Biologia Molecular_25042016 (R)

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Prática como Componente Curricular 
Biologia Molecular 
 
Enzimas de restrição 
 
As enzimas de restrição são endonucleases que clivam em sequências específicas do 
DNA. Quase todas as enzimas de restrição reconhecem sequência palíndrômicas, isto é, quando 
uma das fitas for lida de 5’  3’ e a outra no mesmo sentido, elas serão as mesmas. 
 
Exemplos: 
 
1) A enzima EcoRV reconhece a seguinte sequência: 5’ GATATC 3’ 
 3’ CTATAG 5’ 
 
2) A enzima TaqI reconhece a seguinte sequência : 5’ TCGA 3’ 
 3’ AGCT 5’ 
 
A enzima 1 foi isolada da Escherichia coli (Eco) e a enzima 2 foi isolada de Thermus 
aquaticus (Taq). A sequência reconhecida pela enzima de restrição é chamada de sítio de 
restrição. 
As enzimas de restrição são muito utilizadas em laboratórios de Biologia Molecular. 
 
Atividade 
 
A sequência abaixo foi obtida de um banco de dados que armazena sequências. Essa sequência 
é fita simples e está representada seguindo a convenção, ou seja, de 5’  3’. 
GCCTTCAATGGCAAGCGGTCTGGAATCCTACTTCTTGAATCGGCACGGTGTCATTACGGGCGGGGGCC
AGAACAACGTCCCTGGACATCACACCTAGCCCGTGCGACGGCGGAAACCTTCGCCGGCGCAGGCTTCG
ACGTGACCCTCATCGCGGAACCCTCCCCCACCCCAGTGTTGGCGTGGCTGGTGCGCTCACGGCGAATG
GACGTGGGCGTGCAGATCACCGCCTCGCACAATCGAATTCAGGACAACGGCTACAAGCTGTACCTGGAC
GGCGGCTCTCAGCTGGTCTCCCCCGCCGACCGGCAGATCGAGGAGCACATTGCCGCCCAGCCAACTGA
CGCGGCGAAGATCCCCCGCTCCGAGGCGAAGTCTGTAGACCTGTCCGTAGTCTCCGGCTATGTCACCG
AGCTAAGTACCCTGGTGGCCACCGGCCGCCAATCCGAGCTGGCGCCGCGGCGGAAGCTGAAGATCCTC
TACACCCCCATGCACGGCGTGGGCGGCAATGCCCTGGAGTGGGCCTTACGTGAATTCGGCTTCGGCAA
CGTGCACGCGGTGGCCTCGCAGCGCTGGCCGGACCCGACCTTCCCGACTGTGGACTTCCCCAACCCTG
AGGAGCCGGGTGCCACCGACGCGCTGCTGGAAGAAGCCCGCGCCATCGATGCGGACCTGCTGATCGCC
CTGGATCCGGATGCGGACC 
Sabe-se que a enzima de restrição BamHI corta um DNA fita dupla do seguinte modo e no 
seguinte sítio (veja figura). 
 
a) Quantos sítios de restrição existem nessa sequência? 
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b) Faça uma pesquisa sobre os tipos de cortes das enzimas de restrição. Descreva-os e 
classifique o corte da enzima BamHI. 
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c) O gel abaixo apresenta, na canaleta 1, um padrão de peso molecular onde as bandas 
representam sequências com 50bp, 80bp, 200bp e 1000pb. Suponha que o DNA acima tenha 
sido clivado pela enzima PvuII e represente, na canaleta 2, os fragmentos resultantes do corte. 
 1 2
 
Sugestões: 
- O Word possui ferramentas para buscar e contar palavras. 
- Pesquise qual o sítio de restrição da enzima PvuII, encontre essa sequência no DNA 
representado acima e calcule o tamanho dos fragmentos. 
- O padrão de peso molecular é composto por fragmentos de tamanhos conhecidos que são 
utilizados para descobrir o tamanho de fragmentos desconhecidos. 
- Na eletroforese em gel de agarose, os fragmentos menores migram mais rapidamente e os 
maiores, mais lentamente.