Aula 9- Antibiograma ppt (1)

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Centro Universitário Mauricio de Nassau
Disciplina de Microbiologia Clínica 
Teste de Avaliação da Resistência aos 
Antimicrobianos ( ANTIBIOGRAMA)
Recife/PE
Professora Gleiciere Maia Silva
Especialista em Microbiologia Médica e Micologia
Mestre em Biologia de Fungos
Doutoranda em Biociências e Biotecnologia em Saúde
Antibiograma
 Objetivos
➢ Conhecer como realiza o teste de antibiograma seguindo 
recomendação da ANVISA
Antibiograma
➢ Testar bactérias isoladas como causadoras de um processo 
infeccioso em seguida é verifica a sensibilidade a diversas drogas;
➢ Uma das principais e mais importantes funções do laboratório de 
bacteriologia;
➢ O laboratório tem a responsabilidade de testar e reportar os 
antimicrobianos mais apropriados para o microrganismo isolado e o 
sítio de infecção ( CLSI- Clinical and Laboratory Standards 
Institute);
Principais classes de antibióticos
Classes Subclasse Exemplos
Penicilinas 
(betalactâmicos)
Penicilinas naturais, 
resistente a 
betalactamse, 
aminopenicilinas...
Penicilina G, Oxacilina, Ampicilina, 
Amoxicilina, Piperaciclina,
Betalactâmicos + 
inibidores de 
betalactamases
Amoxicilina + ácido clavulânico, 
Piperaciclina + tazobactam...
Cefens
(betalactâmicos)
Cefalosporina de 1º 
geração
C. de 2º geração
C.de 3º geração
C. de 4º geração
1º-Cefalotina, cefazolina..
2º-Cefaclor, cefprozil, 
cefoxitina...
3º-Ceftazidima, ceftriaxona, 
cefotaxina,
4º- Cefepima
Monobactam 
(betalactâmico)
Aztreonam
Carbapenens 
(betalactâmicos)
Imipenem, meropenem e 
ertapenem
Principais classes de antibióticos
Classes Subclasses Exemplos
Aminoglicosídeos Amicacina, gentamicina, 
tobramicina, estreptomicina
Quinolonas/Fluoroquinolonas Àcido nalixídico, Ácido 
pipemídico, ciprofloxacina, 
levofloxacina, ofloxacina, 
Macrólideos Eritromicina, azitromicina, 
claritromicina..
Glicopeptídeos Vancomicina, teicoplanina
Inibidores de ácido fólico Sulfametoxazol/trimetoprima
Lincosamidas Clindamicina, Lincomicina
Antibiograma: Método da difusão em disco
➢ Metodos: Difusão em disco, microdiluição e Etest; 
➢ Amostra clínica: Amostra bacteriana viável;
➢ Placas de ágar Mueller-Hinton
➢ Processamento: 
Discos especiais de papel filtro 
impregnados com concentração padronizada 
do antibiótico são colocados sobre a placa 
de Mueller-Hinton, previamente semeados 
com suspensão padronizada do 
microrganismos. Após incubação de 18 a 24 
horas o halo de inibição é medido e 
interpretado como sensível, intermediário 
ou resistente, de acordo com critérios 
estabelecidos pelo CLSI.
Antibiograma: Método da difusão em disco
➢ Com o auxilio de uma alça tocar na superfície da placa 3 a 4 
colônias com a mesma morfologia e diluir em tubo com solução 
fisiológica de 3 a 4 ml.
➢ A solução precisa está na escala 0.5 de Mcfarland
➢ Comparar o inoculo ajustada a escala e após 15 minutos, proceder 
a semeadura com swab estéril na suspensão ajustada de forma a 
comprimir o swab na parede de tubo visando retirar o excesso do 
inoculo e semear na superfície da placas Mueller-Hunton em 3 
direções diferentes.
➢ Deixar a placa semeada e após 5 minutos colocar os discos.
Preparação do inóculo
Antibiograma: Método da difusão em disco
Preparação do inóculo
Antibiograma: Método da difusão em disco
Preparação do inóculo
Antibiograma: Método da difusão em disco
Antibiograma: Método da difusão em disco
➢ Colocar no máximo 12 discos em placas de 150 mm e não mais que 
5 em placas de 90 mm;
➢ Após colocação dos discos pressionar levemente a superfície 
de cada discos com uma pinça. Uma vez colocado o disco, não 
remover do lugar. 
Aplicação dos discos
Antibiograma: Método da difusão em disco
➢ Incubar as placas após no máximo 15 minutos após colocação dos 
discos;
➢ Tempo de incubação: 16 a 18 horas com exceção de oxacilina 
e vancomicina para Staphylococcus que deverá ser de 24 horas 
a estufa de 35ºC.
Incubação das placas
Antibiograma: Método da difusão em disco
➢ Após o período de incubação, proceder a leitura;
➢ Ler as placas e usar uma régua para verificar o tamanho dos 
halos, sob os critérios do CLSI * (sensível, intermediário ou 
resistente), utilizando uma fonte de luz sob a placa
Leitura das placas
✓Ausência do halo: Resistente
✓Presença de halo: sensibilidade ou resistência
Antibiograma: Método da difusão em disco
Leitura das placas
Medir os halos
Anotar os resultados
Consultar o CLSI
Liberação dos 
resultados: S, I ou R
Antibiograma: Método da difusão em disco
Antibiograma: Método da difusão em disco
Antibiograma: Método da difusão em disco
➢ Inóculo fora do padrão
➢ Inóculo com mais de um microrganismos
➢ Espessura do meio
➢ Armazenamento inadequado dos discos
➢ Critérios inadequados para medir os halos das drogas
Fatores que podem afetar o resultado do antibiograma
Antibiograma: Método do E-test
➢ Método quantitativo para avaliar a sensibilidade aos 
antimicrobianos.
➢ Consiste em uma fita de plástico inerte, transparente 
medindo 5.5 mm de largura
➢ De um lado da fita esta impressa uma escala de CIM em 
mcg/ml que varia de 0,016 a 256 mcg/ml ou de 0,002 a 32 
ug/ml dependendo do antibiótico. O preparo do inoculo e o 
meio de cultura utilizado é o mesmo do disco difusão
Antibiograma: Método do E-test
Antibiograma: Método do E-test
Antibiograma: Método do E-test
➢ Colocar no máximo 6 fitas por placas de 150mm e uma fita em 
placa de 90mm;
➢ As fitas são colocadas com a menor concentração de antibiótico 
no centro da placa;
➢ Uma vez colocada a fita não remover do local. 
➢ Fitas guardadas a -20ºC, quando usar remover do freezer até 
alcançar a T.A
Referências Bibliográficas
✓Microbiologia- Gerard J. Tortora.
✓ Microbiologia Ilustrada- Willian A. Strohl
✓ Procedimentos Básicos em Microbiologia Clínica- Carmen 
Oplustil et al.
✓ ANVISA
Centro Universitário Mauricio de Nassau
Disciplina de Microbiologia Clínica 
Teste de Avaliação da Resistência aos 
Antimicrobianos ( ANTIBIOGRAMA)
Recife/PE
Professora Gleiciere Maia Silva
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Mestre em Biologia de Fungos
Doutoranda em Biociências e Biotecnologia em Saúde