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DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO DE DOENÇAS PARASITÁRIAS PROFª RITA SPEROTTO UNIVERSIDADE DE CRUZ ALTA CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE E AGRÁRIAS DISCIPLINA DE IMUNOLOGIA CLÍNICA DOENÇA DE CHAGAS Introdução Agente etiológico: Trypanosoma cruzi FASE AGUDA: resolução espontânea e não identificada FASE CRÔNICA: 10 a 30 % com manifestações cardíacas e/ou gastro e/ou gastrointestinais anos ou décadas após infecção. DOENÇA DE CHAGAS Definição Doença infecciosa transmitida, principalmente, por inseto Hemíptero hematófago – “barbeiro” Trypanosoma cruzi Morfologia Tripomastigota sangue periférico humano e outros vertebrados Amastigota órgãos/tecidos humanos Epimastigota intestino médio do vetor Trypanosoma cruzi Patogenia Sinais aparentes: Sinal de Romaña/chagomas Manifestações clínicas: ✓ Febre ✓ Mal estar ✓ Cefaleia ✓ Enfartamento ganglionar ✓ Hepatoesplenomegalia ✓ Miocardite (ECG) ✓ Meningoencefalite Fase aguda ~10 a 15 dias Óbito 10% (crianças) Patogenia Fase crônica Indeterminada Assintomática Passada a fase aguda sintomática/assintomática (10 a 30 anos): Período silencioso - anos, décadas ............. Formas crônicas Exame clínico, ECG, RX cardíaco e digestivo normal Patogenia Fase crônica Sintomática Megas • Baixa parasitemia com lesões típicas no coração e tubo digestivo ✓ Cardiopatia chagásica crônica ✓ Megaesôfago ✓ Megacólon Diagnóstico laboratorial IDEAL no mínimo dois testes sorológicos realizados simultaneamente Por que? - Complexidade antigênica; - Falso-positivo - Falso-negativo Golden standard parasitológico técnicas hemoparasitos OMS RIFI + HAI ELISA Diagnóstico laboratorial Imunofluorescência indireta (RIFI) • Teste sensível – considerado como referência • Detecta Ac de 2 a 3 semanas após a exposição • Considerados reagentes títuIos iguais ou superiores a 1:32. • Triagem de doadores de sangue • Contudo...artesanal, subjetiva Imunofluorescência indireta (RIFI) Diagnóstico laboratorial Hemaglutinação Indireta (HAI) • Simples e de baixo custo • Resultados falso-negativos - falta de sensibilidade próxima a fase aguda da doença • Resultados falso-positivos - 2 – mercaptoetanol • São considerados reagentes títulos iguais ou superiores a 1:40. Diagnóstico laboratorial Enzimaimunoensaio (ELISA) • Fácil execução, leitura objetiva e passível de automação • Menor sensibilidade do que a imunofluorescência em títuIos de 1:40 ou menos. Western Blot (WB) = TESABLOT • Teste confirmatório • 100% sensibilidade e especificidade Interpretação dos resultados INTRODUÇÃO o Infecção parasitária cosmopolita o Agente etiológico: Toxoplasma gondii o Morfologia: TRANSMISSÃO C IC LO E V O LU TI V O MANIFESTAÇÕES CLÍNICAS Imunocompetente ≠ Imunossuprimido ≠ Congênita DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DIAGNÓSTICO LABORATORIAL Sorologia ✓ Verifica a imunidade da paciente no início da gestação ✓ Diagnostica infecção aguda ✓ Diagnostica infecção congênita Sabin Feldman Dye Test vídeo ✓ Descrito em 1948 ✓ A presença de Ac inibe a entrada do azul de metileno no parasita Parasitológico ✓ Demonstração do parasita no sangue, fluídos biológicos ou tecidos https://youtu.be/h8CVDoRP37w DIAGNÓSTICO LABORATORIAL TESTE OBSERVAÇÕES 1. DYE TEST ou SABIN FELDMAN Teste de referência 2. FIXAÇÃO DE COMPLEMENTO Baixa sensibilidade 3. HEMAGLUTINAÇÃO PASSIVA Baixo custo e execução simples Excelente para determinar prevalência 4. IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA – IgM e IgG Artesanal: adequado para rotinas menores Não é o teste ideal para medidas quantitativas 5. ELISA – IgM e IgG Automação adequados para grandes rotinas Melhores resultados quantitativos 6. TESTE DE AVIDEZ IgG 7. WESTERN BLOT Diferencia estágios da infecção DIAGNÓSTICO LABORATORIAL Sorologia • Anticorpos IgM e IgG • Avidez de IgG Anticorpos da classe IgM: • Geralmente aparecem em torno de 5 dias após o contato com o parasito, desaparecendo depois de semanas ou meses; • Em alguns casos, títulos residuais podem permanecer detectáveis por um tempo superior a 1 ano, o que invalida a presença da IgM como indicador de infecção recente. DIAGNÓSTICO LABORATORIAL Sorologia • Anticorpos IgM e IgG • Avidez de IgG Anticorpos da classe IgG: • Aparecem 1 a 2 semanas após a infecção e persistem por toda a vida; • Indicam infecção passada, afastando mulheres do risco de produzirem infecção congênita; • Mulheres com sorologia negativa devem consideradas grupo de risco e acompanhadas durante toda gestação. DIAGNÓSTICO LABORATORIAL Sorologia • Anticorpos IgM e IgG • Avidez de IgG Teste de avidez de IgG • Testes muitos sensíveis detectando a IgM residual; • Principal uso em gestantes; • Interpretação: - alta avidez(maior que 60%): infecção passada; - baixa avidez (menor que 30%): infecção recente com menos de 3 meses. DIAGNÓSTICO NO RN • IgG - pode ser materna, persistindo por até 1 ano e meio diminuindo progressivamente; • IgG - níveis elevados, criança infectada; • Diagnóstico começa da mãe, seguido de pesquisa de IgM no RN; • Placentite; • Resultado Não Reagente, não exclui infecção congênita, devido a soroconversão tardia; • Padrão ouro: PCR