citometria de fluxo aplicada à série branca do hemograma

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Citometria de Fluxo Aplicada à Série Branca do HemogramaAula 6 08.04.2021
BMDT
Hemograma 
 É a semiologia das células do sangue. A avaliação quantitativa é 
totalmente automatizadas, feita em contadores eletrônicos. Os glóbulos são 
contados e medidos um a um, a hemoglobina dosada por colorimetria, tudo 
com inacreditável exatidão; o software, em contínua atualização, deriva de 
um número cada vez mais amplo de dados que, de inicialmente 
experimentais, rapidamente se transformam em informações de utilidade 
clínica. A avaliação qualitativa – identificação dos subtipos celulares e das 
anormalidades morfológicas relevantes, especialmente da série vermelha – 
ainda não chega à perfeição da tecnologia numérica. Embora o advento do 
Sysmex CellaVision permita identificação computadorizada da morfologia 
microscópica dos leucócitos por comparação com um banco de dados, o olho humano ao microscópio, que criou a Hematologia e a 
acompanha desde o fim do século XIX, persiste necessário.
 Exame de fácil execução: pode ser realizado manualmente ou de forma automatizada e microscopia.
 Avalia de forma quantitativa e morfológica (qualitativa dos elementos) os elementos figurados do sangue (eritrócitos, 
leucócitos e plaquetas - biópsia do sangue);
 Divide-se em:
 
📌
Eritrograma (série vermelha, hemácias);
 
📌
Leucograma (série branca, leucócitos);
 
📌
Plaquetograma (plaquetas).
Plasma 
Células Brancas do Sangue 
 Os leucócitos (glóbulos brancos) são as unidades móveis do 
sistema de proteção do corpo. Eles são formados na medula 
óssea e no tecido linfático, sendo transportados no sangue para 
as áreas de inflamação, a fim de proporcionar uma defesa 
rápida e potente contra os agentes infecciosos. Cinco tipos de 
leucócitos normalmente são encontrados no sangue. As 
percentagens normais dessas células são as seguintes:
 
📌
Neutrófilos polimorfonucleares: 62%.
 
📌
Eosinófilos polimorfonucleares: 2,3%.
 
📌
Basófilos polimorfonucleares: 0,4%.
 
📌
Monócitos*: 5,3%.
 
📌
Linfócitos: 30%.
 Os glóbulos brancos são transportados da medula óssea ou 
dos tecidos linfoides pela circulação sanguínea para as áreas 
onde eles são necessários. O tempo de vida dos granulócitos 
liberados a partir da medula óssea normalmente é de 4 a 5 
horas no sangue circulante e adicionalmente de 4 a 5 dias nos 
tecidos. Quando há uma infecção grave no tecido, o tempo de 
vida total frequentemente é abreviado para apenas algumas 
horas, porque os granulócitos se dirigem rapidamente para
a área infectada, realizam a sua função e são destruídos 
no processo. 
 Os monócitos também têm um curto tempo de trânsito, 
de 10 a 12 horas, antes da sua entrada nos tecidos. Uma 
vez nos tecidos, eles aumentam seu volume para se 
transformarem em macrófagos teciduais. Eles podem viver 
dessa forma durante meses, exceto se forem destruídos 
durante a execução de suas funções fagocíticas.
 Os linfócitos entram no sistema circulatório 
continuamente, junto com a drenagem da linfa nos 
linfonodos. Depois de algumas horas, passam do sangue 
para os tecidos através da diapedese. Passado algum tempo, 
eles reentram na linfa e retornam para o sangue 
novamente; assim, os linfócitos estão continuamente em 
circulação em todos os tecidos. Os linfócitos têm uma 
sobrevida de meses ou mesmo anos, dependendo da 
necessidade do corpo em relação a essas células.
Aspecto granular 
= granulócitos*
*Fagócitos 
Citopenia: é a alteração de células sanguíneas, ou 
seja alteração que tenha sentido de diminuição. 
Plaquetopenia: gera sangramento mucocutâneo, 
petêquias.
→ →
}
Gênese 
Granulócitos
 2 linhagens são formadas a partir de células-tronco 
hematopoéticas pluripotentes:
 
📌
Linhagem mielocítica (granulócitos e monócitos)
 
📌
Linhagem linfocítica (linfócitos)
NEUTRÓFILOS ou 
POLIMORFONUCLEARES (PMN) 
ou PIÓCITOS (urina)
Imaturo: Bastonete
Maduro: Segmentados
Velhos: Hipersegmentados
São fagócitos e atuarão 
principalmente na infecção por 
patógenos extracelulares
BASÓFILOS
Núcleo segmentado e grânulos 
basofílicos (histamina e heparina)
EOSINÓFILO
Núcleo segmentado e grânulos 
eosinofilicos, contendo enzimas.
Granulócitos - ½ vida ≅ 4-5h
Agranulócitos 
Leucograma
MONÓCITOS
Se diferenciam em 
MACRÓFAGOS quando 
migram da corrente sanguínea 
para os tecidos. Cheio de 
lisossomos.
Monócitos - ½ vida ≅ 10-12h 
LINFÓCITOS
Linfócito típico - 
citoplasma pouco 
volumoso.
Só participam da resposta 
imune ADQUIRIDA 
(específica).
Linfócitos - ½ vida ≅ meses - anos
 Avalia-se leucocitos totais e a porcentagens de cada tipo 
de células e suas variações que são encontrados nos 
diferentes individuos.
Normalmente, haverá uma variação pontual:
📌
por exemplo, aumento ou diminuição grande de 
neutrófilos, alterações pontuais, referindo uma infecção 
por parasita, bacteriana ou reações alérgicas.
📌
uma alteração de todos eles de uma vez é mais raro.
...é a seção do hemograma que inclui a contagem de 
leucócitos e a fórmula diferencial com quantificação e 
avaliação morfológica dos diversos tipos.
Citometria de Fluxo
 ...é a medição de características 
físicas e/ou químicas de células ou 
partículas realizada enquanto essas 
células ou partículas passam em fila 
única, pelo aparato de medição em 
uma corrente de fluido. Baseia-se 
na dispersão da luz em direções diferentes.
 A técnica PODE utilizar anticorpos 
conjugados com corantes 
fluorescentes (fluorocromos), tais 
como isotiocianato de fluoresceína 
(FITC), ficoeritrina (PE) e ficoeritrina 
cianina (PC).
 É baseada no princípio de IMUNOFLUORESCÊNCIA.
Composta por diferentes células
consegue quantificar, pois cada 
vez que passa a luz 
Um anticorpo ligado a um 
corante fluorescente pode ser 
associado à técnica.
 À medida que esses elementos 
fluem através da célula de fluxo, 
medições simultâneas de 
fluorescência (DNA e RNA) e 
dispersão da luz são realizadas. 
Coloca-se a amostra, ela passa por um estreitamento, joga-se o 
lazer que ira interagir diretamente com a célula criando uma 
sombra da célula em uma célula receptora, onde determinaremos 
o tamanho da célula - dispersão frontal 
essa luz que está encontrando na célula irá dispersar, será 
captada por outros receptores, iremos determinar a complexidade 
interna dos componentes dessa células - dispersão lateral
Dispersão frontal: tamanho da célula
Dispersão lateral: estrutura celular e pelo conteúdo intracelular, 
ou seja, pela complexidade celular.
Dispersão frontal e lateral - visão
Interação com DNA e RNA, 
podendo determinar o tamanho, complexidade, conteúdo 
das células e afins.
Dispersão frontal é influenciada pelo tamanho da célula
Dispersão lateral é influenciada pela estrutura celular e 
pelo conteúdo intracelular, ou seja, pela complexidade 
celular.
Resultado
Leucócitos - contadores eletrônicos fornecem a 
fórmula absoluta junto com a fórmula percentual.
1
Alterações no Leucograma
Leucócitos
 Leucocitose: aumento do número de leucócitos;
 Leucopenia: diminuição do número absoluto dos neutrófilo.
 Métodos: citometria de fluxo fluorescente
 É raro o aumento ou diminuição de todos os leucócitos, 
geralmente um ou outros apresenta alteração. 
 Leucocitose e leucopenia ocorrem, via de regra, a expensas de 
uns ou de outros tipos de leucócitos, quase nunca de todos a só 
um tempo. São raros os aumentos ou as diminuições globais 
harmônicas.
Neutrófilos
 Neutrofilia: aumento do número de neutrófilos.
 
📌
Relacionado com infecção bacteriana, leucemia mieloide e 
inflamação aguda ou crônica;
 Neutropenia: diminuição do número de neutrofilos.
 
📌
Relacionado com infecções virais, imunodeficiências, 
lúpus, eritematoso sistêmico.
 Considerando o tempo de maturação das células, não só 
neutrófilos maturos (núcleo segmentado), podemos encontrar 
neutrófilos que não estão completamente maduros - teve uma 
inflamação grave que mobilizou uma quantidade grande de 
neutrófilos, aumenta os neutrófiloscirculante.
 A neutrofilia derivada da mobilização da reserva caracteriza-
se por aumento desproporcional dos neutrófilos bastonados em 
relação aos segmentados, já que os bastonados predominam na 
medula; é o desvio à esquerda - infecções e leucemia (diarreia, 
acidose diabética, anorexia, infarto do miocárdio, fármacos). 
Desvio à esquerda escalonado ou não
Escalonado - liberação de neutrófilos jovens em ordem 
hierarquizada.
Não escalonado - perda da hierarquia (disfunção da 
medula).
📌
Predominância de neutrófilos que ainda não estão 
maduros, ou seja, bastonetes (células mais jovens); 
📌
Pode estar presente em: infecção, leucemia, diarreia, 
acidose diabética, anorexia, IAM e alguns fármacos; 
📌
Escalonado: tem liberação dos neutrófilos muito 
jovens, podendo chegar até a liberação de blastos, sendo 
que essa liberação é de maneira hierarquizada; 
📌
Não escalonado: não há hierarquia, significa que tem 
uma disfunção na medula, onde a liberação dessas células se 
dará de maneira desorganizada; 
Eosinófilos
Eosinofilia - ↑ do número - Infecções parasitárias, 
alergias de pele e respiratória (asma).
Eosinopenia - ↓ do número - uso de corticóides, 
doenças infecciosas agudas.
Basófilos
Basofilia - ↑ do número - reações de 
hipersensibilidade, leucemia mielóide crônica.
Basofilopenia - ↓ do número - doenças infecciosas 
agudas.
 Desvio a direta 
 
📌
Associado com anemia megaloblástica: célula maior e 
deficiência de B12 ou ácido fólico;
 
📌
Ao microscópio é predominante neutrófilo segmentados 
(mais velhos)
 Desvio à esquerda 
Linfócitos
Linfocitose - ↑ do número - infecções virais (linfócitos atípicos - 
mononucleose, herpes), leucemia linfóide, esplenectomia.
 O baço capta células circulantes.
Linfocitopenia - ↓ do número - Lupus Eritematoso Sistêmico, 
Infecção HIV.
Monócitos 
Monocitose - ↑ do número - (associada com neutrofilia em 
processos inflamatórios) leucemia monocítica. Pode estar 
associada com neutrofilia em processos inflamatórios.
Monocitopenia - ↓ do número - anemia aplástica (não produz 
células).
RESUMO 
Provas inflamatórias sensíveis e não 
específicas
VELOCIDADE DE HEMOSSEDIMENTAÇÃO 
(VHS) - mede a taxa de sedimentação dos 
eritrócitos de uma amostra de sangue no período de 
uma hora. Está elevada em praticamente todos os 
pacientes.
Resultados normais (Método Westergren) Homem: 
até 15 mm/h
Mulher: até 20 mm/h
Criança: até 10 mm/h
Recém-nascido: 0-2 mm/h
PROTEÍNA C REATIVA (PCR) - proteína de fase 
aguda. Técnica - turbidimetria ou nefelometria.
A PCR apresenta diversas vantagens em relação ao 
VHS como marcador inflamatório. Além de não 
sofrer influência de tamanho, forma e número de 
hemácias, possui uma depuração mais rápida, 
permitindo a detecção mais precoce da queda de seus 
níveis. No entanto, seus valores apresentam uma 
especificidade muito baixa e nunca devem ser 
utilizados como única ferramenta diagnóstica. É 
utilizada como guia de resposta à terapêutica 
antibiótica.
Referências