Identificação de Cocos Gram Positivos - Streptococcus e Enterococcus

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IDENTIFICAÇÃO DE COCOS GRAM 
POSITIVOS
STREPTOCOCCUS E ENTEROCOCCUS
Classificação 
Podem ser classificados de várias maneiras, de acordo com o:
1 - Padrão hemolítico em ágar sangue;
2 - Com as características antigênicas de componentes da parede celular
3 - Quanto às reações (testes) bioquímicas.
1 - Classificação - Streptococcus spp
• Padrão hemolítico em ágar sangue;
• Quanto ao padrão hemolítico, observa-se o aspecto do meio de cultura ao
redor da colônia do microrganismo:
• α-hemolítico – as colônias são circundadas por
uma zona de hemólise parcial (presença de
hemolisinas) e formação de pigmento esverdeado;
• β-hemolítico – as colônias são circundadas por
uma zona de hemólise total (presença de
hemolisinas);
• γ-hemolítico – ausência de hemólise ao redor das
colônias (ausência de hemolisinas).
Streptococcus spp
S. pneumomiaeS. pyogenes / S. agalactiae
Streptococcus do grupo Viridans
Streptococcus do grupo Viridans
2 - Classificação - Streptococcus spp
Características antigênicas - Classificação de Lancefield (
A,B,C,D,F e G), de A até V.
• Grupo A: Streptococcus pyogenes
• Grupo B: Streptococcus agalactiae
Esta classificação baseia-se nas
características antigênicas de um
polissacarídeo, de composição variável,
chamado de carboidrato C, localizado na
parede da célula bacteriana. Sendo assim
foram divididos em 20 grupos sorológicos
Identificação de Cocos Gram-Positivos
• Reação (Testes) bioquímicas (os):
• 1 - Prova de resistência à Bacitracina 
• 2 - Teste de Camp (Camp Test)
• 3 - Teste de Hidrólise do hipurato
• 4 - Teste de resistência à optoquina
• 5 - Teste da bile-esculina
• 6 - Crescimento em BHI (Brain Heart Infusion) c/NaCl 6,5%
• 7 - Teste de PYR (pyrrolidonil arilamidase)
• 8 – Teste da Bile Solubilidade
Streptococcus pyogenes 
(Grupo A de Lancefield)
• Cocos Gram-positivos – Método de coloração de Gram (Roxo);
• Beta hemolíticos 
• Catalase negativos 
• PYR positivo 
• Bacitracina: Sensível 
Prova presuntiva para identificação de Streptococcus
beta hemolíticos: Ágar Sangue
Catalase
Streptococcus ssp Staphylococcus
Teste de Catalase
Enzima que os Staphylococcus possuem que degrada o
peróxido de hidrogênio
Procedimento:
• Colocar uma gota de água oxigenada (10 volumes) na
lâmina
• Pescar uma colônia da bactéria e homogeneizar com a
água oxigenada
• Ocorrendo borbulhamento, a reação é positiva.
Enzima intracelular que decompõem o peróxido de
hidrogênio (H2O2) em água (H2O) e oxigênio (O2).
Teste de PYR - Positivo
Finalidade: O teste de PYR determina a atividade da enzima pyrrolidonil arilamidase produzida pelo S.
pyogenes, mas não pelos demais estreptococos β-hemolíticos. Colônias β-hemolíticas de Enterococos
podem ser confundidas com S. pyogenes, pois ambas apresentam positividade neste teste.
Kit que utiliza a reação de mudança de cor em papel filtro quando na
presença de Streptococcus pyogenes beta hemolítico.
Resultado: Quando ocorre a mudança de cor do papel filtro
para rosa trata-se de um Streptococcus Beta hemolítico.
• PYR positivo: cor vermelha - S. pyogenes
• PYR negativo: amarela ou alaranjada
• S. pyogenes e Enterococcus spp. são PYR positivos.
Teste de Sensibilidade à Bacitracina
Finalidade: O teste tem a finalidade de diferenciar S. pyogenes de outras cepas do grupo A ou de outras
espécies com colônias β-hemolíticas (Enterococcus ssp) PYR positivas.
Procedimento: Um disco de 0,04 U de bacitracina é
aplicado a uma placa de ágar sangue de carneiro que
tenha um inóculo com 4 ou 5 colônias puras de
Streptococcus spp., a ser testado.
Incubar 12 horas a 35± 2ºC.
Resultado:
• Streptococcus pyogenes: sensível à bacitracina
Qualquer halo de inibição ao redor do disco é interpretado como sensibilidade a bacitracina e indicativo 
de S. pyogenes.
S
Streptococcus agalactiae – Grupo B de
Lancefield.
• Cocos Gram positivos – Método coloração de Gram
• Catalase negativos
• Beta hemolíticos – Hemólise total
• Alguns são capnofílicos - cresce melhor em 5% de CO2.
• Teste de CAMP :positivos (Hemólise sinérgica)
• Hidrolise de hipurato de sódio: positivo
Principal causador de sepse, pneumonia e meningite em recém 
nascidos
Teste de CAMP (Christie, Atkins e Munch-Petersen)
Finalidade: O teste visa a identificação de cepas de S. agalactiae (grupo B). Estas cepas produzem o fator
CAMP (Christie, Atkins e Munch-Petersen) que atua sinergicamente com a β-hemolisina produzida pelo
Staphylococcus aureus em ágar sangue.
Procedimento: Semear um inóculo de Staphylococcus aureus
ATCC 25923 (ou cepa de S. aureus com duplo halo de
hemólise) de um ponto a outro da placa de ágar sangue;
• Semear perpendicularmente (90°) a colônia de
Streptococcus β-hemolítico a ser testada, sem que haja o
contato com a estria de Staphylococcus aureus;
• Incubar a 35±2ºC em atmosfera de 5% de CO2 por 48 h.
Interpretação: A formação de uma seta ou meia-lua
convergindo para o S.aureus na intersecção do crescimento
das duas bactérias indica que o teste é positivo e indicativo de
S.agalactiae;
Se não houver formação de seta ou meia-lua, o teste é
negativo e a cepa não pertence ao grupo B de Lancefield.
Teste de hidrólise do hipurato de sódio
Os Streptococcus agalactiae (grupo B) são os únicos
que realizam a hidrolise do Hipurato de Sódio.
+ -
Avaliar a capacidade de hidrolisar o hipurato em seus
componentes glicina e ácido benzoico.
Teste positivo: S. agalactiae
MacFaddin, J.F. 1980. Biochemical tests for the identification of
medicalbac teria, 2nd ed. Williams & Wilkins, Baltimore.
Resumo - Identificação 
de Streptococcus 
BETA hemolítico
Streptococcus pneumoniae 
• Diplococos Gram positivos – Método coloração 
de Gram
• Catalase negativos 
• Alfa Hemólise: hemólise parcial
• Teste de Susceptibilidade à Optoquina: 
Sensível 
• Teste da Bile Solubilidade: límpido (sem 
turvação)
Teste de Susceptibilidade à Optoquina - Sensível
Finalidade: A Optoquina é uma droga solúvel em água que se difunde rapidamente em meio de cultura
sólido. Para este teste, em geral, utiliza-se o disco de Optoquina de 6 mm contendo 5 µg da droga. O teste
tem sensibilidade maior que 95%, sendo considerado de baixo custo e simples de ser realizado.
R S
Procedimento: Semear a suspensão (inócuo) em
uma placa de ágar sangue de carneiro 5% de forma
a obter crescimento confluente;
• Após a absorção da suspensão pelo meio de
cultura, colocar um disco de Optoquina na
superfície do meio semeado, com o auxílio de
uma pinça;
• Incubar a 35±2ºC e 5 - 7% de CO2 por 18 - 24 h;
• Fazer a leitura do halo de inibição do
crescimento bacteriano.Interpretação: Presença de halo ≥ 14 mm indica
que a cultura é sensível à Optoquina, sendo
identificado para Streptococcus pneumoniae.
Atenção: O pneumococo pode apresentar halos <
14 mm (13mm), como os estreptococos do grupo
viridans. O teste da bile solubilidade deve então
ser realizado.
Grupo viridans 
Teste da Bile Solubilidade
Finalidade: Como os sais biliares (desoxicolato de sódio ou taurocolato de sódio) têm a capacidade de lizar
seletivamente o S. pneumoniae em fase logarítmica do crescimento.
Objetivo: Indicar a presença de S.
pneumoniae
• Incubar caldo + bactéria teste a 35°C por 3
horas
• Inocular (adicionar) suspensão de
desoxicolato 10% (Sais biliares).
• Clareamento reflete lise bacteriana →
resultado POSITIVO
Positivo: tubo sem turvação ou menor turvação em relação ao controle negativo 
mostrando a lise total da suspensão bacteriana na presença de sais biliares.
+
Teste de Susceptibilidade
à Optoquina – Resistente.
Teste de Bile-Esculina - Negativo 
Finalidade: Avaliar a capacidade de algumas bactérias hidrolisarem esculina
em presença de sais biliares. E identificar bactérias que são capazes de crescerem em
presença desses sais.
Ágar Bílis-Esculina Procedimento: 
• Estriar a superfície inclinada do meio;
• Incubar a 35ºC 24 horas.
Interpretação:
• Cor original do meio: acinzentado
• Positivo: Enegrecimento em pelo menos metade ou mais do 
meio.
• Negativo: Ausência de enegrecimentoou crescimento de 
menos da metade do meio após 72 horas de incubação.
Streptococcus grupo viridans
-+
Teste de Bile-
Esculina – Positivo 
Teste do NaCl 6,5% (Crescimento em BHI)
Finalidade: Diferenciação e identificação de Enterococos e Streptococcus grupo D de
Lancefield (S. bovis, S. equinus)
Procedimento: 
• Inocular as colônias isoladas e aguardar
• Incubar o tubo inoculado à 35°C por ate 48 hrs
• Após incubação observar os tubos.
Interpretação:
• POSITIVO: Enterococcus ssp - turvação do
meio (crescimento de microrganismos).
• NEGATIVO :Streptococcus ssp - sem turvação
do meio (não há crescimento de
microrganismos). S.bovis e equinus
FIM