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Acadêmica: Jéssyca Sara de Col Turma: Farmácia, 7º fase ESPERMOGRAMA OBJETIVO O espermograma serve para: - Controle de vasectomia; - Verificação de fertilidade; MATERIAIS NECESSÁRIOS Estufa Estante Lâminas Lamínulas Corantes Fita de pH Banho Maria Papel Toalha Cronometro Microscópio Spray Fixador Bastão de Vidro Óleo de Imersão Micropipeta 10µL Micropipeta 20µL Micropipeta 100µL Pipeta De Pasteur Caneta Para Vidro Eosina Amarela 5% Salina Formalada 1% Câmara De Neubauer Corante Hematológico Tubo Cônico Graduado Ponteiras Azuis E Amarelas Descarte Com Água E Hipoclorito VALOR REFERÊNCIA PARA HEMÁCIAS E LEUCÓCITOS: < ou = 1000/mm3. PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO EXAME MACROSCÓPICO (DEVE SER REALIZADO DENTRO DA 1º HORA) PASSO 1 Organizar a bancada com os materiais necessários para a realização do exame macroscópico: estante, tubo cônico, fita de pH, pipeta de Pasteur, micropipeta de 1000mcg, ponteiras azuis, descarte, papel toalha e bastão de vidro. PASSO 2 Análise da Liquefação e Aparência do Ejaculado: Abrir o frasco de coleta, analisar e anotar: a cor, odor, estado de liquefação do esperma e o aspecto (deve estar homogêneo). (Verificar resultados esperados nas definições na margem esquerda). PASSO 3 Análise da Viscosidade: Com auxílio da pipeta de Pasteur ou o bastão de vidro, a amostra normal deve formar pequenas gotas discretas; e se a amostra estiver anormal, a queda formará um fio com mais de 2 cm. PASSO 4 Análise do Volume: Transferir o conteúdo de esperma do frasco de coleta para o tubo cônico graduado, tentando desperdiçar o menos possível, e sugando os restinhos do frasco com a pipeta de Pasteur se necessário. Lembrar de manusear vagarosamente pois pode formar bolhas dentro do tubo, dificultando a visibilidade correta do volume. Após fazer a transferência, anotar o volume obtido na coleta. PASSO 5 Análise do pH: Com o sêmen já transferido para um tubo cônico, utiliza-se uma fita de pH para a análise. Está fita deverá ser submersa e retirada no mesmo instante, fazendo com que seja apenas molhada pelo material, não tendo a necessidade de deixar um tempo maior em contato. Para a verificação do resultado, coloca-se a fita ao lado da escala de cores que vem na caixinha desta, e faz-se a comparação. A análise de pH deve ser realizada entre 30 a 60 minutos após a coleta, devido reações que passam a ocorrer após esse tempo. 2 O SÊMEN - Líquido espesso, que adquire aspecto gelatinoso logo após a ejaculação, e em até 60min transforma-se em líquido fluído. - Volume: VR mínimo é 1,5mL; Se o valor obtido <1,5mL, significa quadro de hipospermia. -Cor: branco acinzentado e opalescente; Menos acinzentado: concentração de espermas for muito baixa; Marro avermelhada: hemorragia; Amarelado: icterícia; -Odor: característico de hipoclorito de sódio; Odor pútrido se houver processo bacteriano agudo. -pH: VR 7,2. Se <7,2, indica obstrução dos canais seminais, e se >8,2, indica problema de próstata. OUTRAS POSSÍVEIS PROVAS -Frutose; -Ácido Cítrico -Fosfatase Ácida - Cultura de Esperma -Anticorpos anti-espermatozoides SOLUÇÃO FORMALADA 1% Utilizar 60ml de solução fisiológica e 1,5ml de formol a 40%. Caso a solução de formol tenha concentração diferente de 40%, utilizar a fórmula: C1 x V1 = C2 x V2 EXAME MICROSCÓPICO (DEVE SER REALIZADO PREFERENCIALMENTE DENTRO DA 1º HORA) PASSO 1 Prova de Vitalidade Espermática: Nesta etapa do exame faz-se a contagem relativa (%) de espermatozoides vivos e mortos, por isso deve ser realizada imediatamente após a liquefação (contando 100 espermatozoides). PROCEDIMENTO: Utiliza-se os seguintes materiais: lâminas, micropipeta 10 µL, ponteiras amarelas, corante de eosina amarela 5%, estufa, e óleo de imersão. Colocar, em uma lâmina, 10 µL de esperma + 10 µL de eosina amarela (ou eosina nigrosina), misturá-las, esperar 30 segundos, e fazer o esfregaço. Feito isso, colocar a lâmina na estufa até que seque por completo, e realizar a análise no microscópio, utilizando óleo de imersão se for necessário, contando 100 espermatozoides, classificando-os como vivos/ mortos. As células coradas em vermelho, serão as consideradas mortas; e as brancas, serão as vivas. VR: mais de 58% deverão estar vivos. PASSO 2 Morfologia: Utiliza-se os seguintes materiais: lâminas, micropipeta 10 µL, ponteiras amarelas, corante hematológico, estufa, e spray fixador. Confeccionar duas lâminas com esfregaço do esperma puro, e deixar na estufa até que seque completamente. Após completamente seco, borrifar o spray fixador, e novamente levar à estufa. Em seguida corar com corante hematológico, e realizar o exame microscópico. Nesta etapa da análise, verifica-se a morfologia dos espermatozoides, contando os normais e os com alterações de forma (cabeça, pescoço ou calda), até que cheguem em 100 para o resultado relativo. VR: Morfologia normal > ou = 30%. PASSO 3 Contagem Espermatozoides, Hemácias e Leucócitos: Utiliza-se os seguintes materiais: tubo cônico, câmara de Neubauer, lamínulas, micropipeta 100 e 10 µL, ponteiras amarelas e azuis, e salina formalada 1%. PROCEDIMENTO: Em tubo cônico, diluir o esperma 1:40 em salina formalada 1%, homogeneizando-o bem. Com auxílio da micropipeta 10 µL, preencher 3 INSTRUÇÕES PARA COLETA DE ESPERMOGRAMA -O material deve ser coletado preferencialmente no Laboratório; - Caso o paciente não consiga realizar a coleta no laboratório, poderá colher em casa e encaminhas o material para o laboratório em <60min. - O paciente deverá estar em abstinência sexual (sem ter relações sexuais) por um período de no mínimo 2 dias e no máximo 7 dias; - Para controle pós- vasectomia não será necessário abstinência sexual; - Coletar todo o material dentro do frasco tendo o cuidado de não desprezar nada; - O material deverá ser coletado por masturbação e não poderá ser utilizado nenhum creme ou preservativo; - Entregar o material imediatamente após a coleta; - Caso o paciente tenha espermocultura, deverá ser colhido em frasco estéril; a câmara de Neubauer, e deixar repousar por 5 minutos. Após esse tempo, fazer a análise microscópica, contando o nº total de espermatozóides no quadrante central, multiplicando o resultado obtido por 400000. VR: Acima de 15 milhões de espermatozóides/mL. Oligozoospermia: <15.000.000/mL. Azoospermia: ausência de espermatozoides. Para contagem por volume de quantidade por ejaculação, calcula-se o resultado dos espermatozoides/mL multiplicando pelo volume ejaculado para o exame (verificado em tubo cônico no exame macroscópico). VR: > ou = 39.000.000/ ejaculação. PASSO 4 Motilidade: Utiliza-se os seguintes materiais: lâmina, lamínula, micropipeta 10 µL, e ponteira amarela. PROCEDIMENTO: Colocar uma gota de esperma entre lâmina e lamínula, e observar no microscópico com objetiva de 400x, fazendo uma contagem relativa classificando o tipo de movimento realizado pelos gametas, que são classificados da seguinte maneira: Tipo A: Se movem rapidamente para frente; Tipo B: Se movem lentamente para frente; Tipo C: Se movem, mas sem direção certa; Tipo D: Não se movem; VR: A > 25% ou A+B>/= 32%; Astenozoospermia: A+B <32% e A < 25%.
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