Coloração de Gramm

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- É uma técnica que permite analisar forma, organização e 
agrupamento das bactérias. 
-Vantagens: método rápido e de baixo custo 
Foi desenvolvida em 1884 pelo bacteriologista Hans Christian Gram 
- Com base na reação a coloração de Gram as bactérias podem 
ser dividias em 2 grupos principais: 
• Gram +: possui uma parede celular com espessa camada 
de peptidogrlicano 
• Gram – : possui uma camada de peptidoglicano delgada, 
e além disso possui uma membrana externa com grande 
quantidade de lipídios 
A diferença de reação a coloração deve-se a diferença nas 
estruturas das bactérias 
Como a coloração de Gram é uma coloração diferencial, são 
empregados dois corantes contrastantes que vão gerar cores 
diferentes em grupos bacterianos distintos 
- Cristal violeta 
- Lugol que atua como fixador 
- Solução de álcool-acetona 
- Fucsina 
 - Preparar o esfregaço que será corado
- Material: suspensão de uma bactéria obtida no meio de 
cultura/ amostra clínica 
- Esse material deverá ser espalhado por uma superfície 
de uma lâmina, que posteriormente é deixada para secar 
e após um curto período de tempo realiza-se a fixação 
do esfregaço na lâmina através do calor
 - Cobrir a lâmina com cristal violeta e deixar agir por um 
minuto 
- Nesta etapa as bactérias Gram + e Gram- são coradas 
em roxo ou violeta escuro 
- Após 1 minuto a lâmina é lavada com água 
 – Esfregaço é coberto com Lugol por 1 minuto. Que vai 
agir fixando o cristal violeta dentro das células 
– Posteriormente o Lugol será lavado 
 – Lamina é descorada com álcool-acetona, removendo a 
coloração das bactérias Gram -, porém não das Gram +, 
isso ocorre porque as bactérias Gram + apresenta uma 
camada espessa de peptidoglicano que atua como uma 
rede, que ao sofrer desidratação pelo álcool-acetona fecha 
sua malha retendo o corante
- Bactérias Gram – a camada de peptidoglicano é muito 
delgada e a sua desidratação não é suficiente para que 
ocorra fechamento da falha, consequentemente ocorre 
extravasamento do corante. Além disso, o álcool-acetona 
solubiliza os lipídios da membrana externa das bactérias 
Gram – que facilita ainda mais o extravasamento do 
corante 
- Ao final dessa etapa as bactérias Gram + continuam 
coradas em roxo e as Gram – se tornam incolor 
 - A lâmina é coberta com contracorante Fuscina por 45 
segundos 
– Como as bactérias Gram + reteram a cor roxa do cristal 
violeta, não são afetadas pelo contracorante Fuscina 
– Já as bactérias Gram – foram descorada, e nessa etapa 
serão corada pela fuscina ficando na cor rosa 
- ́ Para finalizar o processo a lâmina é lavada e secada com 
papel toalha ficando pronta para análise 
- Deverá ser utilizada a objetiva de 100x com óleo de imersão 
- Alguns bacilos apresentam espaços não corados, 
principalmente na região terminal, que corresponde ao local de 
formação do endóscópio que não é corado pela coloração de 
Gram 
 
- Uma boa metodologia de Gram, deve mostrar bactérias Gram 
+ coradas de roxo, e que células células eucarióticas como 
leucócitos, bem como população de bactérias Gram – deve-se 
apresentar na cor rosa. Entretanto algumas falhas no 
procedimento podem afetar o resultado final da coloração