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C A P Í T U L O 16 Lesão Celular, Morte Celular e Adaptações VISÃO GERAL DA LESÃO CELULAR E MORTE CELULAR Como mencionado no início do capítulo, a lesão celular ocor- re quando as células são estressadas tão excessivamente que não são mais capazes de se adaptar ou quando são expostas a agentes lesivos ou são prejudicadas por anomalias intrínsecas (p. ex., no DNA ou nas proteínas). Os diferentes estímulos le- sivos afetam muitas vias metabólicas e organelas celulares. A lesão pode progredir de um estágio reversível e culminar em morte celular (Fig. 1-1). • Lesão celular reversível. Nos estágios iniciais ou nas formas leves de lesão, as alterações morfológicas e funcionais são reversíveis se o estímulo nocivo for removido. Nesse es- tágio, embora existam anomalias estruturais e funcionais significativas, a lesão ainda não progrediu para um dano severo à membrana e dissolução nuclear. • Morte celular. Com a persistência do dano, a lesão torna-se irreversível e, com o tempo, a célula não pode se recuperar e morre. Existem dois tipos de morte celular — necrose e apop- tose — que diferem em suas morfologias, mecanismos e papéis na fisiologia e na doença (Fig. 1-6 e Tabela 1-1). Quando o dano às membranas é acentuado, as enzimas extravasam dos lisossomos, entram no citoplasma e digerem a célula, resultando em necrose. Os conteúdos celulares também extravasam através da membrana plasmática lesada e iniciam uma reação (inflamatória) no hospedeiro. A ne- crose é a principal via de morte celular em muitas lesões comumente encontradas, como as que resultam de isque- mia, de exposição a toxinas, várias infecções e trauma. Quando a célula é privada de fatores de crescimento ou quando o DNA celular ou as proteínas são danificadas sem reparo, a célula se suicida por outro tipo de morte, chamado apoptose, que é caracterizada pela dissolução nuclear sem a perda da integridade da membrana. En- quanto a necrose constitui sempre um processo patológi- co, a apoptose auxilia muitas funções normais e não está necessariamente associada à lesão celular patológica. Além disso, a apoptose, em certos papéis fisiológicos, não desencadeia uma resposta inflamatória. As características morfológicas, os mecanismos e o significado dessas duas vias de morte celular são discutidos em mais detalhes nas próximas seções. CAUSAS DA LESÃO CELULAR As causas da lesão celular variam de trauma físico grosseiro de um acidente de automóvel a defeito em um único gene que resulta em uma enzima defeituosa, caracterizando uma doença Figura 1-6 Características celulares da necrose (esquerda) e da apoptose (direita). 7Morfologia da lesão celular e tecidual metabólica específica. A maioria dos estímulos nocivos pode ser agrupada nas seguintes categorias. Privação de Oxigênio A hipóxia, ou deficiência de oxigênio, interfere com a res- piração oxidativa aeróbica e constitui uma causa comum e extremamente importante de lesão e morte celulares. A hipóxia pode ser distinguida da isquemia, que é a perda do suprimento sanguíneo em um tecido devido ao impedimento do fluxo arterial ou à redução da drenagem venosa. Enquanto a isquemia é a causa mais comum de hipóxia, a deficiência de oxigênio pode resultar também da oxigenação inadequada do sangue, como na pneumonia, ou por redução da capaci- dade do sangue em transportar oxigênio, como na anemia ou envenenamento por monóxido de carbono (CO). (O CO forma um complexo estável com a hemoglobina que impede a ligação ao oxigênio.) Agentes Químicos Enorme número de substâncias químicas que podem lesar as células é amplamente conhecido; mesmo substâncias inócuas, como glicose, o sal ou mesmo água, se absorvidas ou admi- nistradas em excesso podem perturbar o ambiente osmótico, resultando em lesão ou morte celular. Os agentes comumente conhecidos como venenos causam severos danos em nível ce- lular por alterarem a permeabilidade da membrana, a homeos- tasia osmótica ou a integridade de uma enzima ou cofator. A exposição a esses venenos pode culminar em morte de todo o organismo. Outros agentes potencialmente tóxicos são encon- trados diariamente no nosso ambiente; eles incluem poluentes do ar, inseticidas, CO, asbesto e os “estímulos” sociais, como o álcool. Mesmo as drogas terapêuticas podem causar lesão à célula ou ao tecido em paciente suscetível ou se usadas de modo excessivo ou inapropriado (Capítulo 7). Até mesmo o oxigênio em altas pressões parciais é tóxico. Agentes Infecciosos Esses agentes variam desde vírus submicroscópicos a tênias grandes; entre eles estão as riquétsias, as bactérias, os fungos e os protozoários. As diversas maneiras pelas quais os patógenos infecciosos causam lesão são discutidas no Capítulo 8. Reações Imunológicas Embora o sistema imune defenda o corpo contra micróbios patogênicos, as reações imunes podem também resultar em lesão à célula ou ao tecido. Os exemplos incluem as reações autoimunes contra os próprios tecidos e as reações alérgicas contra substâncias ambientais, em indivíduos geneticamente suscetíveis (Capítulo 4). Fatores Genéticos As anomalias genéticas resultam em alterações patológicas tão grosseiras como nas malformações congênitas associadas com a síndrome de Down ou tão sutis como a substituição de um único aminoácido na hemoglobina S originando a anemia falciforme (Capítulo 6). Os defeitos genéticos causam lesão celular por causa da deficiência de proteínas funcionais, como os defeitos enzimáticos nos erros inatos do metabolismo ou a acumulação de DNA danificado ou proteínas mal dobradas, ambos disparando a morte celular quando são irreparáveis. As variações genéticas (polimorfismos) podem influenciar também a suscetibilidade das células a lesão por substâncias químicas e outras lesões ambientais. Desequilíbrios Nutricionais Até mesmo na presente era de borbulhante riqueza global, as deficiências nutricionais permanecem como a principal causa de lesão celular. As deficiências proteico-calóricas entre as po- pulações desfavorecidas é o exemplo mais óbvio; as deficiências de vitaminas específicas não são incomuns, mesmo em países desenvolvidos com alto padrão de vida (Capítulo 7). Ironica- mente, os excessos nutricionais são também causas importantes de morbidade e mortalidade; por exemplo, a obesidade aumenta consideravelmente o risco para diabetes melito tipo 2. Além disso, as dietas ricas em gordura animal estão fortemente im- plicadas no desenvolvimento da aterosclerose, como também na vulnerabilidade aumentada a muitas desordens, incluindo o câncer. Agentes Físicos O trauma, os extremos de temperatura, a radiação, o choque elétrico e as alterações bruscas na pressão atmosférica exercem profundos efeitos nas células (Capítulo 7). Envelhecimento A senescência celular leva a alterações nas habilidades re- plicativas e de reparo das células e tecidos. Essas alterações levam à diminuição da capacidade de responder ao dano e, finalmente, à morte das células e do organismo. Os principais mecanismos do envelhecimento celular são discutidos no fim deste capítulo. MORFOLOGIA DA LESÃO CELULAR E TECIDUAL Antes de discutirmos os mecanismos bioquímicos que levam a alterações, é útil descrevermos as alterações básicas que ocorrem nas células lesadas. Todos os estresses e influências Tabela 1-1 Características da Necrose e da Apoptose Característica Necrose Apoptose Tamanho da célula Aumentado (tumefação) Reduzido (retração) Núcleo Picnose → cariorrexe → cariólise Fragmentação em fragmentos do tamanho de nucleossomas Membrana plasmática Rompida Intacta; estrutura alterada, especialmente a orientação dos lipídios Conteúdos celulares Digestão enzimática; extravasam da célula Intactos; podem ser liberados nos corpos apoptóticos Inflamação adjacente Frequente Não Papel fisiológico ou patológico Invariavelmente patológica (finalização da lesão celular irreversível) Sempre fisiológica, eliminação de células não desejadas; pode ser patológica após algumas formasde lesão celular, especialmente lesão de DNA e proteína DNA, ácido desoxirribonucleico. C A P Í T U L O 18 Lesão Celular, Morte Celular e Adaptações nocivas exercem seus efeitos, primeiro, em nível molecular ou bioquímico. A função celular pode ser perdida antes que ocorra a morte celular, e as alterações morfológicas na lesão (ou morte) celular surgem mais tarde (Fig. 1-7). Por exemplo, as células miocárdicas tornam-se não contráteis após 1-2 minutos de isquemia, embora não morram até que 20-30 minutos de is- quemia tenham decorrido. Esses miócitos não parecem mortos na microscopia eletrônica por 2-3 horas e por 6-12 horas na microscopia óptica. Os desarranjos celulares da lesão reversível podem ser re- parados e, se o estímulo nocivo cessa, a célula retorna à sua normalidade. Entretanto, a lesão persistente ou excessiva faz com que as células passem do nebuloso “ponto de não retorno” para lesão irreversível e morte celular. Os eventos que determinam quando a lesão reversível torna-se irreversível e progride para a morte celular permanecem pouco compreendidos. A relevân- cia clínica dessa questão é óbvia; se as alterações bioquímicas e moleculares que antecipam a morte celular puderem ser identificadas com precisão, é possível traçar estratégias para prevenir a transição de lesão celular reversível para irreversível. Embora não existam correlações morfológicas ou bioquímicas definitivas da irreversibilidade, dois fenômenos caracterizam consistentemente a irreversibilidade: a incapacidade de reverter a disfunção mitocondrial (perda da fosforilação oxidativa e geração de ATP) mesmo depois da resolução da lesão original e os profundos distúrbios na função da membrana. Como mencionado anteriormente, a lesão nas membranas lisossômicas leva à dis- solução enzimática da célula lesada, que é a característica da necrose. Os diferentes estímulos nocivos já mencionados induzem a morte por necrose ou por apoptose (Fig. 1-6 e Tabela 1-1). A seguir descrevemos a morfologia da lesão celular reversível e da necrose; a sequência das alterações nesses processos é ilustrada na Figura 1-6, à esquerda. A apoptose possui muitas caracterís- ticas únicas, que descreveremos separadamente mais adiante no capítulo. Lesão Reversível As duas principais características morfológicas da lesão celular reversível são a tumefação celular e a degeneração gordurosa. A tumefação celular é resultado da falência das bombas de íons dependentes de energia na membrana plasmática, levando a uma incapacidade de manter a homeostasia iônica e líquida. A degeneração gordurosa ocorre na lesão hipóxica e em vá- rias formas de lesão metabólica ou tóxica e manifesta-se pelo surgimento de vacúolos lipídicos, grandes ou pequenos, no citoplasma. Os mecanismos da degeneração gordurosa são dis- cutidos no Capítulo 15. Em algumas situações, lesões potencialmente nocivas in- duzem alterações específicas nas organelas celulares, como o retículo endoplasmático. O retículo endoplasmático agranular está envolvido no metabolismo de vários agentes químicos, e as células expostas a esses agentes exibem a hipertrofia do retículo endoplasmático como uma resposta adaptativa que pode ter consequências funcionais importantes. Por exemplo, os barbitúricos são metabolizados no fígado pelo sistema de oxidase de função mista citocromo P-450, encontrado no retículo endoplasmático agranular. O uso constante de bar- bitúricos leva a um estado de tolerância, com diminuição do efeito da droga e necessidade de doses maiores. Essa adapta- ção deve-se ao aumento do volume (hipertrofia) do retículo endoplasmático agranular dos hepatócitos e consequente aumento da atividade enzimática do P-450. Embora as modi- ficações mediadas pelo P-450 sejam sempre acreditadas como “detoxificação”, muitos compostos são convertidos em mais nocivos por esse processo. Um exemplo disso é o tetracloreto de carbono (CCl4), discutido adiante. Além disso, os produtos formados por esse metabolismo oxidativo incluem as espécies reativas de oxigênio (ERO), que podem lesar a célula. As célu- las adaptadas a uma droga possuem capacidade aumentada de metabolizar outros compostos, pelo mesmo sistema. Se pacientes que utilizam fenobarbital para epilepsia aumentam a ingestão de álcool, sofrem uma queda dos níveis de concen- tração sanguínea do medicamento a níveis subterapêuticos, por causa da indução do retículo endoplasmático agranular em resposta ao álcool. MORFOLOGiA A tumefação celular é a primeira manifestação de quase to- das as formas de lesão celular (Fig. 1-8, B). É uma alteração mor- fológica reversível, de difícil observação na microscopia óptica, podendo ser mais visível ao nível do órgão inteiro. Quando afeta muitas células em um órgão, causa alguma palidez (resultante da compressão dos capilares), aumento do turgor e aumento do peso do órgão. O exame microscópico pode revelar pequenos vacúolos claros dentro do citoplasma que representam segmen- tos distendidos e separados do retículo endoplasmático. Esse padrão de lesão não letal às vezes é chamado de alteração hidrópica ou degeneração vacuolar. A degeneração gordurosa é manifestada pela presença de vacúolos lipídicos no citoplasma. Ela é encontrada principalmente em células que participam do metabolismo da gordura (p. ex., hepatócitos e células miocárdicas) e também é reversível. As células lesadas podem exibir também coloração eosinofílica que se torna muito mais pronunciada com a progressão para a necrose. As alterações intracelulares associadas a lesão reversível (Fig. 1-6) incluem: (1) alterações na membrana plasmática, Figura 1-7 Relações entre função celular, morte celular e alterações morfológicas da lesão celular. Note que as células rapidamente se tor- nam não funcionais após o início da lesão, embora estejam ainda viáveis com lesão potencialmente reversível; uma lesão de duração mais longa leva finalmente a lesão irreversível e à morte celular. Note também que, tipicamente, a morte celular precede as alterações morfológicas visíveis macroscopicamente, à microscopia óptica e ultraestruturais. 9Morfologia da lesão celular e tecidual Necrose Necrose é o tipo de morte celular que está associado à perda da integridade da membrana e extravasamento dos conteúdos celulares, culminando na dissolução das células, resultante da ação degradativa de enzimas nas células lesadas letalmente. Os conteúdos celulares que escapam sempre iniciam uma reação local do hospedeiro, conhecida como inflamação, no intuito de eliminar as células mortas e iniciar o processo de reparo sub- sequente (Capítulo 2). As enzimas responsáveis pela digestão da célula são derivadas dos lisossomos das próprias células que estão morrendo ou dos lisossomos dos leucócitos que são recrutados como parte da reação inflamatória às células mortas. como bolhas, apagamento ou distorção das microvilosidades e perda das adesões intercelulares; (2) alterações mitocondriais, como tumefação e presença de densidades amorfas ricas em fosfolipídios; (3) dilatação do RE com destacamento dos ribos- somos e dissociação dos polissomos; (4) alterações nucleares, com condensação da cromatina. O citoplasma pode conter massas fosfolipídicas, conhecidas como figuras de mielina, derivadas das membranas celulares lesadas. MORFOLOGiA A necrose é caracterizada por alterações no citoplasma e no núcleo das células lesadas (Fig. 1-6, esquerda, e 1-8, C). • Alterações citoplasmáticas. As células necróticas exi- bem aumento da eosinofilia (isto é, coloração rósea do corante eosina, o “E” no “H&E”), atribuível em parte às proteínas citoplasmáticas desnaturadas que se ligam à eosina e, em parte, à perda do RNA citoplasmático, perdendo a basofilia (basofilia refere-se à coloração azul do corante hematoxilina, o “H” no “H&E”). A célula pode ter aparência homogênea mais vítrea do que as células viáveis, principal- mente por causa da perda de partículas de glicogênio. As figuras de mielina sãomais evidentes nas células necróticas do que nas células com lesão reversível. Quando as enzimas já digeriram as organelas citoplasmáticas, o citoplasma se torna vacuolado e parece “roído por traças”. À microscopia eletrônica, as células necróticas caracterizam-se pela descon- tinuidade das membranas das organelas e das membranas plasmáticas, pela dilatação acentuada das mitocôndrias com a presença de grandes densidades amorfas, pelo rompimento dos lisossomos e figuras de mielina intracitoplasmáticas. • Alterações nucleares. As alterações nucleares assumem um dos três padrões, todos devidos à degradação da cro- matina e do DNA. A basofilia da cromatina pode esmaecer (cariólise), provavelmente devido à atividade da desoxir- ribonuclease (DNase). Um segundo padrão é a picnose, caracterizada pela retração nuclear e aumento da basofilia; o DNA se condensa em uma massa sólida e encolhida. No terceiro padrão, a cariorrexe, o núcleo picnótico sofre fragmentação. Dentro de 1-2 dias, o núcleo da célula morta desaparece totalmente. A microscopia eletrônica mostra profundas alterações nucleares que culminam na dissolução do núcleo. • Destino das células necróticas. As células necróticas podem persistir por algum tempo ou ser digeridas por en- zimas e desaparecer. As células mortas são substituídas por figuras de mielina que são fagocitadas por outras células ou, mais tarde, degradadas em ácidos graxos. Esses ácidos gra- xos se ligam a sais de cálcio, resultando em células mortas calcificadas. Padrões de Necrose Tecidual A necrose de um conjunto de células em um tecido ou órgão, por exemplo, na isquemia miocárdica, resulta em morte de todo o tecido e, algumas vezes, do órgão inteiro. Existem vários padrões morfológicos distintos de necrose tecidual, os quais po- dem fornecer pistas sobre a causa básica. Embora os termos que descrevem esses padrões não reflitam os mecanismos básicos, são de uso comum e suas implicações são compreendidas por clínicos e patologistas. A maioria desses tipos de necrose possui aparência macroscópica distinta; a necrose fibrinoide é detectada apenas por exame histológico. Figura 1-8 Alterações morfológicas na lesão celular reversível e irreversível (necrose). A, Túbulos renais normais com células epiteliais viáveis. B, Lesão isquêmica inicial (reversível) mostrando, em células ocasionais, bolhas na superfície, eosinofilia aumentada do citoplasma e tumefação celular. C, Necrose (lesão irreversível) de células epiteliais com perda dos núcleos, fragmentação das células e extravasamento dos conteúdos. (Cortesia dos Drs. Neal Pinckard e M.A. Venkatachalam, University of Texas Health Sciences Center, San Antonio, Tex.) C A P Í T U L O 110 Lesão Celular, Morte Celular e Adaptações MORFOLOGiA • A necrose de coagulação é a forma de necrose tecidual na qual a arquitetura básica dos tecidos mortos é preser- vada por, pelo menos, alguns dias (Fig. 1-9). Os tecidos afetados adquirem textura firme. Supostamente, a lesão desnatura não apenas as proteínas estruturais, como tam- bém as enzimas, bloqueando assim a proteólise das células mortas; como resultado, células anucleadas e eosinofílicas persistem por dias ou semanas. Os leucócitos são recru- tados para o sítio da necrose e suas enzimas lisossômicas digerem as células mortas. Finalmente, os restos celulares são removidos por fagocitose. A necrose de coagulação é característica de infartos (áreas de necrose isquêmica) em todos os órgãos sólidos, exceto o cérebro. • Necrose liquefativa é observada em infecções bacteria- nas focais ou, ocasionalmente, nas infecções fúngicas porque os micróbios estimulam o acúmulo de células inflamatórias e as enzimas dos leucócitos a digerirem (“liquefazer”) o tecido. Por motivos desconhecidos, a morte por hipóxia, de células dentro do sistema nervoso central, com frequência leva a necrose liquefativa (Fig. 1-10). Seja qual for a pato- genia, a liquefação digere completamente as células mortas, resultando em transformação do tecido em uma massa vis- cosa líquida. Finalmente, o tecido digerido é removido por fagocitose. Se o processo foi iniciado por inflamação aguda, como na infecção bacteriana, o material é frequentemente amarelo cremoso e é chamado de pus (Capítulo 2). • A necrose gangrenosa não é um padrão específico de morte celular, mas o termo ainda é usado comumente na prática clínica. Em geral, é aplicado a um membro, comu- mente a perna, que tenha perdido seu suprimento sanguí- neo e que sofreu necrose de coagulação, envolvendo várias camadas de tecido. Quando uma infecção bacteriana se superpõe, a necrose de coagulação é modificada pela ação liquefativa das bactérias e dos leucócitos atraídos (resultan- do na chamada gangrena úmida). • A necrose caseosa é encontrada mais frequentemente em focos de infecção tuberculosa. O termo caseoso (semelhante a queijo) é derivado da aparência friável branco-amarelada da área de necrose (Fig. 1-11). Ao exame microscópico, pela co- loração de hematoxilina e eosina, o foco necrótico exibe uma coleção de células rompidas ou fragmentadas, com aparência granular amorfa rósea. Diferentemente da necrose de coagu- lação, a arquitetura do tecido é completamente obliterada, e os contornos celulares não podem ser distinguidos. A área de necrose caseosa é frequentemente encerrada dentro de uma borda inflamatória nítida; essa aparência é característica de um foco de inflamação conhecido como granuloma (Capítulo 2). • A necrose gordurosa refere-se a áreas focais de destruição gordurosa, tipicamente resultantes da liberação de lipases pancreáticas ativadas na substância do pâncreas e na cavidade peritoneal. isso ocorre na emergência abdominal calamitosa conhecida como pancreatite aguda (Capítulo 16). Nesse dis- túrbio, as enzimas pancreáticas que escapam das células acina- res e dos ductos liquefazem as membranas dos adipócitos do peritônio, e as lipases dividem os ésteres de triglicerídeos con- tidos nessas células. Os ácidos graxos liberados combinam-se Figura 1-10 Necrose liquefativa. infarto no cérebro mostrando a dis- solução do tecido. Figura 1-9 Necrose coagulativa. A, infarto renal em forma de cunha (amarelo), com preservação dos contornos. B, Aspecto microscópico da borda do infarto, com rim normal (N) e células necróticas no infarto (I). As células necróticas mostram contornos preservados, com ausência de núcleos e infiltrado inflamatório (difícil de perceber nesse aumento). 11Mecanismos da lesão celular O extravasamento de proteínas intracelulares através da mem- brana celular rompida e, por fim, para a circulação fornece meios de detectar a necrose tecido-específica, usando-se amostras de sangue ou de soro. Por exemplo, o músculo cardíaco contém uma iso- forma única da enzima creatina cinase e da proteína contrátil troponina, enquanto o epitélio do ducto hepático biliar contém uma isoforma, resistente à temperatura, da enzima fosfatase alcalina, e os hepatócitos contêm transaminases. A lesão ir- reversível e a morte celular nesses tecidos são caracterizadas por níveis séricos aumentados dessas proteínas, e as medidas desses níveis séricos são usadas clinicamente para diagnosticar o dano a esses tecidos. RESUMO Alterações Morfológicas nas Células Lesadas • Lesão celular reversível: tumefação celular, alteração gordu- rosa, bolhas na membrana plasmática e perda das micro- vilosidades, tumefação das mitocôndrias, dilatação do RE, eosinofilia (devida à diminuição do RNA citoplasmático). • Necrose: aumento da eosinofilia; retração, fragmentação e dissolução nuclear; rompimento da membrana plasmática e das membranas das organelas; abundantes figuras de mie- lina; extravasamento e digestão enzimática dos conteúdos celulares. • Padrões de necrose tecidual: sob diferentes condições, a ne- crose tecidual assume padrões específicos: de coagulação, liquefativa, gangrenosa, caseosa, gordurosa e fibrinoide. MECANISMOS DA LESÃO CELULAR Agora que já discutimos ascausas da lesão celular e da necrose, e suas correlações morfológicas e funcionais, consideraremos em mais detalhes as bases moleculares da lesão celular e ilus- traremos os princípios importantes com alguns exemplos sele- cionados de tipos comuns de lesão. Os mecanismos biológicos que ligam determinada lesão com as manifestações celulares e tissulares resultantes são com o cálcio, produzindo áreas brancas gredosas macroscopi- camente visíveis (saponificação da gordura), que permitem ao cirurgião e ao patologista identificar as lesões (Fig. 1-12). Ao exame histológico, os focos de necrose exibem contornos sombreados de adipócitos necróticos com depósitos de cálcio basofílicos circundados por reação inflamatória. • A necrose fibrinoide é uma forma especial de necrose, visível à microscopia óptica, geralmente observada nas rea- ções imunes, nas quais complexos de antígenos e anticorpos são depositados nas paredes das artérias. Os imunocom- plexos depositados, em combinação com a fibrina que te- nha extravasado dos vasos, resulta em aparência amorfa e róseo-brilhante, pela coloração do H&E, conhecida pelos patologistas como fibrinoide (semelhante à fibrina) (Fig. 1-13). As doenças imunologicamente mediadas (p. ex., a poliarterite nodosa), nas quais esse tipo de necrose é observado, são descritas no Capítulo 4. Figura 1-11 Necrose caseosa. Pulmão tuberculoso com grande área de necrose caseosa contendo restos branco-amarelados e semelhantes a queijo. Figura 1-12 Necrose gordurosa na pancreatite aguda. As áreas de de- pósitos gredosos, brancas, representam focos de necrose gordurosa com formação de sabão de cálcio (saponificação) nos locais da degradação dos lipídios no mesentério. Figura 1-13 Necrose fibrinoide na artéria de paciente com poliarteri- te nodosa. A parede da artéria mostra área circunferencial de necrose, róseo-brilhante, com depósito de proteína e inflamação. C A P Í T U L O 112 Lesão Celular, Morte Celular e Adaptações complexos, interconectados e intimamente intercombinados com muitas vias metabólicas intracelulares. Contudo, vários princípios gerais são relevantes para a maioria das formas de lesão celular: • A resposta celular ao estímulo nocivo depende do tipo de lesão, sua duração e sua gravidade. Assim, pequenas doses de toxina ou breves períodos de isquemia podem levar a lesão celular reversível, enquanto altas doses de toxina ou isquemia mais prolongada podem resultar em lesão celular irreversível e morte celular. • As consequências de um estímulo nocivo dependem do tipo, status, adaptabilidade e fenótipo genético da célula lesada. A mesma lesão gera diferentes resultados dependendo do tipo celular; assim, o músculo estriado esquelético da per- na se acomoda à isquemia completa por 2-3 horas sem lesão irreversível, ao passo que o músculo cardíaco morre depois de apenas 20-30 minutos. O estado nutricional ou hormonal também pode ser importante; evidentemente, um hepatócito repleto de glicogênio poderá tolerar a isquemia muito melhor do que um hepatócito que tenha acabado de consumir sua última molécula de glicose. A diversidade geneticamente programada nas vias metabólicas também contribui para as diferentes respostas aos estímulos. Por exemplo, quando expostos à mesma dose de uma toxina, os indivíduos que herdam variantes nos genes que codificam o citocromo P-450 podem catabolizar a toxina em diferentes taxas, levando a diferentes resultados. Os esforços têm sido direcionados para o entendimento do papel dos polimorfis- mos genéticos nas respostas a drogas e toxinas. O estudo de tais interações é denominado farmacogenômica. De fato, as variações genéticas influenciam a suscetibilidade a muitas doenças complexas, bem como a resposta a vários agentes terapêuticos. O uso do mapeamento genético de um paciente para orientar a terapia é um exemplo de “medicina personalizada”. • A lesão celular resulta de alterações bioquímicas e funcionais em um ou mais dos vários componentes celulares essenciais (Fig. 1-14). Os alvos mais importantes dos estímulos nocivos são: (1) as mitocôndrias e sua habilidade em gerar ATP e ERO em condições patológicas; (2) desequilíbrio na homeos- tasia do cálcio; (3) danos às membranas celulares (plas- mática e lisossômica) e (4) danos ao DNA e ao dobramento das proteínas. • As múltiplas alterações bioquímicas podem ser disparadas por qualquer lesão nociva. É difícil determinar qualquer mecanis- mo a uma lesão ou situação clínica em particular na qual a lesão celular seja proeminente. Por essa razão, as terapias que visam mecanismos individuais de lesão celular podem não ser eficazes. Discutiremos brevemente os principais mecanismos de lesão celular. Depleção de ATP O ATP, o estoque de energia da célula, é produzido principal- mente por fosforilação oxidativa do difosfato de adenosina (ADP) durante a redução do oxigênio no sistema de transporte de elétrons das mitocôndrias. Além disso, a via glicolítica pode gerar ATP, na ausência de oxigênio, usando a glicose derivada a partir da circulação ou a partir da hidrólise do glicogênio intra- celular. As principais causas de depleção de ATP são a redução do suprimento de oxigênio e nutrientes, o dano mitocondrial e as ações de algumas toxinas (p. ex., cianeto). Os tecidos com maior capacidade glicolítica (como o fígado) são capazes de sobreviver melhor à perda de oxigênio e ao decréscimo de fosforilação oxidativa do que os tecidos com capacidade limitada para a glicólise (p. ex., o cérebro). O fosfato de alta energia, na forma de ATP, é necessário para virtualmente todos os processos de sín- tese e degradação dentro da célula, incluindo o transporte de membrana, a síntese de proteínas, a lipogênese e as reações de diacilação-reacilação, necessárias para a renovação dos fos- folipídios. Estima-se que, no total, as células de um indivíduo saudável gastem 50-75 kg de ATP a cada dia! A depleção significativa de ATP tem amplos efeitos em muitos sis- temas celulares críticos (Fig. 1-15): • A atividade da bomba de sódio na membrana plasmática depen- dente de ATP é reduzida, resultando em acúmulo intracelu- lar de sódio e efluxo de potássio. O ganho final de soluto é acompanhado por um ganho iso-osmótico de água, causando tumefação celular e dilatação do RE. • Ocorre aumento compensatório na glicólise anaeróbica, na tenta- tiva de manter as fontes de energia celular. Como consequên- cia, as reservas de glicogênio intracelular são rapidamente exauridas e o ácido lático se acumula, levando à diminuição do pH intracelular e à diminuição da atividade de muitas enzimas celulares. • A falência na bomba de Ca2+ leva ao influxo de Ca2+, com efei- tos danosos em vários componentes celulares, descritos adiante. • A depleção prolongada ou crescente de ATP causa o rompi- mento estrutural do aparelho de síntese proteica, manifestado Figura 1-14 Principais mecanismos bioquímicos e sítios de lesão celular. ATP, trifosfato de adenosina; ERO, espécies de oxigênio reativo. 13Mecanismos da lesão celular como desprendimento dos ribossomos do retículo endo- plasmático granular (REG) e dissociação dos polissomos em monossomos, com consequente redução da síntese de proteína. Finalmente, ocorre dano irreversível às membranas mitocondriais e lisossômicas, e a célula sofre necrose. Danos e Disfunções Mitocondriais As mitocôndrias podem ser vistas como “minifábricas” que produzem energia de sustentação da vida, na forma de ATP, mas são também componentes críticos da lesão e morte celular (Fig. 1-16). As mitocôndrias são sensíveis a vários tipos de es- tímulos nocivos, incluindo hipóxia, toxinas químicas e radiação. Os danos mitocondriais resultam em graves anormalidades bioquímicas: • Falha na fosforilação oxidativa levando a depleção progres- siva de ATP, culminando na necrose da célula, como descrito anteriormente. • Fosforilação oxidativa anormal leva também à formação de espécies reativas de oxigênio, com muitosefeitos deletérios, descritos adiante. • A lesão mitocondrial frequentemente resulta na formação de um canal de alta condutância na membrana mitocondrial, chamado de poro de transição de permeabilidade mitocon- drial. A abertura desse canal leva à perda do potencial de membrana da mitocôndria e à alteração do pH, comprome- tendo a fosforilação oxidativa. • As mitocôndrias contêm também várias proteínas que, quando liberadas para o citoplasma, informam à célula que há uma lesão interna e ativam a via de apoptose, discutida adiante. Influxo de Cálcio A importância do Ca2+ na lesão celular foi estabelecida pelo achado experimental de que o cálcio extracelular depletado retarda a morte celular após hipóxia e exposição a algumas toxinas. Normalmente, o cálcio livre no citosol é mantido por transportadores de cálcio dependentes de ATP, em con- centrações 10.000 vezes menores do que a concentração do cálcio extracelular ou do cálcio intracelular sequestrado nas mitocôndrias e no RE. A isquemia e certas toxinas causam aumento da concentração do cálcio citosólico, inicialmente por causa da liberação de Ca2+ armazenado intracelularmente e, mais tarde, do cálcio que resulta do influxo aumentado através da membrana plasmática. O aumento do cálcio citosólico ativa várias enzimas, com efeitos celulares potencialmente prejudiciais (Fig. 1-17). Essas enzimas incluem as fosfolipases (que causam danos à membrana), as proteases (que clivam as proteínas de membrana e do citoesqueleto), as endonucleases (que são responsáveis pela fragmentação da cromatina e do DNA) e as trifosfatases de adenosina (ATPases), acelerando a depleção de ATP. O aumento dos níveis de Ca2+ intracelular resultam, também, na indução da apoptose, através da ativa- ção direta das caspases e pelo aumento da permeabilidade mitocondrial. Acúmulo de Radicais Livres Derivados do Oxigênio (Estresse Oxidativo) Os radicais livres são espécies químicas que possuem um único elétron não pareado em órbita externa. Tais estados químicos são extremamente instáveis e reagem prontamente com químicos orgânicos e inorgânicos; quando gerados nas células, atacam Figura 1-15 Consequências morfológicas e funcionais da diminuição de trifosfato de adenosina intracelular (ATP). RE, retículo endoplas- mático. Figura 1-16 Papel da mitocôndria na lesão e morte celular. As mitocôn- drias são afetadas por vários estímulos nocivos, e suas anormalidades levam à necrose ou à apoptose. A via de apoptose é descrita em mais detalhes adiante. ATP, trifosfato de adenosina; ERO, espécies reativas de oxigênio. C A P Í T U L O 114 Lesão Celular, Morte Celular e Adaptações avidamente os ácidos nucleicos, assim como uma variedade de proteínas e lipídios celulares. Além disso, os radicais livres ini- ciam reações autocatalíticas; as moléculas que reagem com eles são, por sua vez, convertidas em radicais livres, propagando, assim, a cadeia de danos. As espécies reativas do oxigênio (ERO) são um tipo de radical livre derivado do oxigênio, cujo papel na lesão celular está bem estabelecido. Em muitas circunstâncias, a lesão celular envolve danos causados pelos radicais livres; essas situações incluem a lesão de isquemia-reperfusão (discutida adiante), a lesão química e por radiação, a toxicidade do oxigênio e outros gases, o envelhecimento celular, a destruição dos micróbios pelas células fagocíticas e a lesão tecidual causada por células inflamatórias. Existem diferentes tipos de ERO produzidos por duas vias principais (Fig. 1-18); • Normalmente as ERO são produzidas em pequenas quantidades, em todas as células, durante as reações de oxidação e redução que ocorrem durante a respiração e a geração de energia mitocondrial. Nesse processo, o oxigênio molecular é se- quencialmente reduzido nas mitocôndrias através da adição de quatro elétrons para gerar água. Entretanto, essa reação é imperfeita, e pequenas quantidades de intermediários tóxicos altamente reativos são geradas quando o oxigênio é apenas parcialmente reduzido. Esses intermediários incluem o superóxido (O2•), convertido em peróxido de hidrogênio (H2O2) espontaneamente ou pela ação da superóxido dis- mutase. O H2O2 é mais estável que o O2• e pode atravessar membranas biológicas. Na presença de metais, como Fe2+, o H2O2 é convertido ao radical hidroxila altamente reativo (•OH) pela reação de Fenton. • As ERO são produzidas pelos leucócitos, principalmente neutrófilos e macrófagos, como uma arma para destruição de micróbios e outras substâncias durante a inflamação e defesa do hos- pedeiro (Capítulo 2). As ERO são geradas nos fagossomas e fagolisossomas dos leucócitos por um processo similar à respiração mitocondrial, conhecido como surto respirató- rio (ou surto oxidativo). Nesse processo, uma enzima da Figura 1-18 vias de produção de espécies reativas de oxigênio. A, Em todas as células, o superóxido (O2•) é produzido durante a respiração mitocon- drial pela cadeia de transporte de elétrons e é convertido a H2O2 e radical livre hidroxila (•OH) ou a peroxinitrito (ONOO−). B, Nos leucócitos (principalmente neutrófilos e macrófagos), a enzima oxidase presente na membrana do fagossoma gera superóxido, que pode ser convertido a outros radicais livres. A mieloperoxidase (MPO) dos fagossomas também gera hipoclorito a partir de espécies reativas de oxigênio (ERO). NO, óxido nítrico; SOD, superóxido dismutase. Figura 1-17 Fontes e consequências do aumento do cálcio citosólico na lesão celular. ATP, trifosfato de adenosina; ATPase, trifosfatase de adenosina. 15Mecanismos da lesão celular membrana do fagossoma catalisa a geração de superóxido, que é convertido a H2O2. O H2O2 é, por sua vez, convertido a um composto hipoclorito altamente reativo pela enzima mieloperoxidase, presente nos leucócitos. O papel das ERO na inflamação é descrito no Capítulo 2. • O óxido nítrico (NO) é outro radical livre reativo produzido pelos leucócitos e outras células. Ele pode reagir com o O2• e formar um composto altamente reativo, o peroxinitrito, que também participa da lesão celular. O dano causado pelos radicais livres é determinado por suas taxas de produção e remoção (Fig. 1-19). Quando a produção de ERO aumenta ou quando os sistemas de remoção são ineficientes, o resultado é um excesso desses radicais livres que leva a uma condição chamada de estresse oxidativo. A geração de radicais livres aumenta sob várias circunstâncias: • Na absorção de energia radiante (p. ex., luz ultravioleta, raios X). A radiação ionizante pode hidrolisar a água em radicais livres hidroxila (•OH) e hidrogênio (H•). • No metabolismo enzimático de substâncias químicas exóge- nas (p. ex., tetracloreto de carbono — ver adiante). • Na inflamação, onde os radicais livres são produzidos pelos leucócitos (Capítulo 2). As células desenvolveram múltiplos mecanismos para a remoção de radicais livres e, desse modo, minimizar a lesão. Os radicais livres são inerentemente instáveis e decompõem-se espontaneamente. Existem vários sistemas enzimáticos e não enzimáticos que contribuem para a inativação das reações de radicais livres (Fig. 1-19). • A taxa de decomposição espontânea do superóxido é aumen- tada significativamente pela ação das superóxido dismutases (SODs) encontradas em muitos tipos celulares. • As glutationa peroxidases (GSH) constituem uma família de enzimas cuja principal função é proteger as células da lesão oxidativa. O membro mais abundante dessa família, a glutationa peroxidase 1, é encontrada no citoplasma de todas as células. Ela catalisa a degradação do H2O2 pela reação 2 GSH (glutationa) + H2O2 → GS-SG + 2H2O. A proporção intracelular de glutationa oxidada (GSSG) para glutationa reduzida (GSH) reflete a atividade da enzima e a habilidade das células em catabolizar radicais livres. • A catalase, presente nos peroxisomas, direciona a decom- posição do peróxido de hidrogênio (2H2O2 → O2 + 2H2O). A catalase é uma das mais importantesenzimas conhecidas, capaz de degradar milhões de moléculas de H2O2 por se- gundo. • Os antioxidantes endógenos ou exógenos (p. ex., as vita- minas E, A, C e o b-caroteno) podem bloquear a formação de radicais livres ou removê-los, uma vez que tenham sido formados. As espécies reativas do oxigênio causam lesão celular através de três principais reações (Fig. 1-19): • Peroxidação lipídica das membranas. Ligações duplas de lipídios polinsaturados na membrana são vulneráveis ao ataque por radicais livres derivados do oxigênio. As interações lipí- dio-radical geram peróxidos, que são instáveis e reativos, e sobrevém uma reação em cadeia autocatalítica. • Ligação cruzada e outras alterações das proteínas. Os radicais livres promovem ligação cruzada das proteínas mediadas por sulfidrila, resultando no aumento da degradação ou perda da atividade enzimática. As reações radicais livres também podem causar a fragmentação dos polipeptídios. • Lesões do DNA. As reações radicais livres com a timina no DNA mitocondrial e nuclear produzem quebra do filamento único no DNA. Essa lesão no DNA foi implicada na morte celular, envelhecimento celular e transformação maligna das células. Além do papel das ERO na lesão celular e destruição de mi- cróbios, baixas concentrações de ERO estão envolvidas em numerosas vias de sinalização celular e em muitas reações fisiológicas. Portanto, essas moléculas são produzidas nor- malmente, mas, para evitar seus efeitos lesivos, suas concen- trações intracelulares são rigorosamente reguladas nas células saudáveis. Defeitos na Permeabilidade da Membrana O aumento da permeabilidade da membrana, levando pos- teriormente a lesão franca da membrana, é uma característica consistente da maioria das formas de lesão celular que culmina em necrose. A membrana plasmática pode ser danificada por Figura 1-19 Geração, remoção e papel das espécies reativas de oxigênio (ERO) na lesão celular. A produção de ERO é aumentada por muitos estímulos nocivos. Esses radicais livres são removidos por decomposição espontânea e por sistemas enzimáticos especializados. A produção exces- siva ou a remoção inadequada resulta em acúmulo de radicais livres na célula que lesa os lipídios (por peroxidação), proteínas e DNA, resultando em lesão celular. C A P Í T U L O 116 Lesão Celular, Morte Celular e Adaptações isquemia, várias toxinas microbianas, componentes líticos do complemento e por uma variedade de agentes químicos e físi- cos. Vários mecanismos bioquímicos podem contribuir para os danos à membrana (Fig. 1-20): • Diminuição da síntese de fosfolipídios. Nas células, a produção de fosfolipídios pode ser reduzida sempre que houver queda dos níveis de ATP, levando ao decréscimo das atividades enzimáticas dependentes de energia. A redução de síntese de fosfolipídios afeta todas as membranas celulares, incluindo as membranas mitocondriais, exacerbando, assim, a perda de ATP. • Aumento da degradação dos fosfolipídios. Uma lesão celular acentuada está associada ao aumento da degradação dos fosfolipídios da membrana, provavelmente devido à ativação de fosfolipases endógenas por elevação dos níveis de Ca2+ citosólico. • ERO. Os radicais livres do oxigênio causam lesão às mem- branas celulares através da peroxidação lipídica, discutida inicialmente. • Alterações do citoesqueleto. Os filamentos do citoesqueleto fun- cionam como âncoras que conectam a membrana plasmática ao interior da célula e exerce muitas funções na manutenção da arquitetura, na motilidade e na sinalização celulares nor- mais. A ativação de proteases pelo Ca2+ citosólico aumentado pode danificar os elementos do citoesqueleto, levando a lesão da membrana. • Produtos de degradação de lipídios. Incluem ácidos graxos livres não esterificados, acil-carnitina e lisofosfolipídios, produtos catabólicos que são conhecidos por acumularem-se nas cé- lulas lesadas, em consequência da degradação fosfolipídica. Possuem efeito detergente sobre as membranas. Também se inserem na bicamada lipídica da membrana ou trocam de posição com os fosfolipídios da membrana, causando potencialmente alterações na permeabilidade e alterações eletrofisiológicas. Os sítios mais importantes da membrana, durante a lesão celu- lar, são as membranas mitocondriais, a membrana plasmática e as membranas lisossômicas. • Danos na membrana mitocondrial. Como já discutido, os danos às membranas mitocondriais resultam em decréscimo da produção de ATP, culminando em necrose. • Danos à membrana plasmática. Os danos à membrana plas- mática levam à perda do equilíbrio osmótico e influxo de fluidos e íons, bem como à perda dos conteúdos celulares. As células podem, também, perder metabólitos que são vitais para a reconstituição do ATP, depletando, então, os estoques de energia. • Danos às membranas lisossômicas resultam em extravasamento de suas enzimas para o citoplasma e ativação das hidrolases ácidas, em pH intracelular ácido da célula lesada (p. ex., célu- la isquêmica). Os lisossomos contêm ribonucleares (RNases), DNases, proteases, glicosidases e outras enzimas. A ativação dessas enzimas leva à digestão enzimática dos componentes celulares, e a célula morre por necrose. Danos ao DNA e às Proteínas As células possuem mecanismos que reparam as lesões de DNA, porém se o dano é muito grave para ser corrigido (p. ex., após lesão por radiação ou estresse oxidativo) a célula inicia seu pro- grama de suicídio e morre por apoptose. Uma reação semelhante é iniciada por proteínas impropriamente dobradas, as quais podem ser resultantes de mutações herdadas ou disparadores externos, como os radicais livres. Como esses mecanismos de lesão celular causam tipicamente a apoptose, eles serão dis- cutidos mais adiante no capítulo. RESUMO Mecanismos da Lesão Celular • Depleção de ATP: falha das funções dependentes de energia → lesão reversível → necrose. • Lesão mitocondrial: depleção de ATP → falha nas funções celulares dependentes de energia → finalmente, necrose; sob algumas condições, extravasamento de proteínas que causam apoptose. • Influxo de cálcio: ativação de enzimas que danificam os com- ponentes celulares e podem também disparar a apoptose. • Acúmulo de espécies reativas do oxigênio: modificação cova- lente de proteínas celulares, lipídios, ácidos nucleicos. • Aumento da permeabilidade das membranas celulares: pode afetar a membrana plasmática, membranas lisossômicas, membranas mitocondriais; tipicamente culmina em necrose. • Acúmulo de DNA danificado e proteínas mal dobradas: dispara a apoptose. CORRELAÇÕES CLINICOPATOLÓGICAS: EXEMPLOS DE LESÃO CELULAR E NECROSE Para ilustrar a evolução e os mecanismos bioquímicos da lesão celular, concluímos esta seção discutindo alguns exemplos comumente encontrados de lesão celular reversível e necrose. Figura 1-20 Mecanismos da lesão à membrana, na lesão celular. A dimi- nuição de O2 e o aumento citosólico de Ca2+ são tipicamente observados na isquemia, mas podem acompanhar outras formas de lesão celular. As espécies reativas de oxigênio, que frequentemente são produzidas na lesão de reperfusão nos tecidos isquêmicos, também causam lesão à membrana (não mostrado). 17Correlações clinicopatológicas: exemplos de lesão celular e necrose Lesão Isquêmica e Hipóxica Isquemia ou redução do fluxo sanguíneo para um tecido é a causa mais comum de lesão celular aguda na doença humana. Ao contrário da hipóxia, na qual a produção de energia através da glicólise anaeróbica continua (embora menos eficientemente do que pelas vias oxidativas), a isquemia, por causa da redução do fluxo sanguíneo, também compromete a distribuição de subs- tratos para a glicólise. Consequentemente, a geração de energia anaeróbica também cessa nos tecidos isquêmicos depois que os substratos são exauridos ou quando a glicólise é inibida pela acumulação de metabólitos que normalmente poderiam ser removidos pelo fluxo sanguíneo. Por essa razão, a isquemia lesaos tecidos mais rapidamente que a hipóxia. As principais alterações celulares em células privadas de oxigênio são a diminuição de geração de ATP, a lesão mitocondrial e a acumulação de ERO, com suas consequências. A alteração bioquímica mais importante nas células hipóxicas que leva a lesão celular é a redução da geração de ATP intracelular, como consequência do suprimento reduzido de oxigênio. Como descrito anteriormente, a perda de ATP ocasiona a falha de muitos sis- temas celulares dependentes de energia, que incluem (1) bombas de íons (levando à tumefação celular e ao influxo de Ca2+, com suas consequências deletérias); (2) depleção dos estoques de glicogênio e acumulação de ácido lático, diminuindo o pH in- tracelular; e (3) redução da síntese de proteínas. Nesse estágio, as consequências funcionais podem ser graves. Por exemplo, o músculo cardíaco cessa a contração dentro de 60 segundos de oclusão coronária. Se a hipóxia continuar, a piora da depleção de ATP causará degeneração adicional, com perda das microvilosidades e a formação de “bolhas” (Fig. 1-6). Nesse ponto, toda a célula e suas organelas (mitocôndrias, RE) estão notavelmente tumefatas, com concen- trações aumentadas de água, sódio e cloreto, e concentração reduzida de potássio. Se o oxigênio for restaurado, todas essas perturbações serão reversíveis e, no caso do miocárdio, a con- tratilidade retornará. Se a isquemia persistir, sobrevirá lesão irreversível e necrose. A lesão irreversível está associada à intensa tumefação das mitocôndrias, lesão intensa das membranas plasmáticas e tumefação dos lisossomos. Pode ocorrer influxo maciço de cálcio para dentro da célula e acumulação de ERO. A morte é principalmente por necrose, mas a apoptose também con- tribui; a via apoptótica é ativada pela liberação de moléculas pró-apoptóticas das mitocôndrias. Os componentes celulares são progressivamente degradados e há um extravasamento difuso das enzimas celulares para o espaço extracelular. Finalmente, as células mortas podem ser substituídas por grandes massas compostas de fosfolipídios na forma de figuras de mielina. Estas, então, são fagocitadas por leucó- citos ou degradadas em ácidos graxos que podem se tornar calcificados. Lesão de Isquemia-Reperfusão A restauração do fluxo sanguíneo pode resultar em restau- ração das células se elas foram lesadas de modo reversível. No entanto, sob certas circunstâncias, a restauração do fluxo sanguíneo para tecidos isquêmicos, mas não mortos, resulta, para- doxalmente, em morte das células que não estavam irreversivelmente lesadas. Essa tão conhecida lesão de isquemia-reperfusão é um processo clinicamente importante que pode contribuir signi- ficativamente para danos no tecido, em infartos do miocárdio e isquemia cerebral. Vários mecanismos podem ser responsáveis pela exacerbação da lesão celular resultante da reperfusão dentro dos tecidos isquêmicos: • Uma nova lesão pode ser iniciada durante a reoxigenação devido a uma produção aumentada de ERO pelas células endoteliais, do parênquima e dos leucócitos infiltrantes. Quando o suprimento de oxigênio é aumentado, ocorre au- mento correspondente na produção de ERO, especialmente porque a lesão mitocondrial leva a uma redução incompleta de oxigênio e devido à ação das oxidases dos leucócitos, das células endoteliais ou das células do parênquima. Os meca- nismos de defesa antioxidantes celulares também podem ser comprometidos pela isquemia, favorecendo a acumulação de radicais livres. • A inflamação, que é induzida pela lesão isquêmica, pode aumentar com a reperfusão devido ao influxo aumenta- do de leucócitos e proteínas plasmáticas. Os produtos dos leucócitos ativados podem causar lesão adicional ao tecido (Capítulo 2). A ativação do sistema complemento também con- tribui para a lesão de isquemia-reperfusão. As proteínas do complemento ligam-se aos tecidos lesados ou a anticorpos depositados nos tecidos isquêmicos, e uma subsequente ativação do complemento acentua a inflamação e a lesão celular. Lesão Química (Tóxica) As substâncias químicas induzem lesão celular por um dos dois mecanismos gerais: • Algumas substâncias químicas atuam diretamente pela com- binação com um componente molecular crítico ou com uma organela celular. Por exemplo, no envenenamento por clo- reto de mercúrio (como ocorre com a ingestão de frutos do mar contaminados — Capítulo 7), o mercúrio se liga aos grupamentos sulfidrila das várias proteínas de membrana celular, causando inibição do transporte dependente de ATP e aumento da permeabilidade da membrana. Muitos agentes quimioterápicos antineoplásicos também induzem lesão celular por efeitos citotóxicos diretos. Nesses casos, o maior dano é mantido pelas células que usam, absorvem, excretam ou concentram os compostos. • Muitas outras substâncias químicas não são biologicamen- te ativas, mas devem ser primeiro convertidas a metabólitos tóxicos reativos, que então agem sobre as células-alvo. Es- sa modificação é normalmente realizada pelo citocromo P-450, no retículo endoplasmático agranular do fígado e outros órgãos. Embora os metabólitos possam causar danos à membrana e lesão celular, por ligação covalente direta a proteínas e lipídios, o mecanismo mais importante de lesão envolve a formação de radicais livres. O tetra- cloreto de carbono (CCl4) — que é amplamente utilizado na indústria de limpeza a seco, mas agora proibido — e o analgésico paracetamol pertencem a essa categoria. O efeito do CCl4 é ainda instrutivo como exemplo de lesão química. O CCl4 é convertido, principalmente no fígado, ao radical livre tóxico CCl3•, e esse radical é a causa da lesão celular, principalmente, pela peroxidação dos fosfolipídios de membrana. Em menos de 30 minutos após exposição ao CCl4, ocorre um declínio de síntese de enzimas hepáticas e proteínas plasmáticas; dentro de duas horas, já ocorreram tumefação e desprendimento dos ribossomos no retículo endoplasmático agranular. Nos hepatócitos, a exportação dos lipídios é reduzida, em consequência da incapacidade C A P Í T U L O 118 Lesão Celular, Morte Celular e Adaptações de sintetizar apoproteína, para formar complexos com os triglicerídeos e facilitar, assim, a secreção de lipoproteína; o resultado é o “fígado gorduroso” do envenenamento por CCl4. Segue-se então a lesão mitocondrial; subsequente- mente, os estoques reduzidos de ATP resultam em defeito no transporte de íons e tumefação celular progressiva; as membranas plasmáticas são depois lesadas por aldeídos graxos produzidos por peroxidação lipídica no RE. O re- sultado final pode ser o influxo de cálcio e, finalmente, a morte celular. APOPTOSE A apoptose é uma via de morte celular, induzida por um programa de suicídio estritamente regulado no qual as células destinadas a morrer ativam enzimas que degradam seu próprio DNA e as proteínas nu- cleares e citoplasmáticas. Os fragmentos das células apoptóticas então se separam, gerando a aparência responsável pelo nome (apoptose, “cair fora”). A membrana plasmática da célula apop- tótica permanece intacta, mas é alterada de tal maneira que a célula e seus fragmentos tornam-se alvos atraentes para os fagócitos. Rapidamente, as células mortas e seus fragmentos são removidos antes que seus conteúdos extravasem e, por isso, a morte celular por essa via não induz uma reação inflamatória no hospedeiro. A apoptose difere da necrose, que é caracterizada pela perda da integridade da membrana, digestão enzimática das células, extravasamento dos conteúdos celulares e, fre- quentemente, uma reação no hospedeiro (Fig. 1-6 e Tabela 1-1). Entretanto, a apoptose e a necrose algumas vezes coexistem, e a apoptose induzida por alguns estímulos patológicos progride para a necrose. Causas da Apoptose A apoptose ocorre normalmente em muitas situações e funcio- na para eliminar células potencialmente prejudiciais e células que tenham sobrevivido mais que sua utilidade. É também um evento patológicoquando as células são lesadas de modo irreparável, especialmente quando a lesão afeta o DNA ou as proteínas da célula; nessas situações, a célula lesada de modo irreparável é eliminada. Apoptose em Situações Fisiológicas A morte por apoptose é um fenômeno normal que funciona para elimi- nar as células que não são mais necessárias e para manter, nos tecidos, um número constante das várias populações celulares. É importante nas seguintes situações fisiológicas: • Destruição programada de células durante a embriogênese. O desenvolvimento normal está associado à morte de algumas células e ao surgimento de novas células e tecidos. A ex- pressão morte celular programada foi criada originalmente para denotar a morte de tipos celulares específicos, em tempos definidos, durante o desenvolvimento de um or- ganismo. Apoptose é um termo genérico para esse padrão de morte celular, independentemente do contexto, mas frequentemente é usado em alternância com morte celular programada. • Involução de tecidos hormônios-dependentes sob privação de hormô- nio, tal como a célula endometrial, que se desprende durante o ciclo menstrual, e a regressão da mama após o desmame. • Perda celular em populações celulares proliferativas, como o epitélio de cripta intestinal, mantendo assim um número constante. • Morte de células que já tenham cumprido seu papel, como os neutrófilos na resposta inflamatória aguda e os linfócitos, ao término da resposta imune. Nessas situações, as células sofrem apoptose porque estão privadas dos sinais de sobre- vivência necessários, como os fatores de crescimento. • Eliminação de linfócitos autorreativos potencialmente nocivos, antes ou depois de eles terem completado sua maturação, para impedir reações contra os tecidos da própria pessoa (Capítulo 4). • Morte celular induzida por linfócitos T citotóxicos, um mecanis- mo de defesa contra viroses e tumores que mata e elimina células neoplásicas e infectadas por vírus (Capítulo 4). Apoptose em Condições Patológicas A apoptose elimina células que estão geneticamente alteradas ou lesadas de modo irreparável, sem iniciar uma reação severa no hos- pedeiro, mantendo mínima a lesão tecidual. A morte por apop- tose é responsável pela perda de células em vários estados patológicos: • Lesão de DNA. A radiação, as drogas citotóxicas anticâncer, os extremos de temperatura e mesmo a hipóxia podem lesar o DNA diretamente ou através da produção de radicais livres. Se os mecanismos de reparo não podem competir com a lesão, a célula dispara mecanismos intrínsecos que induzem a apoptose. Nessas situações, a eliminação da célula pode ser melhor alternativa do que arriscar em mutações no DNA lesado, o que pode progredir para uma transformação ma- ligna. Esses estímulos nocivos causam apoptose se a lesão é leve, mas doses maiores do mesmo estímulo resultam em morte celular por necrose. A indução de apoptose em células cancerosas é um efeito desejado dos agentes quimioterápicos, muitos dos quais funcionam danificando o DNA. • Acúmulo de proteínas anormalmente dobradas. As proteínas im- propriamente dobradas podem surgir de mutações nos genes que codificam essas proteínas ou devido a fatores extrínsecos, como a lesão causada por radicais livres. O acúmulo exces- sivo dessas proteínas no RE leva a uma condição conhecida como estresse do RE, que culmina em morte apoptótica das células. • Lesão celular em certas infecções, particularmente as infecções virais, nas quais a perda de células infectadas é devida em grande parte à morte apoptótica que pode ser induzida pelo vírus (como nas infecções por adenovírus e vírus da imuno- deficiência humana) ou pela resposta imune do hospedeiro (como na hepatite viral). • Atrofia patológica no parênquima de órgãos após obstrução de ducto, como ocorre no pâncreas, na parótida e no rim. MORFOLOGiA Em tecidos corados pelo H&E, os núcleos das células apop- tóticas exibem vários estágios de condensação e agregação da cromatina e, finalmente, cariorrexe (Fig. 1-21); em nível molecular, isso é refletido na fragmentação do DNA em peças do tamanho dos nucleossomos. Rapidamente as células re- traem, formando brotos citoplasmáticos, e se fragmentam em corpos apoptóticos compostos por vesículas envoltas por membrana contendo citosol e organelas (Fig. 1-6). Em razão de tais fragmentos serem rapidamente expulsos e fagocitados, sem induzir resposta inflamatória, mesmo a apoptose substancial pode, histologicamente, ser indetectável.
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