Sequenciamentos de DNA

Prévia do material em texto

Sequenciamento de 
DNA
Por Lauriene S. Marques
Fonte [1] 01/22
O que o sequenciamento faz?
Determina a ordem na qual os nucleotídeos estão 
organizados em uma dada molécula de DNA.
02/22
Tipos de sequenciamento
● Sequenciamento Sanger
● Sequenciamento de Nova Geração (NGS)
03/22
Sequenciamento Sanger
Fonte [2] 04/22
Sequenciamento 
Sanger
● Sequenciamento 
didesóxi manual
● Gel de poliacrilamida
Fonte [2] 05/22
Sequenciamento 
Sanger
● Sequenciamento didesóxi 
com fluoróforos
● Gel de poliacrilamida
Fonte [3] 06/22
Sequenciamento Sanger
● Sequenciamento 
didesóxi com 
fluoróforos 
automatizado em 
gel capilar
Fonte [2] 07/22
Sequenciamento NGS
● Biblioteca
● Amplificação
● Sequenciamento
● Análise de dados
08/22
Sequenciamento NGS
● Biblioteca
○ Gerar fragmentos de tamanhos adequados
■ Digestão enzimática
■ Quebra mecânica
■ PCR - multiplex (PCR de vários fragmentos)
○ Adicionar adaptadores às extremidades de cada fragmento
■ Fragmentos de DNA dupla fita de sequência conhecida
○ Adicionar marcadores de amostra
■ Permite a identificação da amostra
09/22
Sequenciamento NGS
● Amplificação e Sequenciamento
○ Illumina
■ Sinal fluorescente
○ Thermo Fisher
■ Variação de pH
10/22
Sequenciamento NGS
● Illumina
Fonte [4] 11/22
Sequenciamento 
NGS
● Illumina
Fonte [5] 12/22
Sequenciamento NGS
● Illumina
Fonte [2] 13/22
Sequenciamento NGS
● Illumina
Fonte [2] 14/22
Sequenciamento NGS
● Thermo Fisher/ Íon Torrent
Fonte [6] 15/22
Sequenciamento NGS
● Thermo Fisher/ Íon Torrent
Fonte [6] 16/22
Sequenciamento NGS
● Thermo Fisher/ Íon Torrent
Fonte [6] 17/22
Sequenciamento 
NGS
● Thermo Fisher/ Íon Torrent
Fonte [2] 18/22
Custos de sequenciamento de genoma humano
Fonte: National 
Human Genome 
Research Initiative
Fonte [2] 19/22
Pra quê sequenciar?
Sanger
● Genotipagem
● HLA
● Sequenciamento microbiano
● Detecção de mutação
● Validação de resultados de NGS
● Identificação de linhagem celular
● Sequenciamento
● CRISPR
NGS
● Genotipagem
● Identificação humana
● Metagenoma
● Detecção de mutação
● Análise de expressão gênica
● Detecção de aneuploidias
● Sequenciamento
● Sequenciamento de exoma
20/22
Referências
Biologia molecular básica [recurso eletrônico]/Organizadores, Arnaldo Zaha, Henrique 
Bunselmeyer Ferreira, Luciane M. P. Passaglia. - 5. ed. - Dados eletrônicos. - Porto Alegre: 
Artmed, 2014.
Biologia molecular da célula [recurso eletrônico] / Bruce Alberts... [et al.] ; tradução: 
[Ardala Elisa Breda Andrade ...et al.] ; revisão técnica: Ardala Elisa Breda Andrade, 
Cristiano Valim Bizarro, Gaby Renard. - 6. ed. - Porto Alegre: Artmed, 2017.
https://www.youtube.com/watch?v=uKCCIAhLFrU
https://www.youtube.com/watch?v=kzmMurV0umw
21/22
https://www.youtube.com/watch?v=uKCCIAhLFrU
https://www.youtube.com/watch?v=kzmMurV0umw
Referências
Fonte [1]: 
https://encrypted-tbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcTADCu_z70zNMZdoMohGW7jKYvKwxPJzT9PJI21Ww
qUpYe4mIcC4z0Tj2pC4oFPeOXTILY&usqp=CAU
Fonte [2]:Biologia molecular da célula [recurso eletrônico] / Bruce Alberts... [et al.] ; tradução: [Ardala Elisa Breda 
Andrade ...et al.] ; revisão técnica: Ardala Elisa Breda Andrade, Cristiano Valim Bizarro, Gaby Renard. - 6. ed. - 
Porto Alegre: Artmed, 2017.
Fonte [3]: http://estacio.webaula.com.br/cursos/go0072/galeria/aula7/img/img07.jpg
Fonte [4]: 
https://www.researchgate.net/profile/Ana-Lucia-Segatto/publication/325650708/figure/fig2/AS:642567196651530@
1530211366392/Figura-27-Base-metodologica-do-sequenciamento-Illumina-utilizando-amplificacao-em-ponte.png
Fonte [5]: https://api.intechopen.com/media/chapter/49419/media/image2.png
Fonte [6]:https://www.youtube.com/watch?v=uKCCIAhLFrU
22/22
https://encrypted-tbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcTADCu_z70zNMZdoMohGW7jKYvKwxPJzT9PJI21WwqUpYe4mIcC4z0Tj2pC4oFPeOXTILY&usqp=CAU
https://encrypted-tbn0.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcTADCu_z70zNMZdoMohGW7jKYvKwxPJzT9PJI21WwqUpYe4mIcC4z0Tj2pC4oFPeOXTILY&usqp=CAU
http://estacio.webaula.com.br/cursos/go0072/galeria/aula7/img/img07.jpg
https://www.researchgate.net/profile/Ana-Lucia-Segatto/publication/325650708/figure/fig2/AS:642567196651530@1530211366392/Figura-27-Base-metodologica-do-sequenciamento-Illumina-utilizando-amplificacao-em-ponte.png
https://www.researchgate.net/profile/Ana-Lucia-Segatto/publication/325650708/figure/fig2/AS:642567196651530@1530211366392/Figura-27-Base-metodologica-do-sequenciamento-Illumina-utilizando-amplificacao-em-ponte.png
https://api.intechopen.com/media/chapter/49419/media/image2.png
https://www.youtube.com/watch?v=uKCCIAhLFrU