2020-1-Bactérias GramGram Negativas e identificação

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IDENTIFICAÇÃO
DE 
BACTÉRIAS GRAM 
NEGATIVAS
Prof. Djuli Hermes
ANÁLISES CLÍNICAS II
ENTEROBACTÉRIAS
 Baseia-se principalmente na presença ou não de
diferentes enzimas codificadas pelo material genético
dos cromossomos bacterianos.
 Estas enzimas participam do metabolismo em diversas
vias, que podem ser detectadas por meios especiais
utilizados em técnicas de cultivo in vitro.
www.anvisa.gov.br
ENTEROBACTÉRIAS
 Os substratos com os quais essas enzimas podem reagir são incorporados
no meio de cultura, junto com um indicador, que pode detectar a utilização
do substrato ou a presença de produtos metabólicos específicos.
 Selecionando-se uma série de meios que avaliem diferentes
características metabólicas dos microrganismos, é possível estabelecer
um perfil bioquímico para realizar a identificação da espécie.
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ENTEROBACTÉRIAS
 A caracterização definitiva dos membros
das Enterobacteriaceae pode requerer uma
bateria de provas bioquímicas
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LEI DAS ENTEROBACTÉRIAS
 Fermentadores da glicose
 Oxidase negativo
 Reduzem os nitratos a nitritos
 Crescem em MacConkey
Enterobactérias
 TODAS elas precisam atender os requisitos!
 Ainda são:
 Catalase positiva
 Aeróbios ou anaeróbios facultativos
 Móveis ou imóveis
 Crescem em meio comum
Principais Enterobactérias
 Escherichia coli
 Klebsiella pneumoniae
 Klebsiella oxytoca
 Proteus mirabilis
 Proteus vulgaris
 Enterobacter aerogenes
 Enterobacter cloacae
 Salmonella (sorotipos)
 Shigella
 Serratia marcescens
 Citrobacter spp
 Providencia spp
Identificação Laboratorial
Por onde começar a identificação?
 Exame macroscópico da colônia (avaliar a pureza da colônia)
 Gram – avaliar morfologia
 Testes bioquímicos
Identificação Laboratorial
 Vários tipos de UFC’s. Meio MC
Identificação Laboratorial
 Enterobactérias
 Diversos materiais para semeadura
 Mais comum: Urina
Identificação Laboratorial
 Secreções: Ágar sangue e MacConkey
 Líquidos nobres e biópsias: Ágar chocolate e
MacConkey
 „Fezes: Mac Conkey e SS. „
 Urina: CLED ou Ágar sangue e MacConkey, etc.
Identificação Laboratorial
Todas as enterobactérias preenchem os requisitos.
Entretanto, como diferenciar entre os gêneros?
TESTES BIOQUÍMICOS
TABELA DE IDENTIFICAÇÃO BIOQUIMICA
Testes bioquímicos
 Várias provas são possíveis de ser realizadas
 Diferentes níveis de complexibilidade
 Indol, Citrato, H2S, Uréia, Fenilalanina, Lisina,
Arginina, Ornitina, Motilidade são as mais
comuns
Identificação Laboratorial
 Gram negativo
 AVALIAR NO GRAM
 Fermentadores da glicose
 AVALIAR NO TSI
 Oxidase negativo
 PROVA DA OXIDASE
 Reduzem os nitratos a nitritos
 Crescem em MacConkey
Identificação Laboratorial
 Gram
 Bacilos Gram negativos
 Morfologia colonial
 Testes bioquímicos
http://pt.wikipedia.org/wiki/Ficheiro:Escherichia_coli_Gram.jpg
http://pt.wikipedia.org/wiki/Ficheiro:Escherichia_coli_Gram.jpg
Morfologia da Colônia
 Meio de eleição para identificação?
 Quais suas propriedades?
Identificação Laboratorial
 Crescimento obrigatório em MacConkey
 Lactose (+) (-)
Identificação Laboratorial
 TSI - Ferro Tríplice Açúcar
 Fermentar Glicose
TSI
 Avalia:
 Fermentação da glicose
 Fermentação da lactose
 Presença de H2S
 Presença de gás
Teste preliminar mais utilizado no mundo 
Oxidase
 Umedecer a tira de oxidase 
 Transferir algumas colônias para a tira 
 A leitura é feita em 15 segundos a 1 minuto.
E. coli
 Além de todos os requisitos,
 Lactose positiva
 Indol positivo
 Lisina positivo
 Motilidade positiva
K. pneumoniae
 Além de todos os requisitos,
 Lactose positiva
 Citrato positivo
 Ureia positivo
 Lisina positivo
Ufc mucóide
K. oxytoca
 Além de todos os requisitos
 Lactose positiva
 Citrato positivo
 Ureia positivo
 Lisina positivo
 Indol positivo (diferença da K. pneumoniae)
P. mirabilis
 Além de todos os requisitos,
 Citrato positivo
 H2S positivo
 Ureia positivo
 Fenilalanina positivo
 Ornitina positivo
 Motilidade positivo
P. vulgaris
 Além de todos os requisitos,
 Indol positivo (diferença entre P. mirabilis)
 H2S positivo
 Ureia positivo
 Fenilalanina positivo
 Motilidade positivo
Enterobacter aerogenes
 Além de todos os requisitos,
 Citrato positivo
 Lisina positivo
 Ornitina positivo
 Motilidade positivo
 Lactose positiva
Enterobacter cloacae
 Além de todos os requisitos,
 Citrato positivo
 Uréia positivo
 Arginina positivo
 Ornitina positivo
 Motilidade positivo
 Lactose positiva
Diferença para E. aerogenes
Salmonela
 Além de todos os requisitos,
 Citrato positivo
 H2s positivo
 Lisina positivo
 Arginina* (variável) positivo
 Ornitina positivo
 Motilidade positivo
 OBS: MEIO SELETIVO
 AMOSTRA?
Meio SS
Shigella
 Shigella dysenteriae
 Shigella flexneri
 Shigella boydii
 Shigella sonei (ornitina positivo)
 Além de todos os requisitos,
 Indol positivo (exceto a S. boydii 25%)
 OBS: MEIO SELETIVO
 AMOSTRA?
Serratia marcescens
 Além de todos os requisitos,
 Citrato positivo
 Lisina positivo
 Ornitina positivo
 Motilidade positivo
 Lactose lenta
Pigmento (não é no MC)
Citrobacter
 Citrobacter freundii
 Citrobacter diversus (koseri)
 Citrobacter amalonaticus
 Indol
 Citrato
 H2s
 Ureia
 Arginina
 Ornitina
 Motilidade
Difere bastante entre as espécie
Ver tabela
Providência
 Além de todos os requisitos,
 Indol positivo
 Citrato positivo
 Uréia positivo
 Fenilalanina positivo
 Motilidade positivo
Testes de Identificação
 Fermentação da glicose 
 Oxidase 
 Fermentação da lactose 
 Motilidade
 Citrato
 Descarboxilação da lisina e ornitina
 Produção de H2S 
Testes de Identificação
 Produção de CO2 
 Indol
 Urease
 Desaminação da fenilalanina
 Produção de Gelatinase ou DNAse
Bioquimismo mais utilizado
SIM (MOTILIDADE, INDOL, H2S)
 Triptofanase – metaboliza triptofânio em indol
(halo vermelho)
 Tiossulfato redutase - H2S (negra)
 Motilidade (turvação do meio)
LIA (lisina e H2S)
 Sulfato amônio férrico e Tiossulfato de sódio – H2S 
 Dextrose , Indicador de pH 
 Descarboxilação de Lisina – amina e cadaverina
 Desaminação da Lisina – ácido alfaquetocarboxílico
MIO
 Motilidade
 Indol
 Descarboxilação da Ornitina
Fenilalanina
 Desaminação da fenilalanina por via oxidativa
e formação de ácido pirúvico. 
 Cloreto férrico – fornece a cor verde oliva 
 Positiva para os gêneros:
 Proteus spp, Providência spp, Morganella
morgani. 
Uréia
 Urease (cor rosa) 
 Proteus spp – urease + 
A atividade da urease é detectada pelo 
crescimento da bactéria em meio contendo 
uréia e usando um indicador de pH, vermelho 
de fenol
Quando a uréia é hidrolisada, a amônia se 
acumula no meio e o torna alcalino. 
Ocorre aumento no pH, causando a mudança 
de cor no indicador de amarelo para rosa pink, 
indicando uma reação positiva.
A ausência de mudança na coloração indica 
um teste negativo
Uréia positivo
Citrato
 Determina a capacidade das bactérias de utilizarem o 
citrato como única fonte de carbono
 O ágar citrato de Simmons contém citrato de sódio 
como única fonte de carbono, fosfato de amônia como 
única fonte de nitrogênio e o azul de bromotimol como 
indicador de pH
Positivo
Teste do indol
 Determina a capacidade das bactérias que 
possuem a enzima triptofanase de degradar o 
triptofano, produzindo indol, ácido pirúvico e 
amônia.
 A presença de indol pode ser detectada pela 
adição do Reativo de Kovacs, ocorrendo a 
formação de um anel de coloração vermelho na 
superfície do meio, indicando uma reação 
positiva.
 A ausência de mudança de cor indica que o 
triptofano não foi hidrolisado e, portanto, a reação 
é negativa
Fermentação de lactose, 
sacarose e glicoseIndol
 Produção de gás
Caldo Lisina
Testes de Identificação
 Fermentação da glicose 
 Oxidase 
 Fermentação da lactose 
 Motilidade
 Citrato
 Descarboxilação da lisina e ornitina
 Produção de H2S 
Testes de Identificação
 Produção de CO2 
 Indol
 Urease
 Desaminação da fenilalanina
 Produção de Gelatinase ou DNAse
Kits comerciais
 EPM 
 Citrato
 MIO 
 Lisina 
 Rahmnose
EPM
 LTD
 GÁS
 GLICOSE
 TSI – Triplice –açúcar -ferro 
 Citrato – citrato
 Uréia – uréia 
 Fenilalanina – desaminação da fenilalanina
 SIM – motilidade – indol- H2S 
 MIO – motilidade – indol - H2S - ornitina
 LIA – Lisina - H2S 
Identificação bacteriana
MOTILIDADE
BIOQUIMISMO
GÁS
CITRATO
H2S
ORNITINA LISINA
URÉIA
INDOL