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DETECÇÃO COCAÍNA E DA MACONHA EM AMOSTRA DE URINA JÙNIOR, A.K.V. S; MARINHO, F.A.G. C; SOARES, J.O. S; VARGES, J.S. Faculdade Independente do Nordeste - FAINOR Av. Luis Eduardo Magalhães, 1034 – CEP 45028 - 440 – Vitória da Conquista- BA. kardekjunior@gmail.com; francellygoes@gmail.com; oliveirasaraiva13@gmail.com; jeffersonsouzavarges@gmail.com. Resumo A cocaína é um anestésico local potente estimulante do sistema nervoso central induz a euforia e a sensação de aumento de energia no usuário, o teste de triagem rápido da urina, não a necessidade de equipamentos, a cocaína pode detectar 300 mg/ml de metabólitos da cocaína na urina para as amostras positivas. Para a detecção de cocaína e seus metabólitos foi realizado o mesmo procedimento com a tira própria para teste qualitativo de cocaína. A amostra analisada não saturou os sítios de ligação dos anticorpos conjugados ao ouro na tira reativa, devido a isso foi possível observar uma linha na área teste isto ocorre devido à ausência do metabolito benzoilecgonina. O Teste de Maconha (THC) é um método de imunoensaio de ligação competitiva, fácil, rápido, de leitura visual para triagem sem a necessidade de instrumentação para se chegar a uma determinação. Os canabinóides são estimulantes do sistema nervoso central que alteram o humor e as percepções sensoriais, podem apresentar a perda de coordenação, memória curta. Altas doses poderiam desenvolver tolerâncias e dependência psicológica e levar ao abuso. Para detectar a maconha e seus metabólitos na forma qualitativa foram coletadas amostras de urina em um recipiente limpo e seco sem quaisquer conservantes e sem necessidade de preparo prévio para a coleta. A amostra analisada não se observou conjugação com antígeno imobilizado na área teste pela ligação ao conjugado de cor- anticorpo, não ocorrendo assim a formação do complexo antígeno- anticorpo e impedindo a formação de uma faixa cor de rosa. Considerando que o consumo de drogas vem crescendo nos últimos anos, torna-se imprescindível à busca por testes de análises rápidas, baixo custo, de fácil execução e que apresentem adequada confiabilidade. mailto:kardekjunior@gmail.com mailto:francellygoes@gmail.com mailto:oliveirasaraiva13@gmail.com mailto:Jeffersonsouzavarges@gmail.com Palavras-chave: Sistema Nervoso Central, Cocaína, Maconha. Summary Cocaine is a potent local anesthetic stimulant of the central nervous system induces euphoria and the feeling of increased energy in the user, urine rapid screening test, not the need for equipment, cocaine can detect 300 mg / ml metabolites of the cocaine in the urine for positive samples. For the detection of cocaine and its metabolites the same procedure was performed with the own strip for the qualitative test of cocaine. The sample analyzed did not saturate the binding sites of the gold-conjugated antibodies in the reactive strip, because of this it was possible to observe a line in the test area because of the absence of the benzoylecgonine metabolite. The Marijuana Test (THC) is an easy, fast, visual, competitive binding immunoassay method for screening without the need for instrumentation to arrive at a determination. Cannabinoids are central nervous system stimulants that alter mood and sensory perceptions, may present loss of coordination, short memory. High doses could develop tolerances and psychological dependence and lead to abuse. To detect marijuana and its metabolites in qualitative form, urine samples were collected in a clean, dry container without any preservatives and no preparation required prior to collection. The analyzed sample showed no conjugation with antigen immobilized in the test area by the binding to the antibody-color conjugate, thus not occurring the formation of the antigen- antibody complex and preventing the formation of a pink band. Considering that drug consumption has been growing in recent years, it is essential to search for quick, low cost, easy to carry out tests that have adequate reliability. Key words: Central Nervous System, Cocaine, Marijuana. 1. INTRODUÇÃO A cocaína é um alcaloide presente nas folhas de coca e é um potente estimulante do Sistema Nervoso Central (SNC) e um anestésico local. A cocaína induz a euforia e a sensação de aumento de energia no usuário; estes efeitos psicológicos são acompanhados pelo aumento do ritmo cardíaco, dilatação das pupilas, febre, tremores e sudorese. A cocaína é frequentemente auto administrada através da inalação nasal, injeção intravenosa e inalação de vapor pelo aquecimento da base livre. Ela é excretada na urina como benzoilecgonina em um tempo curto (1, 2). A benzoilecgonina tem uma meia vida biológica maior (5-8 horas) do que a cocaína (0,5 - 1,5 horas) e, geralmente, pode ser detectada 24 a 48 horas após o uso (2). O Teste de Cocaína é teste de triagem rápido da urina, sem a necessidade de equipamentos. O teste utiliza anticorpos monoclonais para detectar, de forma seletiva, os níveis elevados de metabólitos da cocaína na urina. O Teste de Cocaína pode detectar 300 ng/ml de metabólitos da cocaína na urina que é o valor de cut-off sugerido, pelo National Institute on Drug Abuse, para as amostras positivas. Os canabinóides são estimulantes do sistema nervoso central que alteram o humor e as percepções sensoriais, podem apresentar a perda de coordenação, memória curta, apresentar sintomas de ansiedade, paranoia, depressão, confusão, alucinação e ritmo cardíaco aumentado. Altas doses de THC poderiam desenvolver tolerâncias e dependência psicológica e levar ao abuso. Todas as formas de canabinóides (maconha, haxixe) são substâncias controladas e a NIDA6 recomendou que o nível de cut off para os testes de triagem de canabinóides seja de 50 ng/ml em urina. O Teste de Maconha (THC) é um método de imunoensaio de ligação competitiva, fácil, rápido, de leitura visual para triagem sem a necessidade de instrumentação para se chegar a uma determinação. 2. MATERIAS E MÉTODOS ➢ Recipiente para coleta de urina; ➢ Cronômetro; ➢ Fita teste para maconha; ➢ Fita teste para cocaína; ➢ Luvas de procedimento; ➢ EPI’s de proteção. Para detectar a maconha e seus metabólitos na forma qualitativa foram coletadas amostras de urina em um recipiente limpo e seco sem quaisquer conservantes e sem necessidade de preparo prévio para a coleta. Em seguida, e em temperatura ambiente (20-30ºC), foi retirada do tubo uma fita de testes de maconha e colocada verticalmente dentro do recipiente com urina, durante 5 segundos, tomando cuidado para não ultrapassar a marca do nível máximo indicada por setas. Esperou-se o aparecimento das linhas de demarcação C e T e após 5 minutos foi possível realizar a leitura dos resultados. É importante não ultrapassar 10 minutos. Figura 1: fitas para realizar os testes Para a detecção de cocaína e seus metabólitos foi realizado o mesmo procedimento com a tira própria para teste qualitativo de cocaína. Para realizar os testes é preciso tomar algumas precauções como: não utilizar a fita vencida; retirar a tira de sua embalagem original somente quando for realizar o teste; evitar contaminação das amostras. As amostras de urina são potencialmente infecciosas, por isso, devem ser estabelecidos métodos apropriados de manuseio, de descarte e uso adequados dos EPI’s, de acordo com as boas práticas laboratoriais. 3. RESULTADOS E DISCUSSÕES A cocaína é um alcalóide extraído das folhas de uma planta encontrada exclusivamente na América do Sul, a Erythroxylum coca. É um potente anestésico local e potente estimulante do SNC, razão pela qual é utilizada como droga de abuso. A farmacocinética dacocaína e descrita conhecidamente em três processos, absorção, distribuição, metabolização e excreção. A absorção ela acontece pela via oral, nasal, intravenosa e inalatória. Podemos destacar as via inalatoria e intravenosa como principais vias onde absorção da substancia é mais expressiva. Figura 2: folha da coca Figura 3: formula estrutural da cocaína Distribuição e metabolização são processos que ocorrem simultaneamente que em primeiro momento a substancia penetra no cérebro, e rapidamente distribuída para outros tecidos, concentrando-se no baço e rins. A cocaína é metabolizada primeiramente em metil éster ecgonina e benzoilecgonina – ambos excretados por via renal, representando 75 – 90% do metabolismo da cocaína. Também são formados, em pequena quantidade, ecgonina e norcocaína (metabólito biologicamente ativo). A metil éster ecgonina sofre ação das colinesterases (enzimas hepáticas e séricas) enquanto que a benzoilecgonina é formada por hidrólise não enzimática. A desmetilação da cocaína para formar norcocaína ocorre através do sistema oxidase de função mista hepática. A eliminação via renal, o tempo de meia-vida (T1/2) é de 0,5 a 1,5 horas para a cocaína (a meia-vida é curta, pois é rapidamente metabolizada no fígado), 3 a 4 horas para o metiléster ecgonina e de 4 a 7 horas para a benzoilecgonina. A Cannabis sativa contém em média 400 substâncias químicas e pelo menos 60 alcalóides conhecidos como canabinóides. Entre eles, o Delta-9-tetra- hidrocanabinol (THC) é uma substância química ativa fabricada pela própria maconha. O composto é altamente lipofílico e assim penetra muito fácil no sangue e pode agir produzindo mudanças na membrana celular. Metade do THC se perde na queima quando se fuma a maconha e em média 2,5 mg por cigarro são consumidos. Figura 4: Cannabis Figura 5: tetrahidrocanabidinol A absorção acontece predominantemente de duas formas: via oral e inalatória (pulmonar), sendo a via pulmonar a mais utilizada pelos usuários, por ter um início de ação rápido. A sua distribuição se da prontamente para o cérebro e outros órgãos. O THC é biotransformado no fígado pelas enzimas citocromo P450, formando um metabólito 11-hidroxi-delta-9- tetrahidrocanabidinol que é mais ativo do que o próprio THC, através da hidroxilação do carbono da posição 11; e posteriormente esta hidroxila é oxidada a um ácido carboxílico, formando 9- /carboxi-delta-9-tetrahidrocanabidinol o qual é conjugado com o ácido glicurônico e excretado na urina. A principal via de eliminação do THC é fecal (65%). A detecção da cocaína, assim como o da maconha se obteve através da técnica de imuno ensaios e cromatrografia. Os imunoensaios são métodos de elevada utilidade na detecção de substâncias em fluidos biológicos, possuindo facilidade na capacidade de analisar muitas amostras em curto espaço de tempo, alem disso este teste possui elevada sensibilidade, são de baixo custo. A combinação de imunoensaios e cromatrografia confere aos testes de detecção estudados uma melhor sensibilidade conferida pelo imunoensaio e especificidade conferida pela cromatrografia. Neste teste de imunoensaio cromatrografico ocorre ensaios competitivos, no qual a substância presente na amostra compete com uma dada substância marcada pelos sítios de ligação de um anticorpo desenvolvido especificamente para determinado composto ou metabólito. Teste da cocaína, a amostra analisada não saturou os sítios de ligação dos anticorpos conjugados ao ouro na tira reativa, devido a isso foi possível observar uma linha na área teste isto ocorre devido a ausência do metabolito benzoilecgonina, está abaixo do nível detectável (300 ng/ml). Levando em consideração que independente da presença da benzoilecgonina, uma linha vermelha na área controle sempre aparecerá. Teste da maconha, a amostra analisada não se observou conjugação com antígeno imobilizado na área teste pela ligação ao conjugado de cor-anticorpo, não ocorrendo assim a formação do complexo antígeno-anticorpo e impedindo a formação de uma faixa cor de rosa. Isso demonstra que os níveis de 9-carboxi-delta-9-tetrahidrocanabidinol na urina se apresenta menor que 50ng/ml. 4. CONSIDERAÇÕES FINAIS Considerando que o consumo de drogas vem crescendo nos últimos anos, torna-se imprescindível à busca por testes de análises rápidas, baixo custo, de fácil execução e que apresentem adequada confiabilidade analítica para serem executadas nos exames preliminares de confirmação de drogas de abuso (cocaína e maconha). Os ensaios imunocromatograficos são ensaios exclusivamente qualitativos, sendo assim uma opção viável, utilizado como técnica de triagem para análise de drogas como cocaína ou maconha, dada a maior sensibilidade, seletividade e segurança. Nesse contexto, a utilização da imunocromatografia para triagem de drogas de abuso na área da química forense é considerada como promissora, principalmente na diminuição de resultados falsos negativos em casos de amostras de cocaína ou maconha. 5. REFERÊNCIAS Alamar tecno científica LTDA. Teste de maconha (THC). Disponível em: <https://www.analitic.com.br/data/pdf/I U-Teste-de-Maconha.pdf>. Acesso em: 15/042019. Alamar tecno científica LTDA. Teste de cocaína. Disponível em: < https://www.analitic.com.br/data/pdf/IU- Teste-de-Cocaina.pdf>. Acesso em: 15/04/2019. Silva Gomes, M. Contributo da Química Forense na Detecção de https://www.analitic.com.br/data/pdf/IU-Teste-de-Maconha.pdf https://www.analitic.com.br/data/pdf/IU-Teste-de-Maconha.pdf https://www.analitic.com.br/data/pdf/IU-Teste-de-Cocaina.pdf https://www.analitic.com.br/data/pdf/IU-Teste-de-Cocaina.pdf Drogas de Abuso: Cocaína e Cannabis. 2013. 112 paginas. Universidade de Lisboa, faculdade de ciências departamento de química e bioquímica. Ferigolo, M. Signor, L. ficha técnica da cocaína: Farmacocinética. Versão 1.0, 30/08/2007.; 7-8 pag. Sousa de Pinheiro, R. L. A química forense na detecção de drogas de abuso: Maconha, 8-9 pag. Universidade Católica de Goiás/IFAR. Boehl Otero, P. Utilização de imunoensaios na detecção de substâncias psicoativas: imunocromatrografia, pag 19. Porto alegre. 2011. Figura 1. Disponível em: < https://www.analitic.com.br/data/pdf/I U-Teste-de-Maconha.pdf> Acesso em: 15/04/2019. Figura 2. Disponível em: <https://www.123rf.com/photo_1377059 4_cocaine-or-coca-or-erythroxylum- coca-vintage-engraving-old-engraved- illustration-of-a-cocaine-plant-.html> Acesso em: 15/04/2019 Figura 3. Disponível em: <https://pt.wikipedia.org/wiki/Coca%C3 %ADna>. Acesso em: 15/04/2019. Figura 4. Disponível em: <HTTPS://WWW.ISTOCKPHOTO.COM/BR/VE TOR/GR%C3%A1FICO-UM-RAMO-DA- CANNABIS-SATIVA-PLANTA-MEDICINAL- COM-FOLHAS ILUSTRA%C3%A7%C3%A3O-DE- GM1033869138-276840084> Acesso em: 15/04/2019. Figura 5. Disponível em: <https://www.fciencias.com/2014/08/14/ tetrahidrocanabinol-molecula-da- semana/> Acesso em: 15/04/2019. https://www.analitic.com.br/data/pdf/IU-Teste-de-Maconha.pdf https://www.analitic.com.br/data/pdf/IU-Teste-de-Maconha.pdf https://www.123rf.com/photo_13770594_cocaine-or-coca-or-erythroxylum-coca-vintage-engraving-old-engraved-illustration-of-a-cocaine-plant-.html https://www.123rf.com/photo_13770594_cocaine-or-coca-or-erythroxylum-coca-vintage-engraving-old-engraved-illustration-of-a-cocaine-plant-.html https://www.123rf.com/photo_13770594_cocaine-or-coca-or-erythroxylum-coca-vintage-engraving-old-engraved-illustration-of-a-cocaine-plant-.html https://www.123rf.com/photo_13770594_cocaine-or-coca-or-erythroxylum-coca-vintage-engraving-old-engraved-illustration-of-a-cocaine-plant-.htmlhttps://pt.wikipedia.org/wiki/Coca%C3%ADna https://pt.wikipedia.org/wiki/Coca%C3%ADna https://www.istockphoto.com/br/vetor/gr%C3%A1fico-um-ramo-da-cannabis-sativa-planta-medicinal-com-folhas%20ilustra%C3%A7%C3%A3o-de-gm1033869138-276840084 https://www.istockphoto.com/br/vetor/gr%C3%A1fico-um-ramo-da-cannabis-sativa-planta-medicinal-com-folhas%20ilustra%C3%A7%C3%A3o-de-gm1033869138-276840084 https://www.istockphoto.com/br/vetor/gr%C3%A1fico-um-ramo-da-cannabis-sativa-planta-medicinal-com-folhas%20ilustra%C3%A7%C3%A3o-de-gm1033869138-276840084 https://www.istockphoto.com/br/vetor/gr%C3%A1fico-um-ramo-da-cannabis-sativa-planta-medicinal-com-folhas%20ilustra%C3%A7%C3%A3o-de-gm1033869138-276840084 https://www.istockphoto.com/br/vetor/gr%C3%A1fico-um-ramo-da-cannabis-sativa-planta-medicinal-com-folhas%20ilustra%C3%A7%C3%A3o-de-gm1033869138-276840084 https://www.istockphoto.com/br/vetor/gr%C3%A1fico-um-ramo-da-cannabis-sativa-planta-medicinal-com-folhas%20ilustra%C3%A7%C3%A3o-de-gm1033869138-276840084 https://www.fciencias.com/2014/08/14/tetrahidrocanabinol-molecula-da-semana/ https://www.fciencias.com/2014/08/14/tetrahidrocanabinol-molecula-da-semana/ https://www.fciencias.com/2014/08/14/tetrahidrocanabinol-molecula-da-semana/
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