Atividade - Reação em Cadeia da Polimerase - PCR

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REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE 
Questionário sobre PCR 
1. O que são os “primers” em uma reação de PCR? 
Os primers são sequências únicas de nucleotídeos, ou seja, iniciadores de ácidos nucleicos capazes 
de se "anelar" às suas sequências alvo de DNA durante a PCR. 
2. Quais as etapas/fases básicas de um ciclo de reação de PCR? 
Extração 
O primeiro passo é pegar o material genético a ser utilizado, que no caso é o DNA. Ele não pode ser 
alterado e nem contaminado por algum outro reagente que cause um resultado diferente do que se 
espera da combinação final. Essa extração vai ser aquecida a ponto de ser desnaturada juntamente 
com a região que precisa ser amplificada. 
Desnaturação 
A desnaturação é dividida em duas partes. Para que essa etapa da técnica de PCR funcione, o 
manipulador deve adicionar uma base nitrogenada composta por um três fosfato, os 
oligonucleotídeos (conhecidos como primers, que são as fitas do DNA A,T, C e G) e a polimerase que 
será usada para promover a reação. A mistura deve ser feita para que o DNA consiga se adequar à 
consistência e absorva adequadamente as informações genéticas dos outros três materiais. 
Em seguida, o manipulador deve pôr a mistura em um aparelho chamado termociclador. Esse 
aparelho vai promover variações de temperatura específicas na solução tampão em que se encontra 
o DNA e a mistura. Essa instabilidade na temperatura ajuda a transformar as fitas de DNA em uma 
única estrutura, em caráter desnaturado. O aquecimento vem primeiro, com temperatura máxima 
de 95° para que as fitas se separem. Depois vem o resfriamento, com o termociclador apresentando 
uma temperatura de 50°. E aí entra a fase de anelamento. 
Anelamento 
Das etapas da PCR, o anelamento é a que vai ocorrer a união das fitas de DNA (primers) em cada lado 
complementar. A partir daí, o trabalho de amplificação começa, uma vez que o molde da nova 
molécula cresce por conta da combinação dessas complementações. O anelamento ocorre durante 
https://www.prolab.com.br/produtos/equipamentos-para-laboratorio/termociclador
https://www.prolab.com.br/blog/o-que-e-uma-solucao-tampao/
o resfriamento no termociclador e, após esse período, o aparelho volta a se aquecer para que a 
polimerase atue na composição. 
Polimerização ou Extensão. 
É a extensão definitiva do DNA. Na técnica de PCR, essa fase já apresenta a polimerase adicionando 
as bases nitrogenadas. Para que essa extensão ganhe força e consiga reproduzir uma nova molécula, 
a mistura precisa estar aquecida a uma temperatura de no máximo 72°. 
Para se chegar a uma amplificação com nível considerável, são necessárias várias repetições desse 
processo, com até 30 ciclos refeitos para que a nova molécula se estruture corretamente. 
3. Qual a função das DNTPs na reação? 
Tem por função fornecer energia e nucleotídeos necessários para a síntese de DNA. 
4. Cite três aplicações gerais da técnica de PCR. 
A PCR tem aplicação: Sexagem fetal (na obstetrícia, é a análise para a determinação do sexo do bebê); 
Exame de cariótipo (a análise de cariótipos pode ser feita por Citogenética Molecular, cujos 
protocolos de execução envolvem análises de DNA por PCR); Análise de doenças ligadas aos genes 
(ajuda a focar no segmento real de DNA que é de interesse para a avaliação da presença de mutação 
relacionada a doença em estudo). 
5. Cite três aplicações da PCR dentro da medicina veterinária. 
No melhoramento em reprodução de bovinos e outros; Diagnóstico de doenças infecciosas virais 
em espécies animais; Testes na identificação de genes para câncer em cães. 
6. A DNApolimerase utilizada na reação de PCR é chamada de Taq-DNA polimerase. Por que ela 
se chama dessa forma? Qual a sua peculiaridade? 
É chamada de Taq-DNA polimerase, em homenagem à bactéria resistente ao calor da qual ela foi 
isolada. 
Tem sua peculiaridade em ser uma enzima termoestável na qual suporta elevadas temperaturas.