Coloração e precipitação de proteínas

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Coloração e precipitação de proteínas 
Reação da Ninhidrina 
 A reação leva esse nome devido o composto 
Ninhidrina, que é utilizado pra determinar 
agrupamentos amino em moléculas. 
•essa reação química precisa de temperatura para 
acontecer, a ninhidrina na presença de agrupamentos 
amino, vai sofrer uma reação de condensação, pra 
formar um composto de cor púrpura. Portanto se 
uma substância der positiva pra ninhidrina, significa 
que ela possui grupos aminos. 
Reação do Biureto 
• não é uma reação química propriamente dita. O 
reativo de biureto é sulfato de cobre dissolvido numa 
solução aquosa com alto ph (alcalina). 
• nessas condições de alcalinidade o nitrogênio da 
ligação peptídica entre os aminoácidos que formam a 
proteína, assumem a sua forma desprotonada, assim 
ficando com um par de elétrons livres, que pode se 
complexar com os ions de cobre que serão liberados 
da solução, pelo biureto. 
• a reção do biureto só será positiva caso esteja 
presente na solução peptídeos com três ou mais 
aminoácidos, ou seja, que tenham dois ou mais 
peptídeos cada um. 
Diferenças das duas reações 
NINHIDRINA 
• trata-se de uma reação química, ou seja, existe 
mudança dos reagentes pra formar diferentes 
produtos. 
•precisa de energia térmica (calor) para acontecer. 
• não é uma substância especifica para detectar 
proteínas, uma vez que ela detecta qualquer 
substância que possuem o agrupamento AMINO, 
incluindo aminoácidos, peptídeos e proteínas. 
BIURETO 
• não é uma reação química e sim uma complexação 
• pode ocorrer em temperatura ambiente 
• não existe modificação de reagentes e nem 
formação de novos produtos 
• é uma reação especifica para proteínas, ou pelo 
menos para peptídeos com mais de três aminoácidos. 
Desnaturação de precipitação de proteínas 
• desnaturação: perda da estrutura terciária com 
consequente perda da atividade biológica. 
• precipitação: perda da solubilidade de uma 
molécula no meio. 
➔ calor, adição de ácidos, adição de metais pesados 
e adição de solventes orgânicos todos eles 
desnaturam as proteínas e consequentemente 
causam a precipitação dessas moléculas. Por isso que 
sua cor muda de translúcida para 
esbranquiçada/opacas. 
Temperatura (calor): o calor faz com que as moléculas 
de proteínas, e suas interações moleculares (pontes 
de hidrogênio, interações dipolo-dipolo etc) fiquem 
fracas e se destabilizem pelo aumento da vibração das 
moléculas no sistema fazendo com que a proteína 
perca sua estrutura e se desnature/precipite. 
Adição de ácidos: uma vez adicionado algum ácido na 
reação na solução, ou seja, quando a concentração de 
prótons aumenta, a tendência é que os grupos 
ionizáveis sejam protonados. Ou seja, as cadeias 
laterais dos aminoácidos ácidos que estavam com 
carga negativa, perderão sua carga, assim 
desestabilizando as interações dipolo-dipolo. O que 
resulta na desestabilizando as estrutura. 
Adição de metais pesados: especialmente quando a 
solução de metais pesados esta em alta concentração, 
como é o caso do acetato de chumbo a 5%, acarretará 
na desnaturação das proteínas pela formação de 
proteinatos de metais pesados. A formação desses 
proteinatos, além de afetar as ligações dipolo-dipolo, 
também faz com que a proteína desnature e precipite 
devido a densidade dos ions. 
Solvente orgânico: quando se adiciona um solvente 
orgânico ao meio que a proteína se encontra a 
polaridade do meio diminui, isso faz com que os 
aminoácidos da superfície que interagiam muito bem 
com a água, não consigam fazer o mesmo com o 
solvente orgânico. Em contrapartida os aminoácidos 
hidrofóbicos, agora tem a chance de interagir com o 
solvente, pois a polaridade mudou. Isso faz com que a 
proteína vire do avesso, desnaturando-a. 
• dificilmente a proteína desnaturada pode ser 
restaurada ao que era antes. 
➔ existe também a chamada precipitação 
fracionada de proteínas sem que haja desnaturação. 
Com essa técnica pode-se preservar a função biológica 
da proteína, portanto podendo ressolubiliza-las para 
ser utilizadas posteriormente. 
salting-in: solubiliza proteínas com a adição de sais, 
Cloreto de sódio . 
Salting-ou: precipita proteínas com a adição de sais 
(sem desnaturação), Sulfato de amônia.