Diagnóstico por Biologia Molecular Slide

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Patologia Clínica 
Diagnóstico por Biologia Molecular
Alice Torres
Diana Miranda
Mariana Tavares
Murilo Hermerly
Orlando Carvalho
Sarah Ludwig
Prof.ª Barbara Ribeiro Duarte 
1
A BIOLOGIA MOLECULAR
Quem?
 James Watson e Francis Crick
Quando?
 1953
Como?
 Amostra tridimensional do DNA
2
A BIOLOGIA MOLECULAR
O QUE É ?
 
COMPOSIÇÃO
 Bioquímica
 Genética
 Biologia Celular
https://pngimage.net/celula-animal-png-5/
http://pluspng.com/dna-png-hd-8163.html
https://br.vexels.com/png-svg/previsualizar/159421/celula-de-modelo-de-molecula-plana
3
OS ÁCIDOS NUCLEICOS
DNA e RNA
 Nucleotídeos
Ribose
Desoxirribose
Base Nitrogenada
4
OS ÁCIDOS NUCLEICOS
DNA – Acido Desoxirribonucleico
 Função
 Armazenamento
https://pngimage.net/celula-animal-png-5/
5
OS ÁCIDOS NUCLEICOS
DNA – Acido Desoxirribonucleico
 Composição
A
T
G
C
https://brasilescola.uol.com.br/biologia/dna.htm
6
OS ÁCIDOS NUCLEICOS
RNA – Acido Ribonucleico
 Função
 Armazenamento
https://pngimage.net/celula-animal-png-5/
7
OS ÁCIDOS NUCLEICOS
RNA – Acido Ribonucleico
 Composição
A
U
G
C
https://brasilescola.uol.com.br/biologia/dna.htm
8
SÍNTESE PROTEICA
Transcrição
 RNA faz leitura do DNA
 Constrói uma fita molde RNAt
 Nesta fita a Timina é identificada como Uracila
https://www.sobiologia.com.br/conteudos/Citologia2/AcNucleico5.php
9
SÍNTESE PROTEICA
Ativação
 RNAt sai do núcleo para o citoplasma 
 Forma RNAm
http://www.biorede.pt/page.asp?id=1627
10
SÍNTESE PROTEICA
https://www.biologianet.com/biologia-celular/sintese-proteica.htm
Tradução
 RNAm é lido pelo ribossomo
 Formação de cadeia de polipeptídios
 Formação de proteínas
11
REPLICAÇÃO
 O que é? 
 Processo que separa duas fitas moldes e a partir delas produz novas fitas.
 Quem participa?
 Várias enzimas e proteínas para garantir a eficácia do mesmo. 
https://www.proenem.com.br/enem/biologia/replicacao-do-dna/
12
REPLICAÇÃO
 Como ocorre? 
 Enzima DNA helicase separa 
as fitas de DNA quebrando as 
pontes de hidrogênio;
 
 Forquilha de replicação.
https://docplayer.com.br/70210903-Replicacao-de-dna-priscila-m-m-de-leon-universidade-federal-de-pelotas-cdtec-graduacao-em-biotecnologia-disciplina-de-biologia-molecular.html
13
REPLICAÇÃO
 Como ocorre? 
 Ação da RNA polimerase em nível de DNA;
https://www.infoescola.com/genetica/replicacao/
14
REPLICAÇÃO
 Como ocorre? 
 DNA polimerase catalisa a soma de nucleotídeos tri-fosfatados no sentido 5’ para 3’ e a outra no sentido 3’ para 5’;
 A forquilha se desloca, proporcionando a síntese do restante da hélice
https://planetabiologia.com/replicacao-do-dna/
15
EXTRAÇÃO DO DNA
Isolamento do DNA 
 DNA cromossomal
 DNA plasmidal
 1 tipo por isolamento
https://sociable.co/science/personal-dna-tests-expose-relatives-genetic-data-third-party-interests/
16
PURIFICAÇÃO DO DNA
O que e?
 Divisão do DNA
 DNAses
 
Como ocorre?
 Fenol + Clorofórmio
 Desproteinização
 Ácidos nucleicos em solução aquosa
https://www.researchgate.net/figure/Figura-3-Processo-de-extracao-do-DNA-de-sangue-total_fig2_26977409
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PREPARAÇÃO DE UMA CÉLULA BACTERIANA
1° Fase
 Cultivação das bactérias no meio de cultura
 Centrifugação
https://www.prolab.com.br/blog/curiosidades/como-preparar-um-meio-de-cultura-para-bacterias-e-fungos/
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PREPARAÇÃO DE UMA CÉLULA BACTERIANA
2° Fase
 Rompimento da Célula
 Formação de estrato
3° Fase
 Tratamento dos extratos
http://portaldoprofessor.mec.gov.br/fichaTecnicaAula.html?aula=58264
19
PREPARAÇÃO DE UMA CÉLULA BACTERIANA
4° Fase
 Precipitação do DNA em solução aquosa
https://www.sarapiqua.com.br/extracao-do-dna-da-banana/
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REAÇÃO EM CADEIRA DE POLIMERASE (PCR)
O QUE É ?
 Componentes
USADO PARA ?
 Diagnóstico 
ETAPAS: 
 1º Desnaturação
 2º Anelamento
 3º Extensão ou polimerização
21
 
https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-electrophoresis/a/polymerase-chain-reaction-pcr
22
 
https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-electrophoresis/a/polymerase-chain-reaction-pcr
23
 
https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-electrophoresis/a/polymerase-chain-reaction-pcr
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PCR em Tempo Real (qPCR)
O QUE É ?
 Uma variação do PCR convencional.
USADO PARA ?
 Diagnóstico de pré disposições genéticas para determinadas doenças. Assim como amplamente utilizada para diagnostico de vírus e bactérias. 
25
qPCR 
https://kasvi.com.br/pcr-em-tempo-real-qpcr-diagnostico-doencas/
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Autor (A) - 
qPCR 
https://kasvi.com.br/pcr-em-tempo-real-qpcr-diagnostico-doencas/
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qPCR
 Com apenas um único fragmento de DNA é possível reproduzir milhões de cópias.
 
 Resultados imediatos, dispensando a eletroforese. 
 Equipamentos portáteis e com preços reduzidos. 
Identificação de vários agentes em um mesmo teste.
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qPCR 
 Não se limite, amplie seus conhecimentos!!! 
29
ELETROFORESE EM GEL DE AGAROSE
Conceito
 Objetivo
Etapas
 Preparação do gel
 Aplicação das amostras 
 Corrida Eletroforese
 
https://static.todamateria.com.br/upload/53/5f/535feb8fa08d1-dna.jpg
30
ELETROFORESE EM GEL DE AGAROSE
 Como funciona
 
https://www.euquerobiologia.com.br/2017/08/como-funciona-eletroforesehtml
31
https://www.euquerobiologia.com.br/2017/08/como-funciona-eletroforesehtml
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PLASMÍDEOS OU VETORES DE CLONAGEM 
Moléculas de DNA circular extracromossomal 
 
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PLASMÍDEOS OU VETORES DE CLONAGEM 
 Cortando e Colando o DNA
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PLASMÍDEOS OU VETORES DE CLONAGEM 
Transformação e Seleção Bacteriana
 
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PLASMÍDEOS OU VETORES DE CLONAGEM 
Cada bactéria sobrevivente dará origem a um grupo pequeno, como um ponto, ou colônia, de bactérias idênticas em que todas carregam o mesmo plasmídeo.
 
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PLASMÍDEOS OU VETORES DE CLONAGEM 
Produção de proteína
 
37
OBRIGADO!!!
38
 
 
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