Histologia e seus métodos de estudos

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Histologia é o estudo dos tecidos humanos e como esses se organizam para formar órgãos
· Há quatro tipos fundamentais: epitelial, conjuntivo, muscular e nervoso
Todo tecido é formado por células e a matriz extra celular (MEC)
· Atualmente, sabe-se que a MEC e as células possuem uma interação muito ampla, e não são mais consideradas como entidades separadas
PREPARAÇÃO DE TECIDOS PARA EXAME MICROSCÓPICO
Fixação: com o objetivo de evitar autólise ou outros processos que gerariam a perda dos tecidos, o material coletado é imerso em uma solução de agentes desnaturadores;
· Pode ser feita por métodos químicos ou, menos frequentemente, métodos físicos
· Um dos fixadores mais usados para microscopia de luz é uma solução isotônica tamponada de formaldeído a 4%
· Formaldeído e glutaraldeído são conhecidos por reagir com o grupo amina (NH2) das proteínas 
· Devido à alta resolução oferecida pelo microscópio eletrônico, torna-se necessário uma fixação dupla. Utiliza-se glutaraldeído tamponado e tetróxido de ósmio¹. 
¹o objetivo do tetróxido de ósmio é preservar e oferecer contraste entre lipídeos e proteínas.
Fixação física por congelamento: fixação a partir do congelamento do tecido seguido do corte no micrômetro.
· Uma das vantagens desse processo é seu método rápido. Sendo assim, em contextos cirúrgicos uma análise tecidual rápida pode ser efetivada.
· Além disso, ao contrário da fixação por resinas esse método mante enzimas, proteínas e lipídeos intactos, o que favorece o estudo histoquímico 
Inclusão: para se obter secções delgadas os fragmentos de tecidos precisam apresentar uma composição rígida. Para tal, são imergidos em alguma substância que lhes proporcionem essa consistência. Geralmente usa-se parafina ou uma resina plástica.
· Parafina: habitualmente usada para microscopia de luz;
· Resina: microscopia de luz e eletrônica.
Coloração: a maioria dos tecidos devem ser corados para serem estudados, pois estes, em sua maioria, são incolores.
· Basófilos: são chamados os componentes dos tecidos que interagem mais com os corantes básicos;
· Acidófilos: são chamados os componentes dos tecidos que interagem mais com os corantes ácidos.
· O azul-de-toluidina e azul-de-metileno são exemplos de corantes básicos. Os tecidos basófilos só possuem essa característica por seus componentes, em sua maioria, serem de caráter ácido.
· Por outro lado, os corantes ácidos (como a Orange-G, eosina, fucsina ácida) coram os componentes básicos do tecido. 
· Dentre todos os corantes, a combinação de Hematoxilina e Eosina (HE) é a mais usada.
 Microscopia de luz
Resolução
O que se deseja num microscópio é uma imagem aumentada e com muitos detalhes. O poder de resolução é o fator crítico para se obter uma imagem detalhada. Esse poder é definido como a menor distância entre duas células em que se pode obter uma imagem e definir as duas como unidades separadas. O poder de resolução do microscópio óptico gira em torno de 0,2 μm.
Essa resolução permite a resolução aumentada até 1000 ou 1500 vezes.
Microscopia de contraste de fase e de contraste diferencial de interferência
A microscopia de contraste permite a observação de sistemas transparentes sem o uso de corantes.
A microscopia de contraste de utiliza-se do principio da refração da luz para observar materiais transparentes, pois tecidos desviam o plano da luz em diferentes intensidades, gerando imagens mais claras ou mais escuras. Isso se torna uma ferramenta poderosa para o estudo de células vivas.
A microscopia de contraste diferencial de interferência produz uma imagem aparentemente tridimensional da célula.
 Microscopia de polarização
Quando um raio de luz passa por um filtro polarizador, eles saem em uma só direção. Outra estrutura polarizadora é colocada entre a célula observada. O efeito prático é uma imagem em que o tecido aparece iluminado sobre um fundo preto.
· A capacidade que estruturas celulares têm de girar o plano da luz é chamado de birrefringência
 
Microscopia confocal 
Devido os cortes delgados apresentarem vários planos, para gerar uma imagem mais nítida do plano que se deseja observar, uma lente que foca um plano específico e elimina os outros é utilizado para gerar nitidez a imagem.