Coloração de Gram

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• ALGUNS CONCEITOS 
IMPORTANTES 
➔ Colônia: Conjunto de células 
bacterianas possíveis de serem 
observadas a olho nu. 
 
➔ LUGOL: solução mordente que 
contém Iodo, se junta com o Cristal 
violeta e FIXA NA PAREDE 
CELULAR. 
 
➔NAM (ácido N-acetilmurâmico ligado 
ao NAG (N- acetilglicosamina) são os 
principais componentes da parede 
celular. 
 
➔O ÁLCOOL DESTRÓI A 
MEMBRANA EXTERNA DAS GRAM 
NEGATIVAS! 
 
➔ O cristal violeta é responsável por 
colorir a parede celular. 
 
➔FUCSINA: vermelha 
 
 
• ETAPAS PARA A 
IDENTIFICAÇÃO DAS 
CARACTERÍSTICAS 
MORFOTINTURIAIS DE UMA 
BACTÉRIA: 
 
1° PREPARAÇÃO DO 
ESFREGAÇO 
Selecionar a colônia, pegar a 
lâmina e adicionar solução salina, 
formando assim o esfregaço. 
 
 2° FIXAÇÃO DO ESFREGAÇO 
Passar a lâmina 3x sobre a chama 
do bico de Bunsen para secar a 
mistura feita anteriormente. 
 
3° COLORAÇÃO DE GRAM 
Agora, com a lâmina contendo o 
esfregaço já fixado, inicia-se a 
bateria de etapas da coloração de 
gram: 
 
 
Cristal 
violeta 
por 1 min
Lavar 
com água
Lugol por 
1 minuto
Lavar com 
álcool
Fucsina 
por 30 
segundos
 
 
 
• 4° MICROSCOPIA 
Após a realização das etapas citadas, 
é hora de avaliar no microscópio. 
 
 
➔ COLORAÇÃO DE GRAM: 
CARACTERÍSTICAS MORFOTINTURIAIS 
(Morfologia: bastonete, bacilo, espiroqueta...) 
e (Tintural: gram positiva ou negativa) 
 
GRAM POSITIVA: ROXO 
 ➔Por possuírem espessa camada de 
peptideoglicanos (de 25 a 40 camadas), as 
bactérias gram positivas não são 
afetadas na etapa do álcool, 
permanecendo assim com a coloração 
roxa/ azulada. 
 
GRAM NEGATIVA: VERMELHO 
➔ As bactérias gram negativas possuem 
uma membrana externa que é destruída 
após a lavagem com álcool. Além disso, 
por possuírem POUCAS camadas de 
peptideoglicanos, essas bactérias não 
conseguem reter o corante, ocasionando a 
perda do Cristal violeta e do Lugol. Logo, 
ficam incolores. Após a etapa da Fucsina, 
elas adquirem a coloração avermelhada. 
 
 
 
➔Poucas camadas de peptideoglicano: 
GRAM NEGATIVAS 
 
➔MUITAS camadas de peptideoglicano: 
GRAM POSITIVAS 
 
➔ Peptideoglicanos: função de dar resistência 
à estrutura das células e proteção contra 
forças externas.