Aula Espectrometria-2

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ESPECTROFOTOMETRIA
Bioquímica Aplicada – SDE3765
Lucas Nojosa Oliveira
Espectrofotometria
Medida de absorção ou transmissão de luz
medidaFótons
(luz)
Conjunto, arranjo, representação
(amplitudes ou intensidades)
• Aparelho: espectrofotômetro
• Amplamente utilizado em laboratório para análises de 
substâncias e medidas de concentrações. 
• Avaliações qualitativas e quantitativas. 
LUZ
A luz é uma forma de radiação eletromagnética que possui 
características de onda e de partícula (fóton). O movimento 
ondulatório é caracterizado pelo comprimento de onda (ʎ), o 
qual corresponde à distância linear entre duas cristas, medido em 
nanômetros (nm).
COR
A cor é uma percepção visual provocada pela ação de 
um feixe de fótons sobre células especializadas 
da retina, que transmitem, através de informação pré-
processada ao nervo óptico, impressões para o sistema 
nervoso.
ESPECTRO VISÍVEL
Espectro visível (ou espectro óptico) é a 
porção do espectro eletromagnético cuja 
radiação é composta por fótons capazes 
de sensibilizar o olho humano de uma 
pessoa normal.
COR COMPRIMETO DE 
ONDA (nm)
Vermelho 625 a 740
Laranja 590 a 625
Amarelo 565 a 590
Verde 500 a 565
Ciano 485 a 500
Azul 440 a 485
Violeta 380 a 440
http://www.sbfisica.org.br/fne/Vol8/Num1/v08n01a06.pdf
ESPECTRO VISÍVEL
http://www.sbfisica.org.br/fne/Vol8/Num1/v08n01a06.pdf
Espectrofotometria
A espectrofotometria faz parte da classe dos métodos analíticos que baseiam-se 
na interação da matéria com a energia radiante.
Luz 
incidente
Luz 
emergente • Boa sensibilidade;
• Baixo custo de análise;
• Fácil operação;
• Equipamentos robustos.
Perdas
Reflexões
Dispersão
Absorção
ESPECTROFOTÔMETRO
Aparelho que fornece, seleciona, detecta e mede a luz.
Lei de Lambert-Beer
LEI DE LAMBERT
“A intensidade da luz emitida decresce exponencialmente à medida que a espessura do 
meio absorvente aumenta aritmeticamente”. Lambert (1870)
LEI DE BEER
“A intensidade de um feixe de luz monocromático decresce exponencialmente à medida 
que a concentração da substância absorvente aumenta aritmeticamente”. Beer (1852)
Elas são tratadas simultaneamente, processo 
no qual a quantidade de luz absorvida ou 
transmitida por uma determinada solução 
depende da concentração do soluto e da 
espessura da solução.
Absorbância
O fenômeno de absorção implica que o conteúdo energético do fóton seja igual à 
quantidade de energia necessária para que a molécula ou átomo passe do estado 
fundamental para o excitado. 
• É a capacidade intrínseca dos materiais em 
absorver radiações em frequência específica
.• A absorção de luz depende basicamente 
da concentração das moléculas 
absorventes e da espessura da solução.
Absorbância e transmitância tendem a ser grandezas complementares.
Absorbância vs Transmitância
Quando um feixe de luz monocromática atravessa uma solução com moléculas 
absorventes, parte da luz é absorvida pela solução e o restante é transmitido.
Absorbância
Transmitância
 Quando excitadas pela luz, as moléculas absorventes 
passam do estado fundamental (estado energético 
mais baixo) para o estado excitado (estado 
energético mais alto).
 A intensidade da cor de uma solução é proporcional 
à concentração das moléculas absorventes de luz. 
Quanto mais concentrada for a solução, maior será a 
absorção de luz. Por outro lado, a cor da solução é 
determinada pela cor da luz transmitida.
 Uma solução aparece como branca porque 
transmite luzes de todas as cores; quando absorve 
luzes de todas as cores, a solução é preta.
• Fontes de radiação
Deve ser estável e emitir um feixe de radiação com intensidade suficiente para ser 
detectável mesmo após sua monocromação e absorção parcial.
• Seleção de comprimentos de onda 
Monocromadores permitem uma variação contínua (mínima) de comprimentos 
de onda melhorando a sensibilidade e a seletividade das medidas.
• Recipientes da amostra
As cubetas devem ser perfeitamente normais à direção do feixe incidente, de 
forma a serem minimizadas as perdas por refração,
Resolvendo problemas
Análises Quantitativas
Estima-se que, apenas no campo da saúde, 95% de todas as determinações 
quantitativas sejam feitas por espectrofotometria
Curva-padrão
A curva-padrão corresponde à relação gráfica entre os valores de absorbância 
(A) e os de concentração. Com base na análise gráfica é possível verificar a 
linearidade da reação e calcular um fator de conversão de valores de 
absorbância em concentração.
[ ] mg Abs
0 0
0,75 0,02
1,5 0,04
2,25 0,07
3 0,09
4,5 0,14
http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/absorcaodacor.html
http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/absorcaodacor.html
Análises Quantitativas
Análises Qualitativa
Varredura por todo o espectro visível a fim de encontrar o pico de 
absorção referente a molécula.