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· MÉTODO DE AGLUTINAÇÃO EM LÁTEX: - O que é? > partícula inerte; > durabilidade maior; > látex sensibilizado com IgG humano; > pesquisa presença de microorganismos no paciente através da reação imunitária de anticorpo/antígeno; > aglutinação: presença de anticorpo específico para o antígeno absorvido; > muito popular em laboratório clínico e pode ser executada manualmente com a aglutinação detectada pela observação visual da formação de grumos; > aplicada em uma grande variedade de diagnóstico de infecções microbianas, marcadores imunológicos, dosagem de hormônios e drogas. ** fundo branco: hemácia; ** fundo preto: soro - PCR (proteína C reativa): > proteína de fase aguda produzida pelo fígado; > presente em pequenas quantidades em pessoas hígidas (saudáveis); > aumento exponencial na presença de infecções/inflamações (ex.: crise de apendicite); > exame inespecífico; > função anti-inflamatória e ajuda o sistema imunológico a combater “invasores”; > látex revestido com anti-PCR (anticorpo específico) que liga a PCR no soro do paciente; > valor de referência: # em pessoas sadias é inferior a 3 mg/L; # entre 3 e 10 mg/L: inflamação leve (ex.: gengivite/resfriado), pessoas hipertensas, diabéticas, obesas, portadoras de insuficiência renal, etc.; # acima de 10 mg/L: processos inflamatórios mais intensos; # entre 10 e 40 mg/L: infecções virais fortes (gripes, catapora/tumores/doenças reumáticas); # acima de 40 mg/L: infecção bacteriana. ** sepse: valores ultrapassam 200 mg/L - ASO (anti-estreptolisina O): > anticorpo produzido para combater infecções causadas por Streptococcus pyogenes; > forte indicador dessas infecções; > valor máximo entre a 3ª e a 5ª semana, retornando ao normal no 2º ao 4º mês; > usado para detectar febre reumática, glomerulonefrite; > valores de referência: #200 UI/ml ** mais comum em látex - Fator Reumatoide (látex): > auto anticorpo produzido (IgA/IgM) nas doenças autoimunes que reage com o IgG; > utilizado na pesquisa de doenças como lúpus, artrite reumatoide, entre outras; > resultados alterados indicam a presença de doença autoimune, requerendo mais investigação para determinação de qual; > valores de referência: # 10 a 40 UI/mL ** limite mínimo de quantificação: 10 UI/mL. *** UI/ml = unidades internacionais por mililitros - Fator reumatoide (Waaler-Rose): > técnica de hemoaglutinação em placa para determinar o FR; > antígeno: suspensão de hemácias de ovelha sensibilizadas com IgG de soro de coelho; > usado para diagnóstico in Vitro; > mais sensível do que o látex; > valor de referência: # até 8 UI/mL - MÉTODO DILUIÇÃO SERIADA: > usado para: PCR/FR/ASO/WAALER-ROSE/VDLR; * PRIMEIRO PASSO (diluição - puro): > SORO DO PACIENTE + REAGENTE ESPECÍFICO DE CADA EXAME (geralmente se utiliza 25μl de cada, EXCETO WAALER ROSE, QUE UTILIZA 20μl); > agita por 2 min em movimentos circulares; > amostra positivou, faz diluição seriada; ** amostra positiva fraca forma uma espécie de anel nas bordas; ** NÃO SE DILUI REAGENTE, APENAS AMOSTRA! * PASSO DOIS (DILUIÇÃO SERIADA): > 25μl DE SORO DO PACIENTE + 25μl DE SORO FISIOLÓGICO (em todos os poços) + 25μl DE REAGENTE (menos no poço reserva) ** soro do paciente colocado apenas no primeiro poço!!! > homogeneíza o primeiro poço; > 25μl no próximo poço; > agita em movimentos circulares por 2 min; > multiplica sempre por 2! ** multiplica até onde aglutinou pela sensibilidade. ex.: ASO = 200 UI/ml x 2 = 400 UI/ml > 1:2, 1:4, 1:8, 1:16; 1:32 etc.; ** sempre ter um poço reserva para colocar o restante da diluição > meio + concentrado para o – concentrado;
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