1 ROTEIRO ANTIBIOGRAMA

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ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 
ANTIBIOGRAMA 
 
INTRODUÇÃO 
O antibiograma é um teste laboratorial que mede a resistência bacteriana a um 
determinado grupo de antibióticos. Serve para estabelecer um tratamento específico e 
mais eficaz para um determinado agente bacteriano. As bactérias são cultivadas a partir 
de amostra de urina, sangue, escarro, líquido espinhal ou fezes, entre outras, e colocadas 
sob condições especiais dentro do laboratório. Ali, o analista clínico as expõe a diversos 
antibióticos e observa quais deles inibem a multiplicação delas. Os resultados informam 
a sensibilidade ou a resistência da bactéria isolada aos antibióticos relacionados no teste. 
Existem diversos métodos de coloração utilizados para a análise de bactérias. Colorações 
simples tornam possível a visualização das bactérias ao microscópio, mas isso não faz 
distinção entre organismos de morfologia similar. Para tanto, é necessário realizar uma 
coloração diferencial. O mais utilizado é a coloração desenvolvida por Christian Gram 
em 1884. Usando duas sequências de coloração, com diferentes corantes, este método 
permite a divisão das bactérias em 2 grandes grupos: Gram positivo e Gram negativo. A 
investigação das características morfológicas e de coloração (morfo-tintoriais) das 
bactérias é etapa inicial de grande importância no isolamento e identificação de bactérias 
de material clínico bem como de alimentos. No entanto, a identificação completa de uma 
bactéria sempre necessitará de dados fisiológicos ou genéticos da mesma. 
 
MATERIAL 
ANTIBIOGRAMA 
 Placa de Petri com ágar Mueller-Hinton 
 Placa com cultura bacteriana 
 Tubo de ensaio estéril 
 Estante para tubos de ensaio 
 Solução salina estéril 0,9% 
 Swab estéril 
 Alça de inoculação calibrada 10 ul estéril descartável 
 Tubo com solução 0,5 da escala de Mac Farland 
 Pinça 
 Régua graduada 
 Discos de antibióticos (AMPICILINA, AMOXACILINA-CLAVULANATO, OXACILINA, 
VANCOMICINA, IMIPENEM, NOVOBIOCINA) 
 Bico de Bunsen 
 Estufa 35-37°C 
 
EXECUÇÃO DA PRÁTICA 
 Fazer a desinfecção da área de trabalho e antissepsia das mãos antes e depois; 
 Trabalhar sempre na área de segurança: uma área de aproximadamente 10 cm ao 
redor da chama do bico de Bunsen; 
 Identificar a placa com o nome do grupo, data e tema da aula (fundo da placa, 
acompanhando as bordas para manter uma área bem visível); 
 Com auxílio da alça bacteriológica, coletar 1 a 3 colônias da placa com cultura 
bacteriana (pouco a pouco até ajustar a turbidez de acordo com a escala de Mac 
Farland) e transferir para o tubo com salina estéril (3 mL), agitando para difusão 
e comparar com o tubo padrão de Mac Farland; 
 Caso fique mais turvo que o padrão, pode-se começar uma nova solução em outro 
tubo ou diluir o tubo turvo com solução salina estéril; 
 Umedecer o swab estéril na solução preparada, pressionar o swab contra as 
paredes do tubo para retirar o excesso e semear na superfície do Agar Mueller-
Hinton de modo homogêneo (não deixar nenhum local da placa sem receber a 
amostra; estriar em pelo menos 3 direções, técnica Spread-plate ou distensão); 
 Nunca molhar o swab mais de uma vez para aplicar sobre o meio de cultura (uma 
única umedecida é suficiente para o teste); 
 Aguardar um tempo para que o ágar absorva o inóculo (mais ou menos 10 
minutos); 
 Com a pinça (flambada e fria) aplicar os discos de antibióticos, fazendo suave 
compressão para que os discos não caiam durante a incubação da placa. Deixar 
entre eles e deles à borda da placa um espaço não inferior a 15 mm. 
 Incubar a placa por 24 h a 35ºC. As placas devem ser incubadas invertidas, para 
evitar que o meio se desidrate e que água de condensação caia sobre a superfície 
do meio; 
 Medir com régua o diâmetro do halo de inibição, comparar com os dados da tabela 
(CLSI) e expressar seus resultados (caracterizar o resultado como sensível, 
intermediário ou resistente). 
 
Dica: assista o vídeo do link a seguir ( 
 https://www.youtube.com/watch?v=WdO66QU6CMs&t=34s) 
 
ANOTAÇÕES: 
 
 
 
 
 
https://www.youtube.com/watch?v=WdO66QU6CMs&t=34s