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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO – UFRJ Prática 6 – Microscopia de leveduras Rio de Janeiro 2020 1 INTRODUÇÃO As leveduras são organismos eucarióticos e uma das classes mais importantes dos fungos. A levedura atua na realização da fermentação do açúcar objetivando conseguir energia química para a manutenção da sua existência, sendo que o etanol é um subproduto do processo. Dois ciclos diferentes são responsáveis pelo processo de transformação de açucares que são solúveis em moléculas menores por ação de levedura. O primeiro processo é a glicólise e apresenta como função a de “quebrar” a molécula de glicose até ácido pirúvico, por reações que são catalisadas por enzimas específicas. No entanto, se há ausência de oxigênio ocorre a atuação das enzimas piruvato- descarboxilase e álcool-desidrogenase, produzindo etanol e água a partir de ácido pirúvico. Contudo, se há presença de oxigênio ocorrerá um deslocamento reacional do ácido pirúvico para o Ciclo de Krebs, e assim esse será oxidado por meio de enzimas a dióxido de carbono e água. 2 OBJETIVO O objetivo da prática experimental foi isolar a fresco e analisar em microscópio culturas de leveduras. 3 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL O isolamento da levedura foi feito a fresco, para isso foi necessária a adição de um gota de solução azul de metileno sobre lâmina de vidro e, em seguida, a alça foi flambada e coletado a levedura. Posteriormente foi feito um ligeiro esfregaço da levedura com a alça na gota que se encontrava na lâmina. E em seguida foi colocada uma lamínula sobre a lâmina que havia sido ligeiramente esfregada. É necessária a realização de todo trabalho na zona de segurança do bico de Bunsen para evitar o desenvolvimento de microrganismos indesejáveis. Seguidamente após o preparo da lâmina com levedura, a mesma foi levada para o microscópio para ser analisada. Foi observado que com a lenta objetiva de 40x já era possível observar a formação de pseudohifas pela levedura. Além disso, foi viável a observação do núcleo da célula, para isso foi recomendável à utilização de lente de imersão com a adição de óleo vegetal. E também foi notado o processo de divisão celular, pois o núcleo das leveduras estava em divisão. Sendo assim, um ponto de notória relevância para o cultivo de leveduras é a coloração do corante. Pelo fato de mostrar se as bactérias estão viáveis ou não viáveis, pois bactérias quanto mais coradas de azul estão as leveduras mais próximas da morte elas estão ou até já estão mortas, fazendo assim com que os resultados das observações em microscópio não sejam satisfatórios. 4 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS VERMELHO, A. B.; PEREIRA, A. F.; COELHO, R. R. R.; SOUTO-PADRÓN, T. C. B. Práticas de Microbiologia. Editora Guanabara Koogan. Disponível em: <https://farmatecaunicatolica.files.wordpress.com/2017/12/prc3a1ticas- de-microbiologia-vermelho.pdf>. Acesso dia 10/10/2020. STECKELBERG, C. Caracterização de Leveduras de processos de fermentação alcoólica utilizando atributos de composição celular e características cinéticas. Tese de doutorado em Engenharia Química – Unicamp. https://farmatecaunicatolica.files.wordpress.com/2017/12/prc3a1ticas-de-microbiologia-vermelho.pdf https://farmatecaunicatolica.files.wordpress.com/2017/12/prc3a1ticas-de-microbiologia-vermelho.pdf
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