Métodos Alternativos de Diagnóstico (Microbiologia Veterinária Básica)

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↪ Possibilidades de diagnóstico microbiológico
- PCR: se suspeitamos de um microrganismo
específico fazemos a específica. Geralmente
é o mais feito, o sequenciamento é mais
para pesquisa. Varia muito do organismo,
dependendo chegamos até o genêro.
- Maldi - Tog: análise de proteínas
ribossômicas. Varia muito do organismo,
dependendo chegamos até o genêro.
- Testes bioquímicos/fisiológicos: chega até a
espécie.
- Precisa de suspeita.
↪ Método clássico
● Desvantagens
- Microrganismo vivo
- Período de excreção varia
- Sensibilidade coleta – transporte
- Tempo de diagnóstico e isolamentos
especiais. (Mycobacterium sp.,
Brucella sp,. Chlamydia sp., Ricketsia
sp.)
- Vários testes bioquímicos
- Grande número de dados
● Vantagens
- Específico
- Gênero e espécie
- Barato
- Técnicas fáceis
- Alguns sistemas informatizados
→ Sequenciamento de DNA ou RNA
● Vantagens
- Específico
- Rápido (horas)
- Gênero e/ou espécie
- Pode identificar uma infinidade de
espécies ou gêneros
- Detecção de microrganismos de
cultivo complicado
- Informatizado
- Banco de dados passível de ser
atualizado e enriquecido
● Desvantagens
- Patógenos raros podem não ser
identificados
- Alguns microrganismos são mais
difíceis de identificar
- Técnicas mais suscetíveis a
problemas de execução
- Custo médio (mais caro que
MALDI-TOF)
→ PCR específico
Exemplos de kits de identificação de
microrganismos
● Vantagens
- Específico
- Sensível
- Rápido
- Microrganismo morto
- Pode ser mecanizado
- Falso positivo raro
● Desvantagens
- Período de excreção varia
- Custo médio a alto
- Conhecimento do genoma
- Oligonucleotídeo iniciador específico
-gênero ou espécie
- Não existem testes para todos os
tipos de microrganismos
- Dificilmente diferencia espécies (Mas
já existem testes específicos de
espécie. Ex. PCR para as espécies de
Brucella.)
- Falsos positivos - laboratórios que
não trabalham com qualidade
- Extração de amostra - inibição - falso
negativo
→ MALDI-TOF (Matrix Associated Laser
Desorption-Ionization-Time of Flight)
● Vantagens
- Rápido (alguns minutos)
- Específico
- Gênero e/ou espécie
- Barato (o teste)
- Técnicas fáceis
- Informatizado
- Banco de dados passível de ser
atualizado e enriquecido
- Estudos para trabalhar direto com a
amostra
● Desvantagens
- O aparelho é muito caro
- Patógenos raros podem não ser
identificados
- Dependente das condições de cultivo
ideais
- Bactérias > fungos > vírus (testes
experimentais)
↪ Métodos Alternativos
● Detecção de microrganismos inteiros ou
seus antígenos (determinantes antigênicos).
Duas formas de visualizar:
- In situ, após corte histológico
- Após extração de antígeno (LPS, fímbria,..)
→ In Situ
- para determinar antigênicos é mais caro
pois precisa fazer testes em animais e
coletar anticorpos.
● Métodos para detecção específicos de
gêneros ou espécies
- Marcação do anticorpo
→ Detecção após extração de antígeno
- Antígenos
– ELISA (ensaio imunoenzimático)
– RIA (radioimuno ensaio)
● Aglutinação com látex
● Vantagens
- Rápidos
- Microrganismo pode estar morto
- Pode ser mecanizado
● Desvantagens
- Pode ocorrer falso positivo (antígenos
similares ou iguais)
- Vários detectam somente o gênero
- Necessidade de soros para cada
gênero
- Colorações convencionais não
definem gênero (HE, Gram, Prata, etc.)
- Não existem testes para detecção de
todos os microrganismos possíveis de
estarem em uma amostra
- Caros
Exemplos de teste diagnóstico comerciais
detectando antígenos microbianos