Relatorio microscopia

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Para a aula prática “uso de pré-tratamento para estudos específicos no material biológico” foi utilizado o meristema da raiz de cebola (Allium cepa) (Figura 1) que foram coletadas e fixadas por meio do fixador Carnoy que é uma solução composta de três partes de etanol para uma de ácido acético e armazenadas em freezer a -20°C. A fixação do material foi feita no dia 8/3/2017 e a sua análise foi feita no dia 22/3/2017, o material estava morfologicamente preservado e os procedimentos da prática foram aplicados. Após a retirada do fixador por lavagem, o material foi seco e submetido a hidrólise ácida com HCl 1N a fim de desestruturar a parede celular para deixar o cariótipo mais fácil de ser analisado. 	Figura 1: Esquema do meristema da raiz da cebola.
	O procedimento foi iniciado com o corte do meristema e a sua colocação na lâmina junto a uma gota de ácido acético 45%. O ácido acético ajudar a dar contraste ao material estudado pois clareia o citoplasma permitindo a melhor passagem da luz pelo material. Logo em seguida o corante Orceína acética 2% (Figura 2) foi adicionado e a lâmina foi passada 3 vezes em chama, a fim de aumentar a afinidade ácido base do corante aos cromossomos da cebola. Após estes procedimentos a lamínula foi colocado e pressionada na lâmina a fim de promover o espalhamento das células para dar melhor profundidade de campo.	Figura 2: Estrutura da Orcéína acética.
O objetivo desta análise foi observar as fases da mitose nas células de cebola mostrando diferentes conformações do núcleo e cromossomos como pode ser visto na Figura 3. Após análise na objetiva com aumento total de 400x e 1000x foram observadas (Figura 4) e identificadas (Figura 5) as seguintes fases: Interfase, Prófase, Metáfase, Anáfase e Telófase.
Figura 4: Núcleos e cromossomos em suas diferentes fases da mitose. Imagem captada pelo microscópio de luz na objetiva com aumento de 40X
Figura 3: Estruturas das fases da mitose.
Figura 5: Fases da Mitose. A: Interfase; B: Prófase; C: Anáfase e D: Telófase. Imagem captada pelo microscópio de luz na objetiva com aumento de 100X
Alguns alunos não conseguiram observar todas as fases e foi necessário fazer outra lamina. Isso pode ter ocorrido por algum erro no preparo da lâmina, como a movimentação da lamínula na hora de pressionar a mesma contra a lâmina ou o corte errado do meristema da raiz.
	A fim de observar os cromossomos das células de cebola individualizados, uma segunda lâmina foi preparada com o meristema da raiz da cebola tratada com o alcaloide colchicina. (Figura 6), Segundo Cuco (2003) a Colchicina inibe a formação das fibras do fuso mitótico promovendo o rompimento da célula e a dispersão dos cromossomos (figura 7 e 8), além de parada do processo mitótico na metáfase. Este procedimento é utilizado para melhor caracterização dos cromossomos das células estudadas, além de ajudar na identificação e contagem de cromossomos defeituosos como no caso de pessoas com Síndrome de Down, onde os afetados possuem um cromossomo a mais em suas células. Figura 6: Estrutura da Colchicina
 
	
	Figura 7: Célula com cromossomos de plantas do gênero Passiflora individualizados pela ação da Colchicina. Imagem de S. M. Cuco (2003)
	Figura 8: Célula do meristema de cebola com cromossomos individualizados pela ação da Colchicina.