Apresentação lipidação

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARÁ
INSTITUTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM GENÉTICA E 
BIOLOGIA MOLECULAR
Discentes: Cleyson
Miguel
Wemily
Outubro, 2019
Lipidação de Proteínas
Lipidação de Proteínas
É uma modificação pós-translacional chave que está envolvida em vários
processos
➢ localização da proteína;
➢ no devido tráfego de proteína intracelular própria;
➢ interações proteína-proteína.
A lipidação de proteínas é frequentemente exigida para a devida atividade
biológica.
As atividades biológicas de muitas proteínas celulares exigem associação
com a membrana celular, que depende da modificação pós-tradução de cys ou gly
por resíduos de lipídios tais como frações de farnesila, miristoíla e palmitoíla.
Por exemplo, muitos receptores acoplados de proteína G são palmitoilados,
proteínas Ras são tanto farnesiladas quanto palmitoiladas.
Embora farnesilação de proteína seja uma modificação estável e
irreversível, a palmitoilação é reversível, resultando na regulação dinâmica de
função de proteína, e alvejamento específico das membranas celulares.
Lipidação de Proteínas
Miristoilação
É um mecanismo de acilação específico à gly da porção N-ter de proteínas. É um
processo que ocorre em diversas proteínas, de eucariotos inferiores e superiores,
consistindo na ligação covalente de um miristato, um ácido graxo de 14C, à gly da porção
N-ter, pela enzima NMT
As proteínas N-miristoiladas possuem diversas funções biológicas e seus
representantes mais comuns incluem serina/treonina quinases, tirosina quinases,
substrato quinases, fosfoproteína fosfatases, outros tipos de proteínas envolvidas em
cascatas de sinais de transdução e mediadores de transporte de proteínas e vesículas.
Gly, com frequência é o
segundo aa incorporado à
cadeia polipeptídica durante a
tradução, o resíduo iniciador
de met é eliminado por
proteólises antes da adição do
ácido graxo.
Muitas proteínas que são
modificadas por miristoilação
estão associadas à cara interna
da membrana plasmática.
Miristoilação
Palmitoilação
➢ É um processo reversível em que o ácido palmítico –um ácido graxo de 16C- é
adicionado ao resíduo de cys por ligação tioester.
➢ Está relacionada a funções importantes no tráfego subcelular de proteínas
através de compartimentos membranosos, assim como a modulação de
interações proteína-proteína.
➢ A enzima encargada de catalisar essa reação é a palmitoiltransferase (PAT), ou
simplesmente acetiltrasnferase.
Palmitoilação
➢ Envolve a transferência de um grupo farnesilo -isoprenoide de 15 C-, ou geranil-
geranil –cadeia de 20 C- para o C-cisteína terminal da proteína alvo. Ambos são
compostos isoprenoides derivados da via de síntesis de colesterol.
➢ Os grupos isoprenoides unem-se a residuos de cys presentes na extremidade C-
terminal das proteínas mediante união tioéter entre o grupo –SH da cys da
proteína integral e o –OH do grupo prenílico.
Prenilação
➢ Identificou-se uma sequencia comum nas proteínas que são preniladas.
➢ C A A X
➢ Onde C: cys
A: qualquer aminoácido alifático (exceto ala)
X: met ou ser para a farnesilação, leu para a geranilação
Prenilação
Prenilação
Ras converting enzyme 1
Isoprenilcisteína
carboximetiltransferase
➢ Proteína oncogénica ras 
➢ A subunidad G da transducina
➢ Numerosas proteínas de transdução de sinais que unem GTP 
(proteínas G)
Proteínas que são preniladas
Proteínas Ras
São um conjunto de reguladores moleculares muito importantes em uma ampla
variedade de vias de transmissão de sinais celulares que controlam diferentes fenômenos:
➢ integridade do citoesqueleto;
➢ proliferação;
➢ diferenciação;
➢ adesão e migração celular;
➢ apoptose.
Tanto o gene quanto as proteínas RAS relacionadas são frequentemente alteradas
em tumores malignos, causando um aumento na capacidade de invasão e metástase e
uma diminuição na apoptose.
➢RAS está ativada quando combinada com GTP e inativa
quando ligada a GDP.
➢GEFs.
➢RAS pode se ligar a outras proteínas que estimulam a
Via MAP-quinase e dirigir a proliferação e diferenciação
celular.
➢ Se a prenilação for inibida por inibidores de FTase e GGTase– I o complexo proteico com
a porção terminal CAAX não se liga ao retículo endoplasmático, não sendo processado e
não adquirindo as propriedades ideais para a sua associação com a membrana
plasmática. Como consequência não haverá o desencadeamento da ativação da
transdução de sinal mediada pela proteína RAS.
➢Para inativação da proteína RAS, as proteínas ativadoras de GTPase catalisam a hidrólise
do GTP para GDP. A mutação oncogênica principal da proteína K-RAS interfere no evento
terminal e, como resultado, a proteína é mantida permanentemente ativada e um sinal
contínuo de indução de proliferação.
Proteínas Ras
Método 
• 1. CD34 isolation from AML patient simples
• 2. AML cell line, compounds and antibodies Human AML cell lines 
THP-1, Kasumi-1 and MV411
• 3. BrdU proliferation assay
• 4. Flow cytometry of Annexin V/7-AAD
• 5. Plasmid transfection, containing human HRAS Q61L
• 6. Ras activation ELISA assay
Resultados
Pamidronate is active 
against AML cell lines and 
augments efficacy of 
standard of care
Resultados