAIA (PORQUINHO DA ÍNDIA Espécie: Cavia porcellus Ordem: Rodentia Características gerais: - Mamífero nativo da América do Sul com habitat em florestas - Dócil, de fácil manipulação e raramente mordem Nascem com pelos, olhos abertos, e capazes de comer alimentos sólidos em poucas horas após o nascimento. Cobaias como modelos animais de experimentação - Modelo de estudo em audiologia (apresenta grande bolha timpânica e fácil visualização de estruturas internas das orelhas - Estudos nutricionais - Estudos imunológicos, incluindo reações de hipersensibilidade e doenças infeccionas - Estudo dos efeitos hormonais na gestação (pode ser feito a ovariectomia) Alojamento dos animais Gaiolas de aço inox de fundo sólido ou de plástico. Podem ser criados em gaiolas não cobertas com 25 cm de altura. Identificação dos animais - Uso de cartões nas gaiolas ou descrição de um padrão de cor do animal - Identificação temporária (canetas marcadoras) - Identificação permanente nas orelhas Sexagem de cobais Pela observação da bolsa escrotal no macho COELHO Espécie de laboratório: Oryctolagus cuniculis Comportamento: - São herbívoros, excelentes animais de estimação e raramente mordem - Os coelhos toleram mais as temperaturas frias do que quente. O alojamento deve ser mantido à temperatura entre 17 e 21oC Alojamento de animais Gaiolas de aço inox ou plástico. - Tamanho da ninhada – 4 a 12 filhotes - Nascem cegos e sem pelos - O desmame acontece entre 5 a 12 semanas Coelhos como modelos animais de experimentação - Modelo de estudo para aterosclerose induzida pela dieta - Estudos dos olhos Sexagem dos coelhos Pode ser efetuada aplicando-se suave pressão digital ao longo da abertura genital. A pressão expõe a superfície da mucosa da vulva ANIMAL ORDEM ESPÉCIE CICLO ESTRA L PERÍODO GESTACIONA L CARACTERÍSTICAS CAMUNDONGO Mus musculus Rodentia 4 a 5 dias 19 a 21 dias · Nascem sem pelos corpo avermelhado, olhos fechados. Audição olfato desenvolvido ·Brigamquando estão juntos ainda mais do mesmo sexo. Uso de cartões nas Gaiolas canetas marcadoras. RATO Rattus norvegicus Rodentia 4-5 dias 20-23 dias Audição acentuada. Visão pobre, incapazes de detectar cores mesmo COBAIA Cavia porcellus Rodentia 15-17 dias 59-72 dias Nascem com pelos, olhos abertos, e capazes de comer alimentos sólidos. Alimentos com suplementa; ao de vitamina C, não tolerante a temperatura fria. Identificação temporária (canetas marcadoras COELHOS Oryctolagus cuniculis Logomorphos Ovulaçã o induzida 30-33dias Temperaturas mais frias. Indentificão com cartões ANIMAIS GNOTOBIÓTICOS Animais livres de germes para aqueles contaminados com um ou mais organismos detectáveis. Tipos: - Germ free: animal isento de qualquer organismo interno e externo. Obtido por histerectomia, criado e mantido em isolamento. Utilizados como modelos em experimentos, por exemplo, nas áreas de oncologia, imunologia e nutrição - Flora definida: animais intencionalmente inoculados com microrganismos específicos. A primeira etapa para a sua produção é obter animais germ free Animais livres de germes patogênicos SPF Originam-se de animais germ free e não apresentam microorganismos patogênicos, ou seja, possuem somente microbiota. Animais convencionais A maioria dos animais de experimentação usada ainda é criada em colônias de acasalamento convencionais. São animais com microbiota indefinida por serem mantidos em ambiente sem barreiras sanitárias rigorosas. Status genotípico (grau de definição genética) Animais heterogênicos não consanguíneos heterocruzados, heterogâmicos - OUTBRAD - Camundongo Swiss e rato Wistar - É realizado o cruzamento ao acaso - Mantém a variação genética Animais isogênicos consanguíneos, endocruzados e isogâmicos - INBRAD - Camundongo Balb/C, camundongo C57BL/6 e rato Zucker - Obtidos a partir do cruzamento entre os animais por no mínimo 20 gerações - Indice de 99% de homozigose entre os genes alelos Animais mutantes Espontâneos: camundongo NUDE, SCID Provocados: camundongos Knock-out (KO) * * Ex: IL-4 Knock-out Animais transgênicos - Realiza-se o acréscimo de genes de interesse
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