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Coleta de amostras Critérios para rejeição de amostras 21/03/2021 1 Definição de material biológico • Líquidos • Sangue • Secreções • Excreções • Fragmentos de tecido obtidos do corpo humano • Quantidade e condições adequadas tecnicamente para analises 21/03/2021 2 21/03/2021 3 Amostras de sangue • Geral: tubo após centrifugação: coágulo • Anticoagulante: EDTA/heparina 21/03/2021 4 Outros tipos de amostras • Sangue, soro ou plasma venoso • Sangue arterial • Sangue capilar • Mancha de sangue em um papel de filtro (Cartão Guthrie) • Urina • Fezes • Líquido cefalorraquidiano • Expectoração e saliva • Tecido e células Aspirados (fluido pleural,fluido das articulações (sinovial) intestinal (duodenal) pseudocistos pancreáticos 21/03/2021 5 Amostras perigosas RISCO BIOLÓGICO Fases • 1. Pré analítica • 2. Analítica • 3. Pós analítica 21/03/2021 6 O que pode alterar um exame laboratorial ?? 21/03/2021 7 Erros na coleta ➢Técnica de coleta do sangue ➢Estase prolongada durante a punção venosa: ➢A água do plasma se difunde para o espaço intersticial e a amostra de soro ou plasma obtida vai estar concentrada. Proteínas e compostos plasmáticos ligados a proteínas, como cálcio ou tiroxina, estarão falsamente elevados. ➢Amostra insuficiente. ➢Erros no tempo de amostragem. ➢Frasco de amostra incorreto ➢Armazenamento incorreto da amostra. 21/03/2021 8 Fontes de Erro FASE PRÉ ANALÍTICA 46-68% ANALÍTICA 7-13% PÓS ANALÍTICA Tempo de jejum Estase venosa prolongada Flebotomia inadequada Requisição inadequada Perda da requisição Identificação errada do paciente Interpretação errônea da requisição Orientação inadequada ao paciente Utilização do aditivo inadequada na obtenção do espécime diagnostico Centrifugação inadequada Falha no equipamento Perda da amostra Troca na identificação da amostra Contaminação entre amostras Perda do resultado Interpretação incorreta Erro na transcrição do resultado Instabilidade no sistema de informação laboratorial (SIL) Tempo de liberação de resultado acima do especificado 21/03/2021 9 FASE PRÉ ANALÍTICA • Requisição: ➢Informações suficientes para identificação: ➢Preparo do paciente ➢Coleta ➢Armazenamento ➢Transporte ➢ Do paciente e do requisitante ➢ Dos dados clínicos, epidemiológicos e medicamentos em uso ➢ Da amostra ou material a ser coletado e suas respectivas análises Separar os materiais adequados para realização da coleta Realizar a coleta utilizando os equipamentos de proteção individual necessários Descartar os materiais contaminados em lixo apropriado e de maneira segura Centrifugar o sangue quando necessário e separar o soro ou plasma adequadamente. O soro é basicamente o plasma sem o fibrinogênio 21/03/2021 10 FASE PRÉ ANALITICA 1. Variação Cronobiológica: em função do tempo; diário, sazonal, anual.... • Ferro: coleta a tarde fornecem resultados 50% mais baixos dos que obtidos nas amostras coletadas pela manha. • 2. Gênero: diferenças hormonais • Parâmetros sanguíneos e urinários se apresentam em concentrações distintas entre homens e mulheres: diferenças metabólicas • 3. Idade: fatores: • Maturidade funcional dos órgãos e sistemas • Conteúdo hídrico e massa corporal. Em situações específicas, até os intervalos de referência devem considerar essas diferenças 21/03/2021 11 POSTURA POSIÇÃO SUPINA EM PÉ afluxo de água e substâncias filtráveis do espaço intravascular para o intersticia PROTEÍNAS ALTO PM ELEMENTOS CELULARES albumina, colesterol, triglicérides, hematócrito, hemoglobina, drogas que se ligam às proteínas e o número de leucócitos podem ser superestimados. 8 a 10% da concentração inicial. 21/03/2021 12 Atividade Física componentes sanguíneos: transitório ➢mobilização de água e outras substâncias entre os diferentes compartimentos corporais ➢variações nas necessidades energéticas do metabolismo ➢eventual modificação fisiológica que a própria atividade física condiciona. a coleta de amostras com o paciente em condições basais, mais facilmente reprodutíveis e padronizáveis esforço físico: Aumento da atividade sérica: Creatinaquinase Aldolase asparato aminotransferase, pelo aumento da liberação celular 21/03/2021 13 Jejum • Habitual: 8 h • TG: 12 a 14 h • Reduzido: 4 h (maioria dos exames) • Situações especiais (crianças de baixa idade) • 1 ou 2 horas apenas. 21/03/2021 14 Dieta Interfere na concentração de alguns componentes Alterações bruscas: certo tempo para que alguns parâmetros retornem aos níveis basais 21/03/2021 15 Uso de Fármacos e Drogas de Abuso • substâncias com finalidades terapêuticas • fins recreacionais efeito fisiológico (in vivo) interferência analítica (in vitro) indução e a inibição enzimáticas/competição metabólica/ação farmacológica. ligação preferencial às proteínas e eventuais reações cruzadas. 21/03/2021 16 Fase Pré-analítica para Exames de Sangue RDC 302 • coleta de sangue: solicitação da análise obtenção da amostra análise Variáveis mais evidentes: ➢ amostra insuficiente; ➢ amostra incorreta; ➢ amostra inadequada; ➢ identificação incorreta; ➢ problemas no acondicionamento e transporte da amostra. 21/03/2021 17 ERROS NA COLETA • Não utilizar os materiais adequados • Não identificar as amostras corretamente • Não padronizar os procedimentos ➢fase 1: pré-analítica: HEMOLISE ➢fase 2: analítica; ➢fase 3:pós-analítica. ➢Não estar atento à variação cronobiológica ➢Não prevenir a hemólise 21/03/2021 18 Estabilidade Pré analítica da Amostra ➢Capacidade dos seus elementos se manterem nos valores iniciais, dentro de limites de variação aceitáveis, por um determinado período de tempo. • Fatores • temperatura, • carga mecânica • Tempo (maior impacto). • Em geral: • limites para a temperatura: • Ambiente : 18 a 25ºC • Refrigeradas: 4 a 8ºC • Congeladas: < - 20ºC 21/03/2021 19 COLETA DE SANGUE • HOMOGENIZAÇÃO DOS TUBOS DE COLETA (tubo primário: evitar transferência de um tubo para outro) • POR INVERSÃO (5 a 10x) • SANGUE TOTAL: ARTERIAL/CAPILAR OU VENOSA • AS CONCENTRAÇÕES DOS CONSTITUINTES PERMANECEM RELATIVAMENTE INALTERADOS QUANDO COMPARADOS COM O SEU ESTADO IN VIVO • OBTIDA COM ANTICOAGULANTE PARA ESTABILIZAR OS CONSTITUINTES POR UM CERTO PERIODO DE TEMPO 21/03/2021 20 Fontes de variação 21/03/2021 21 Sem coagulante: soro: creatinine/glicose/ureia/cholesterol/Ac e Ag no soro. Gel separador/ativador para acelarar retração do coagulo:dosagens bioquímicas e hormonais e sorologias. EDTA: hematologia: eritrograma/leucograma/plaquetas HEPARINA SÓDICA: sangue total/estavel 48 h: testes bioquimicos, gasometria CITRATO DE SÓDIO: plasma/provas de coagulação: tempo de coagulação, retração de coágulo, tempo parcial de tromboplasmina e tempo de protrombina. Anticoagulante e um estabilizador: EDTA, fluoreto de sódio, heparina: inibição da glicólise para determinação da tx de glicose sanguinea. 21/03/2021 22 Processamento da amostra 21/03/2021 23 Processamento da amostra • SORO: TUBO SEM GEL SEPARADOR: • Aguardar a completa coagulação à temperatura ambiente seguida de centrifugação a 3.000 rpm/10 min. • SORO: tubo com gel separador: • Imediatamente após a coleta homogeneizar (inversão: 5-8x), repouso, verticalmente/30 min para retrair o coagulo e seguir a centrifugação 3000/10 min. • Com anticoagulante(citrato, EDTA/heparina): 2000-3000/15 min. 21/03/2021 24 INTERFERÊNCIA DE RELEVÂNCIA CLÍNICA Interferência exógena Substâncias não encontradas naturalmente no espécime do paciente: medicamentos e outras drogas, componentes dos tubos, aditivos e demais processos que afetam a amostra como transporte e armazenamento. Interferência endógena Substâncias encontradas naturalmente na amostra do paciente. Podem ser substâncias naturais ou fatores relacionados à saúde: hemólise (hemoglobina e outras substâncias),bilirrubina, lipídios, proteínas, anticorpos, etc. 21/03/2021 25 Hemólise liberação de hemoglobina e os componentes intracelulares no plasma; soro ou plasma vermelho pálido até a cor vermelha cereja. Lipemia: excesso de lipídios na corrente sanguínea. plasma ou soro: turvo ou leitoso, interferindo principalmente em testes que usam sistemas ópticos de leitura. Icterícia: soro ou plasma: amarelo brilhante, indicando a presença elevada de bilirrubina. Essa coloração é característica de problemas hepáticos. https://kasvi.com.br/tubos-de-coleta-interferentes-sangue/ SAUDÁVEL HEMÓLISE ICTERÍCIA LIPEMIA 21/03/2021 26 Transporte de Amostra • Entre unidades de um mesmo laboratório • Entre unidades diferentes na mesma cidade • Para unidades do exterior. O processamento inicial da amostra pré-centrifugação, centrifugação pós-centrifugação. Não pode exceder 1 h regras de biossegurança A RDC 302/2005 da Anvisa prevê no parágrafo 6.1.10: A amostra de paciente deve ser transportada e preservada em recipiente isotérmico, quando requerido, higienizável, impermeável, garantindo a sua estabilidade desde a coleta até a realização do exame, identificado com a simbologia de risco biológico, com os dizeres “Espécimes para Diagnóstico” e com nome do laboratório responsável pelo envio. https://pfarma.com.br/noticia-setor- farmaceutico/legislacao-farmaceutica/1592-resolucao- regulamenta-transporte-de-material-biologico.html 21/03/2021 27 Causas de rejeição de amostras • Para os testes de coagulação • material coagulado • Coleta efetuada com o anticoagulante incorreto • Tubos coletados desrespeitando-se a proporção adequada entre sangue e anticoagulante, para mais ou para menos (de até 10% nesta proporção) • Tubos contendo amostras identificadas erroneamente • Tubos sem identificação da amostra • Material coletado ou estocado em tubos que tenham superfície ativadora de coágulo • Forte hemólise • Amostras de sangue total congeladas, antes de serem processadas 21/03/2021 28 Amostras de urina • Frascos de amostra de urina podem conter um conservante para inibir o crescimento bacteriano, ou ácido para estabilizar certos metabólitos. • Eles devem ser grandes o suficiente para coletar uma amostra completa de 24h. • Amostras de urina aleatórias são coletadas em frascos “universais”. 21/03/2021 29 Urina • TIPOS DE URINA • ROTINA • 24 HORAS • JATO MEDIO • CATETERIZADA • ASPIRAÇÃO SUPRAPÚBICA • PEDIÁTRICA 21/03/2021 30 URINA 21/03/2021 31 3 /2 1 /2 0 2 1 32 3/21/2021 33 Coleta em parasitologia • Coleta, preservação e transporte de amostras • Coleta de amostras frescas: • não requer jejum do paciente nem restrição de alimentação. • PODE SE APRESENTAR: • Aquosas • Liquefeitas • Pastosas • Amolecidas • Firmes, consistentes ou, ainda, petrificadas.. 21/03/2021 34 Presença ou não de muco ou sangue frasco coletor universal de plástico limpo e seco com tampa de rosca. Tempo entre a coleta e a realização do exame • Amostras de fezes liquefeitas ou diarreicas frescas devem ser examinadas até 30 minutos após a coleta • Amostras pastosas: até 60 minutos • Amostras formadas ou endurecidas podem ser examinadas no mesmo dia ou no dia seguinte. • Conservação:Até que sejam enviadas para análise: temperatura de conservação das amostras é a ambiente. 21/03/2021 35 Interferentes • Medicamentos antimaláricos • Acido acetilsalicílico • Antibióticos • Contrastes radiológicos (bário e bismuto) • Óleo mineral (laxante) 21/03/2021 36 interferir no exame parasitológico, afetando principalmente protozoários. Líquor • Pinção lombar: 1891 – Quinckle • PL é uma importante ferramenta de auxílio diagnóstico de doenças neurológicas: • Diagnóstico/terapias. • Transporte e condições de armazenamento • Fatores: • Técnica de coleta • Temperatura • Tempo de transporte/estocagem • Condições do preparo da amostra 21/03/2021 37 padronização Evitar resultados equivocados/ comprometer diagnostico e a conduta médica Líquor • Volume de LCR • ADULTOS: coleta em 2 a 3 tubos estéreis/volume total entre 6 e 12 mL Crianças -4-8 ML • Lactentes e recém-nascidos: 2-3 ML. • Preparo da amostra para análise citológica: 2 h: • Alteração morfológica e/ou lise de elementos celulares e hemácias. • Transporte: Recipiente térmico/de acordo com o tempo de transporte 21/03/2021 38 Critérios para rejeição de amostras • Identificação das Amostras: Falta de Etiquetas • Tubos não centrifugados • Soros hemolisados • Caixas de transporte desorganizadas • Caixas sem GELOX suficiente • Etiquetas cortadas • Etiquetas descolando • Coleta inadequada 21/03/2021 39 Critérios de rejeição de amostras no setor de hematologia: • Para Hemogramas: • Amostra sem identificação ou com identificação incorreta • Amostra coagulada ou com microcoágulos; • Amostra coletada em tubo incorreto • Amostra com volume de sangue inferior a marca indicada pelo fabricante do tubo de hemograma 21/03/2021 40 Rodrigues, 2016 Para Velocidade de Hemossedimentação (VHS): • Amostra sem identificação ou com identificação incorreta • Amostras que não foram coletadas no tubo apropriado para realização do exame • Para tubos de VHS, amostras coletadas com volume de sangue inferior a marca indicada pelo fabricante do tubo de VHS • Amostras coaguladas • Amostras coletadas há um tempo superior a duas horas. 21/03/2021 41 Para Coombs Direto, Contagem de Reticulócitos, Classificação Sanguínea • Amostra sem identificação ou com identificação incorreta • Amostras que não foram coletadas no tubo apropriado para realização do exame • Amostra coagulada. • Critérios de rejeição de amostras no setor de bioquímica • Amostra sem identificação ou com identificação incorreta; • Amostra hemolisada • Amostra com quantidade insuficiente de sangue coletado; 5. Amostra coletada em tubo incorreto; 6. Amostra altamente lipêmica (Figura 9), caso tenha sido solicitado Lipidograma (Colesterol Total, frações do colesterol e triglicerídeos). Lipemia é a turbidez do soro ou plasma causada pela elevação de lipoproteínas 21/03/2021 42 Critérios de rejeição de amostras no setor de bioquímica: • Amostra sem identificação ou com identificação incorreta; • Amostra hemolisada • Amostra com quantidade insuficiente de sangue coletado • Amostra coletada em tubo incorreto • Amostra altamente lipêmica: caso tenha sido solicitado Lipidograma (Colesterol Total, frações do colesterol e triglicerídeos). 21/03/2021 43 Critérios de rejeição de amostras no setor de urinálises: • Para Sumário de Urina: • Amostra sem identificação ou com identificação incorreta • Amostra que ultrapasse o tempo decorrido de 2 horas após coleta • Amostra com contaminação visível a olho nu (material menstrual, fecal, óleo ou outros resíduos • Amostras com volume insuficiente • Amostra coletada em coletor incorreto • Para Urina de 24horas: • Amostra sem identificação ou com identificação incorreta; • Amostra coletada em coletor incorreto • Amostras que não tenham sido devidamente coletadas no período de 24 horas; 21/03/2021 44 Critérios de rejeição de amostras no setor de parasitologia • Amostra sem identificação ou com identificação incorreta Amostra que não foi coletada em coletor adequado Critérios de rejeição de amostras de líquidos biológicos: Amostra não identificada ou com identificação incorreta Para estudo do líquido, na contagem diferencial no aparelho de hematologia, amostras coaguladas Amostra coletada em tubos incorreto. 21/03/2021 45 Critérios de rejeição de amostras para a gasometria: • Amostras não identificadas: sem o número do prontuário e sem o nome do paciente • Amostras coaguladas • Amostras contendo bolhas de ar • Amostras com volume de sangue insuficiente ou acima do volume do ideal informados pelo fabricante da seringa • Amostras coletadas em seringa inadequada • Amostras coletadas com tempo superiora 30 minutos; 21/03/2021 46 Caso clínico • Uma amostra de sangue foi retirada de uma mulher de 65 anos para verificar sua concentração sérica de potássio, pois ela estava sendo tratada com diuréticos tiazídicos por algum tempo. O Clínico Geral deixou a amostra em seu carro e entregou ao laboratório a caminho de uma cirurgia na manhã seguinte. Imediatamente após analisar a amostra, o bioquímico ligou para o Clínico Geral. Por quê? • perfil de resultados apresentado: • ureia sérica = 11 ,8 mg/L • Sódio = 130 mmol/L • Potássio = 6,7 mmol/L 21/03/2021 47 Dica: Doença de Addison Resolução • Não é sabido se houve atraso no transporte da amostra até o laboratório, e o perfil de resultados apresentado (ureia sérica = 11 ,8 mg/L, sódio = 130 mmol/L e potássio = 6,7 mmol/L) sugere que o paciente pode ter depleção de sódio associada à uremia pré-renal e hipercalemia. Este perfil, se correto, é típico de doença de Addison, uma emergência endócrina. No entanto, um atraso na separação do soro e do coágulo torna as concentrações de potássio e sódio não confiáveis, uma vez que esses íons se movem, por meio de seus gradientes de concentração, para dentro e para fora dos eritrócitos. Neste sentido, outra amostra é requerida, a fim de se estabelecer o verdadeiro perfil de eletrólitos do paciente. 21/03/2021 48 ATIVIDADE EXTRA CLASSE (BUSCA ATIVA) • Elaborar um “manual de instruções”, contemplando os seguintes itens: • Coleta , identificação e conservação da amostra • Transporte da amostra, meio recomendado, prazo, condições de temperatura e padrão técnico para garantir a integridade e a estabilidade; • Critérios para o preparo do cliente com instruções claras e escritas em linguagem acessível. • Somente as instruções simples e de fácil compreensão podem ser dadas verbalmente; • Critérios para aceitação ou rejeição das amostras. 21/03/2021 49
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