Imuno-hematologia e Tipagem sanguínea

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Imuno-hematologia 
do doador
Imuno-hematologia do doador
Pesquisar antígenos eritrocitários
Pesquisar anticorpos irregulares
Importância:
• Incompatibilidades transfusionais;
• Incompatibilidades materno fetal.
Imuno-hematologia do doador
Incompatibilidades transfusionais – Reações hemolíticas 
transfusionais (RHT)
Definição – diminuição da sobrevida das hemácias após 
transfusão sanguínea devido incompatibilidade imunológica entre 
doador e receptor.
Maior incidência – pacientes politransfundidos
As reações podem ser:
• imediata – no momento ou algumas horas após transfusão 
• tardia – dias ou semanas após transfusão
Imuno-hematologia do doador
Reações hemolíticas transfusionais (RHT) poder ser:
Intravascular (sistema ABO) - IgM
Hemoglobinúria
Hemoglobinemia
Imuno-hematologia do doador
Efeito das reações hemolíticas transfusionais (RHT):
Efeito da reação hemolítica imediata – sistema ABO
• reação febril – Ac anti-leucocitário do paciente
• hipotensão por inibição da ECA
• liberação de catecolaminas - stress
• formação de trombos
• reação alérgica – anti-IgA contra proteína plasmática do doador
• hipocalcemia – citrato (anticoagulante) se liga no cálcio
Ac do doador contra Ag leucocitário do paciente
TRALI - lesão pulmonar aguda associada à transfusão (transfusion-related acute lung injury)
Imuno-hematologia do doador
anti-HLA (antígeno leucocitário humano)
Mulheres com várias gestações
-Ocorre ativação do sistema imunológico
-Sequestramento de polimorfonucleares para o pulmão
-Ativação dos neutrófilos no pulmão
Resposta oxidativa (ROS) e citocinas
Edema e 
insuficiência pulmonar
TRALI - lesão pulmonar aguda associada à transfusão (transfusion-related acute lung injury)
É caracterizada por:
- Insuficiência respiratória aguda;
- Edema pulmonar;
- Hipoxia grave.
Maior causa de morte
Imuno-hematologia do doador
Imuno-hematologia do doador
Reações hemolíticas transfusionais (RHT) poder ser:
Hemólise extravascular (sistema Rh)
↑ bilirrubina
Imuno-hematologia do doador
Efeito das reações hemolíticas transfusionais (RHT):
Efeito da reação hemolítica tardia – sistema Rh
• reação enxerto X hospedeiro
• hemossiderose 
• púrpura pós-transfusional – aloanticorpo contra plaquetas (HPA)
HPA- Ag plaquetário humano
Imuno-hematologia
Doença enxerto X hospedeiro
DECH ou GVHD (graft-versus-host disease)
APC – célula apresentadora de Ag (macrófago/monócitos)
Linfócitos T (CD4/CD8) – presente na bolsa de sangue
CTL – células linfocíticas adicionais
LPS - lipopolissacarídeo
Causa pancitopenia
Transplantes / transfusões (DECHT)
Transfusões
Pacientes submetidos a quimioterapia,
imunossuprimidos. 
Hemossiderose
Púrpura pós-transfusional 
Imuno-hematologia do doador
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https://www.google.com.br/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&frm=1&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=2ahUKEwiP8fL_2fPZAhWDG5AKHY-KCk8QjRx6BAgAEAU&url=https%3A%2F%2Fcommons.wikimedia.org%2Fwiki%2FFile%3AHemosiderin1.jpg&psig=AOvVaw01ouWCH_6ApOBd7t0Wl72t&ust=1521387858052973
Tipagem sanguínea
1901 - Karl Landsteiner descobriu o sistema ABO.
Descobriu que as hemácias eram recobertas
por Ag (classificação direta da tipagem sanguínea)
e que existia Ac naturais (classificação reversa).
Imuno-hematologia do doador
Fenótipo Genótipo Antígeno ou aglutinogênio 
(nas hemácias)
Anticorpo ou aglutinina (no 
plasma)
Grupo A IAIA ou IAi Antígeno A Anti-B
Grupo B IBIB ou IBi Antígeno B Anti-A
Grupo AB IAIB Antígenos A e B Sem anticorpos
Grupo O ii Sem antígenos Anti-A e Anti-B
Antígenos do grupo sanguíneo
Estrutura macromoleculares localizadas na superfície da membrana dos eritrócitos
Antígenos do grupo sanguíneo
Antígenos do grupo sanguíneo ABO
Glicoproteína/
Paraglobosídeo
HH/Hh produzem enzima α-2-L-fucosiltransferase
Que acrescenta uma fucose na glicoproteína
Lócus FUT 1 (gene H) – cromoss.19
FUT1
Açucares dominantes:
Fuc – fucose
NAGA – α-N-acetil
galactosamina
GAL – D-galactose
Os Ag são desenvolvidos por volta da 37ᵒ dia de vida fetal. 
Pode ser encontrado em hemácias, secreções, linfócitos, plaquetas.
Grupo sanguíneo
Codifica transferases
Codifica transferases
Antígenos do grupo sanguíneo ABO
Antígenos do grupo sanguíneo ABO
Três alelos, o que caracteriza o sistema ABO 
como um caso de polialelia (alelo múltiplo)
IA - Determina a produção do antígeno A
IB - Determina a produção do antígeno B
i - não condiciona produção de antígeno
Sistema ABO
Sistema ABO
Sistema ABO – subgrupos A
O subgrupo A1 – tem mais sítios antigênicos e maior concentração da enzima
conversora do gene H e transferase do que o subgrupo A2.
genótipo genótipo
Usar soros anti-A1 e anti-A2/ ou hemácias A1 e A2 A3, Am, Ax, Aend
Diferente nucleotídeo na posição 467 do gene
Sistema ABO – subgrupos A
O subgrupo A1 – tem mais sítios antigênicos e maior concentração da enzima
conversora do gene H e transferase do que o subgrupo A2.
Genótipo A1 Genótipo A2
– para anti-H + para anti-H
Sistema ABO
Fenótipo Bombay (Bombaim) – Oh (hh)
Sem enzima α-2-L-fucosiltransferase
Falso “O”
Apresentam Ac H
(anti-H no soro)
Reatividade do reagente anti-H com as hemácias: O>A2>B>A2B>A1>A1B
Alelo silencioso (hh) – homozigoto recessivo (não tem lócus H)
https://www.google.com.br/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&frm=1&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=2ahUKEwi88fTS3PPZAhWDHZAKHcSaCkEQjRx6BAgAEAU&url=https%3A%2F%2Fdjalmasantos.wordpress.com%2F2012%2F02%2F23%2Ffalso-o-fenotipo-bombaim-ou-efeito-bombaim%2F&psig=AOvVaw2GaR3z60oNH-vUQe_TJ1sg&ust=1521388677384311
Sistema ABO
O- : doador universal – não produz Ag.
AB+ : pode receber de todos porque não produz anti-A nem anti-B.
Sistema Rh
Codificados por 2 genes: RhD, RhCE sofrem rearranjos gênicos, deleções/mutações 
Principais Ag: D, C/c, E/e (mais de 57 antígenos diferentes)
8 haplótipos: Dce (R0), DCe (R1), DcE (R2), ce (r), Ce (r‟), cE (r„‟), DCE (Rz), CE (ry)
37 epítopos
(Nomenclatura de Fisher & Race e Winer)
Região de reconhecimento do Ac
cromossomo1
Sistema Rh
Sistema Rh
gene gene
cr
Cromossomo 1
Sistema Rh
Poucos Ag expostos
Epítopo - defeitos quantitativos
Sistema Rh 
Epítopos ausentes (mutações no gene RhD) – defeito qualitativo
Formação de aloanticorpos
anti-D em contato com hemácias Rh +
Rh parcial ou mosaico
Dificuldade na fenotipagem e problema na transfusão
Origem africana
Gene híbrido
Rh +
Imuno-hematologia do doador
Provas de compatibilidade transfusional:
• tipagem ABO – doador
- direta – pesquisa de Ag nas hemácias
- reversa – pesquisa de Ac no soro
• tipagem Rh
- pesquisa de Dfraco
• pesquisa de anticorpos irregulares
- Coombs direto - TAD
- Coombs indireto – TAI
- painel de hemácias
- hemolisina (casos de bolsa tripla)
Imuno-hematologia do doador
Testes laboratoriais para tipagem sanguínea
Tipagem ABO – doador
• Direta – pesquisa a presença do antígeno eritrocitário
Pode ser realizada em:
- tubo;
- microplacas;
- gel de centrifugação (cartão).
Obs: em lâmina - desuso
Imuno-hematologia do doador
Testes laboratoriais para tipagem sanguínea
Tipagem ABO – direta em tubo
Hemácias do doador (5%) X soro comercial (anti-A, anti-B, anti-AB, 
anti-D...)
Imuno-hematologia do doador
Hemácias do doador (5%) – 1 mL de solução fisiológica + 1 gota de 
hemácias já lavadas
NaCl – neutraliza a força repulsiva – para maior agrupamento
das hemácias. 
Tipagem sanguínea direta em lâmina
Não se utiliza mais.
Tipagem sanguínea direta em tubo
Imuno-hematologia do doador
Testes laboratoriais para tipagem sanguínea
Tipagem ABO – direta em microplacasImuno-hematologia do doador
Testes laboratoriais para tipagem sanguínea
Tipagem ABO – direta em gel de centrifugação
- Maior sensibilidade
- Padronização na intensidade de aglutinação – leitura em cruzes
- Menor contato com o sangue (biossegurança)
- Teste estável por 2 dias
Imuno-hematologia do doador
Imuno-hematologia do doador
Imuno-hematologia do doador
Testes laboratoriais para tipagem sanguínea
Tipagem ABO – direta em gel de centrifugação
Imuno-hematologia do doador
Tipagem ABO – direta em gel de centrifugação
Resultado em +
Escala de aglutinação – gel/cartão
Neg. Pos. + Pos. ++ Pos. +++ Pos. ++++
Proporcional a quantidade de Ac formados.
Tipagem ABO – doador
• Indireta (reversa) – pesquisa a presença do anticorpos 
naturais
Soro/plasma X hemácias a 5% fenotipadas (A1 e B)
Pode ser realizada em:
- tubo;
- microplacas;
- gel de centrifugação (cartão).
Imuno-hematologia do doador
Problemas na prova direta:
-Ag A e B fracos (poucas transferases)
-Geléia de Wharton (RN) – lavar de 6 a 8X
-Aglutinação por outros Ac 
Problemas na prova reversa:
-Diminuição de Ac naturais (recém-nascido, idosos, imunodeprimidos)
-Geléia de Wharton (cordão: ác. hialurônico, fibroblastos e macrófago)
-Presença de Ac irregulares no plasma
Imuno-hematologia do doador
Imuno-hematologia do doador
Provas de compatibilidade pré-transfusional
• tipagem Rh
-Direta
Soro clones utilizados:
•Anti-D
•Anti- CDE
•Anti-C
•Anti-c
•Anti-E
•Anti-e
Provas de compatibilidade pré-transfusional
• tipagem Rh – CDE
Imuno-hematologia do doador
Imuno-hematologia do doador
Provas de compatibilidade pré-transfusional
• tipagem Rh
-Direta
Soro clone anti-D:
Soro clone policlonais – dificuldade de obtenção da amostra (imunizava doadores e 
colhia soro com Ac formado). 
Soro clone monoclonais – detectar hemácias sensibilizadas por IgG ou por complemento 
para epítopos específicos.*
Soro clone monoclonal IgG – aglutina melhor a 37ᵒC (temp. corporal)* 
Soro clone monoclonal IgM – aglutina melhor a temp. mais baixas 
Imuno-hematologia do doador
Provas de compatibilidade transfusional
• tipagem Rh
- direta
- pesquisa de Dfraco (gel e tubo)
- - - - - -
Pesquisa de D fraco
D fraco – 1+ e 2+
D positivo – 4+
Eritroblastose fetal
Importância da tipagem correta – Imcompatibilidade materno-fetal
Anti-Rh tem alta imunogenicidade.