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APOPTOSE Profa. Dra. Alyne Mara Rodrigues http://go2.wordpress.com/?id=725X1342&site=mastologia.wordpress.com&url=http://mastologia.files.wordpress.com/2008/02/apoptosis.gif&sref=http://mastologia.wordpress.com/2008/02/23/apoptose/ APOPTOSE • É a via de morte celular que é induzida por um programa intracelular altamente regulado, no qual as células destinadas a morrer ativam enzimas que degradam seu DNA e proteínas citoplasmáticas; • A membrana plasmática permanece intacta, mas sua estrutura é alterada para que a célula apoptótica se torna alvo da fagocitose; • A célula morta é eliminada rapidamente, antes que seu conteúdo possa extravasar (evitar reação inflamatória); APOPTOSE • “Morte por processo ativo no qual a célula sofre contração e condensação das suas estruturas, fragmenta-se e é fagocitada por células vizinhas o por macrófagos, não ocorrendo o processo de autólise” •Diferentemente da necrose, a célula em apoptose não sofre autólise nem ruptura da membrana; • Pode ocorrer em estados fisiológicos quanto patológicos HISTÓRICO • A morte celular programada foi descrita no século XIX, por Carl Vogt. Ele observou “destruição celular” no surgimento das vértebras em uma espécie de anuro; • Em 1863, August Weismann, descreveu o processo de “histólise” (células vacuolizadas, com núcleos condensados); • Em 1972, Andrew Wylle descreveram pela primeira vez todo o processo de apoptose. APOPTOSE X NECROSE • Os estímulos podem produzir tanto necrose quanto apoptose; • Em muitas agressões, os 2 processos coexistem; • A decisão da célula de entrar em necrose ou apoptose, depende da intensidade, da qualidade da agressão e dos receptores acionados; • Apoptose é ATP-dependente. Então, se a agressão bloquear completamente a produção de energia, a célula entrará em necrose; APOPTOSE - CAUSAS FISIOLÓGICAS • Destruição programada de células durante a embriogênese • A involução dependente de hormônios nos adultos (regressão da mama após o desmame); • Manter número constante de células em determinados tecidos; • Eliminar células alteradas; • Eliminar células que deixaram de ser necessárias APOPTOSE - CAUSAS FISIOLÓGICAS APOPTOSE - CAUSAS FISIOLÓGICAS http://www.ogrongonzo.com.br/indexaa_embriao.jpg http://images.google.com.br/imgres?imgurl=http://www.comune.ferrara.it/lipu/isola/rettili/ret_photo/girino.jpg&imgrefurl=http://www.comune.ferrara.it/lipu/isola/rettili/girin.html&h=241&w=369&sz=11&tbnid=QBnYAMgIekcJ:&tbnh=77&tbnw=118&start=1&prev=/images?q%3Dgirino%26hl%3Dpt-BR%26lr%3D http://images.google.com.br/imgres?imgurl=http://oz.irtc.org/ftp/pub/stills/1997-12-31/mama.jpg&imgrefurl=http://www.irtc.org/stills/1997-12-31.html&h=600&w=800&sz=187&tbnid=YRh1HwCGIaAJ:&tbnh=106&tbnw=141&start=1&prev=/images?q%3Dmama%2B%26hl%3Dpt-BR%26lr%3D%26sa%3DG APOPTOSE - CAUSAS PATOLÓGICAS •Pode ser desencadeada por inúmeros agentes, como: • Vírus •Hipóxia •Radicais livres •Substâncias químicas •Radiações ionizantes PATOLOGIAS ASSOCIADAS COM APOPTOSE DEFEITUOSAS E AUMENTO DA SOBREVIDA CELULAR •CÂNCER •Carcinomas com mutação do p53 •Tumores dependentes de hormônios •DOENÇAS AUTO IMUNES • Inibição da apoptose (linfócitos auto reativos) PATOLOGIAS ASSOCIADAS COM AUMENTO DA APOPTOSE E EXCESSO DE MORTE CELULAR •Doenças neurodegenerativas • Lesões isquêmicas •Destruição de células infectadas por vírus MORFOLOGIA • Encolhimento celular • Condensação da cromatina • Formação de bolhas citoplasmáticas e corpos apoptóticos • Fagocitose das células apoptóticas ou corpos celulares, geralmente por macrófagos ETAPAS A célula se encolhe e o citoplasma fica denso A cromatina se torna condensada e disposta em grumos colados à carioteca; O núcleo se fragmenta. A membrana citoplasmática emite projeções e forma brotamentos que contêm fragmentos do núcleo; Fragmentação das células em múltiplos brotos (corpos apoptóticos) Fase inicial da apoptose Início da formação dos corpos apoptóticos Células com tamanho reduzido, cromatina condensada, com formação de corpos apoptóticos CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS •Degradação de proteínas •Hidrólise das proteínas envolvendo a ativação das caspases •Decomposição do DNA • Reconhecimento Fagocitário PATOGÊNESE • Independente da causa, a apoptose resulta sempre em ativação sequencial de proteases (caspases), que são responsáveis pelas alterações morfológicas características da lesão; • A ativação das caspases pode ocorrer por: • Estimulação de receptores da membrana citoplasmática que têm domínios de morte • Aumento da permeabilidade mitocondrial, com liberação de moléculas que induzem o processo • Agentes que atuam diretamente na membrana citoplasmática (sem ter ligação com os receptores de morte) CASPASES • São proteases de cisteína e são sintetizadas sob a forma de precursores que necessitam ser clivados para adquirirem atividade proteolítica; • Inibem proteínas relacionadas com a transcrição, replicação e reparo do DNA • Ativam DNAase (clivam o DNA), clivam proteínas do citoesqueleto e da matriz nuclear. CASPASES • Tipos: caspases iniciadoras ou ativadores (caspase 8, 9 e 10) e efetoras (caspases 3, 6 e 7); • Caspases iniciadoras clivam a pró forma inativa da caspase efetora, ativando-as. E as caspases efetoras por sua vez, clivam outras proteínas da célula CASPASES • Inibem proteínas relacionadas com a transcrição, replicação e reparo do DNA • Ativam DNAase (clivam o DNA), clivam proteínas do citoesqueleto e da matriz nuclear. MITOCÔNDRIAS • Papel essencial na apoptose; • Quando sofrem agressão, ocorre aumento da permeabilidade e liberam no citosol diversas moléculas apoptóticas: • Citocromo c • SMAC/Diablo: inibe os inibidores de proteínas de apoptose (IAP) • AIF: ativa a caspase 9 e as endonucleases • OMI e endonuclease G:ativam endonucleases e induzem diretamente a apoptose PROTEÍNAS IMPORTANTES: •Bcl-2 e Bcl-x: inibem a apoptose •BAX (Bad e Bid): ativam caspases e promove a saída do citocromo c • IAP: proteínas inibidoras da apoptose pois inibem a atividade das caspases •SMAc/Diablo: inibe os inibidores de proteínas de apoptose (IAP) •p53: Desencadeia a apoptose. Importante na manutenção da integridade do genoma e da sobrevivência das células MECANISMO •A apoptose é induzida por uma cascata de eventos moleculares que podem ser iniciados de modos distintos, culminando na ativação das caspases; •O processo de apoptose pode ser dividido em uma fase de ativação, onde as caspases se tornam cataliticamente ativas e uma fase de execução, na qual esses enzimas atuam provocando a morte celular MECANISMO •FASE DE ATIVAÇÃO •Via intrínseca ou mitocondrial •Via extrínseca ou de receptor de morte •FASE DE EXECUÇÃO •Ativação das caspases VIA EXTRÍNSECA • É iniciada pela ativação de receptores de morte celular em várias células; • Receptores de morte são membros da família de receptores do fator de necrose tumoral. Os mais conhecidos são TNFR1 e uma proteína semelhante chamada de Fas. • Essa ativação ativará uma cascata de proteínas adaptadoras que culminará na ativação das caspases VIA INTRÍNSECA •Resulta do aumento da permeabilidade mitocondrial e da liberação de moléculas pró apoptóticas no citoplasma; •É ativada por estresse intracelular ou extracelular como a privação de fatores de crescimento, danos ao DNA ou hipóxia; VIA INTRÍNSECA • Essência dessa via é o equilíbrio entre as moléculas pro apoptóticas e protetoras que regulam a permeabilidade mitocondrial e a liberação de indutores da morte; • Viabilidade celular mantida por proteínas anti- apoptóticas (Bcl-2); •Ativação de sensores que antagonizam as proteínas anti- apoptóticas e ativam as pró- apoptóticas (Bax). VIA INTRÍNSECA Família Bcl-2 possui a função de regular a apoptose (Bcl2 e Bcl-x). Residem na membrana mitocondrial e no citoplasma. Sofre estresse, perde o Bcl-2 ou Bcl-x e são substituídos por BaK (pro-apoptóticos) Bcl-2/Bcl-x Permeabilidadeda membrana mitocondrial aumenta, e várias proteínas extravasam (citocromo c) Bax-BaK são proteínas pro apoptóticas que permitem a saída do citocromo c da mitocôndria para o citoplasma FASE DE EXECUÇÃO CONVERGÊNCIA DAS VIAS A caspase 8 ativa pode ativar a proteína de pró apoptose Bid que ativa a via mitocondrial de morte celular FAGOCITOSE • Ao longo da morte celular, vários sinais moleculares indicam a eliminação dos corpos apoptóticos; • Esses sinais estão relacionais a indução e facilitação da fagocitose; •O principal sinal molecular relacionado a eliminação das células apoptóticas é a translocação do fosfolipídio da membrana fosfatidilserina do folheto interno para o folheto externo FAGOCITOSE • Ocorre também a liberação do fosfolipídio fosfatidilcolina para o meio extracelular (atrai fagócitos); • Proteína CD31 de superfície celular, passa a presentar uma conformação diferente das células normais, e essa conformação facilita a fagocitose