POP Parasitologia

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ELABORAÇÃO DE PROCEDIMENTOS OPERACIONAIS
PADRÃO E INSTRUÇÕES DE TRABALHO
SUMÁRIO
1. Coprotest
2. Método de Baermann & Moraes
3. Método Direto à Fresco
4. Método Faust
5. Método de Graham
6. Método de Hoffmann
7. Método de Kato-Katz
8. Método Meyer
9. Método de Ritchie
10.Método de Willis
11. Pesquisa de Proglotes de Tênia com Ácido Acético
INDISPENSÁVEL O USO DE EPIS (LUVA, JALECO, TOUCA, MÁSCARA E ÓCULOS)
Macroscopia em TODOS OS PROCEDIMENTOS
- Antes de iniciar a técnica, deve-se observar detalhadamente a amostra recebida em todo e
qualquer procedimento;
- A análise macroscópica consiste em evidenciar o odor, coloração e a textura da amostra.
1. COPROTEST
Objetivo
- Identificar os processos de desenvolvimento de epidemias parasitárias, criar métodos de
profilaxia de doenças causadas pelos parasitas e desenvolver tratamentos;
- Quantificação de ovos de helmintos, cistos e oocistos de
- protozoários.
Conceito do Setor
- Exame Parasitológico de Fezes (EPF).
Materiais Necessários
- Kit Coletor Universal COPROTEST;
- Amostra fecal;
- Acetato de Etila 3 mL;
- Lugol;
- Tubo Cônico;
- Centrífuga;
- Lâmina;
- Lamínula;
- Microscópio óptico
Etapas do Procedimento
- A amostra de fezes homogeneizada é recolhida em um tubo de centrífuga;
- Acrescenta-se 3 ml de acetato de etila ou éter;
- Agita-se e a mistura é centrifugada por 3 minutos. Desprezando-se os detritos e o líquido
sobrenadante;
- Acrescenta-se uma gota de Lugol ao sedimento;
- Duas ou três gotas do sedimento são recolhidas numa lâmina, cobertas com lamínula e
examinadas ao microscópio.
2. MÉTODO DE BAERMANN & MORAES
Objetivo
- Isolar larvas de estrongilídeos e acompanhamento do tratamento de pacientes com
estrongiloidíase.
Conceito do Setor
- Exame Parasitológico de Fezes
Materiais Necessários
- Copo cônico de 125-500 centímetros;
- Pipeta de Pasteur de 2 a 3 mm;
- Gazes;
- Lâminas de vidro;
- Lamínulas;
- Funil de vidro;
- Banho-maria;
- Tubo de ensaio;
- Pinça de Hoffman;
- Centrífuga;
- Microscópio óptico;
Etapas do Procedimento
- Pegar cerca de 10 gramas de amostra fecal e dispor sobre gazes dobradas;
- Colocar o material com gaze sobre o funil de vidro contendo um tubo no inferior do copo
cônico;
- Fechar o tubo com uma pinça de Hoffman;
- Adicionar ao copo cônico água aquecida a 45ºC até que seja coberto todo o material fecal e
deixar repousar por 1 hora;
- Abrir o tubo com auxílio da pinça de Hoffman e dispor a amostra dentro de um tubo para
que seja centrifugado, coletando aproximadamente 7 mL de líquido.
- Equilibrar a balança com um tubo com água e centrifugar por cerca de 1 minuto a 2500
rpm;
- Coletar o sedimento formado no inferior do tubo com pipeta Pasteur e pingar uma gota em
uma lâmina de vidro e cobri-la com uma lamínula e levar para microscopia óptica.
3. MÉTODO DIRETO À FRESCO
Objetivo
- Identificar trofozoítas de protozoários em fezes diarreicas ou liquefeitas (com
aproximadamente 30 minutos de emissão até a análise);
- Utilizado para identificar ovos e larvas de helmintos;
- Também é possível identificar cistos de protozoários.
Conceito do Setor
- Exame Parasitológico de Fezes (EPF).
Materiais Necessários
- Lamínulas;
- Lâminas para microscopia;
- Água ou Solução Salina (0,85%);
- Bastão de vidro ou palito;
- Lugol;
- Microscópio
Etapas do Procedimento
- Pegar uma pequena quantidade de amostra fecal em dispor em uma lâmina;
- Colocar sobre as fezes uma gota de líquido (água, salina ou lugol) e misturar a amostra
com uma espátula de madeira ou bastão de vidro
- Para busca de TROFOZOÍTOS (vivos e ativos): diluir a amostra em solução
salina;
- Para busca de OVOS DE HELMINTOS e/ou CISTOS DE PROTOZOÁRIOS:
diluir a amostra em água ou lugol;
- Deixar a suspensão com uma camada fina que permita a passagem de luz a modo de uma
suspensão homogênea não centralizada;
- Examinar a amostra em objetiva 10x e aumentar a 40x.
4. MÉTODO DE FAUST
Objetivo
- Desenvolver de forma prática o Método de Faust;
- Obtenção de resultados para a análise parasitológica;
- Observar e analisar as fezes em busca de parasitas, helmintos e protozoários.
Conceito do Setor
- Exame Parasitológico de Fezes (EPF).
Materiais Necessários
- Proveta 100 mL;
- Becker 250 mL (02 unidades)
- Copo plástico (01 unidade);
- Gazes (04 pedaços);
- Bastão de vidro (01 unidade)
- Pipeta de Pasteur descartável com graduação (01 unidade);
- Estante para tubo de ensaio (01 unidade);
- Lâmina (01 unidade);
- Lamínula (01 unidade);
- Água Destilada (100 mL);
- Sulfato de Zinco;
- Lugol 5%;
- Centrífuga;
- Tubo de Wasserman (02 unidades);
- Microscópio óptico;
- Alça de Platina (01 unidade).
Etapas do Procedimento
Microscopia
- Coletar cerca de 10 gramas de parte diferentes da amostra recebida e transferir para o
becker;
- Adicionar 20 mL de água destilada e com o auxílio do bastão de vidro, homogeneizar
completamente a amostra;
- Colocar as gazes sobrepostas no copo plástico para realizar a filtração da amostra
homogeneizada;
- Transferir o conteúdo do copo para um dos tubos de Wasserman com auxílio da pipeta de
Pasteur;
- Preencher o tubo de Wasserman restante com água destilada, ambos os tubos devem ter a
mesma quantidade de líquido;
- Colocar os tubos na centrífuga de forma que mantenha equilíbrio na centrífuga, centrifugar
a 2500 rpm por 1 minuto.
- Desprezar o sobrenadante do tubo onde está a amostra e ressuspender o sedimento em
água
- Repetir o procedimento de lavagem por quatro ou cinco vezes ou até que a suspensão
esteja límpida;
- Desprezar o sobrenadante límpido e ressuspender o sedimento com uma solução de
sulfato de zinco a 33%, densidade de 1.18g/mL. Homogeneizar bem a solução;
- Desprezar o sobrenadante límpido e ressuspender o sedimento com uma solução de
sulfato de zinco a 33%, densidade de 1.18g/mL. Homogeneizar bem a solução;
- Centrifugar novamente por um minuto a 2.500rpm;
- Retirar o tubo de Wasserman com cuidado da centrífuga, sem agitá-lo e colocá-lo em
posição vertical na estante para tubo de ensaio;
- Com o auxílio da alça de platina, tocar o centro da membrana formada na superfície do
tubo. Transferir o material coletado com a alça de platina para a lâmina. Repetir o processo
até que se tenha uma quantidade significante da amostra para que possa ser realizada a
análise do material;
- Corar a lâmina com uma gota de lugol e adicionar a lamínula. Analisar o material
imediatamente;
- Levar ao microscópio, focalizando na objetiva de menor aumento (4x) e aumentar
gradativamente até atingir 40x.
5. MÉTODO DE GRAHAM
Objetivo
- Técnica da fita adesiva ou swab perianal;
- Utilizado na pesquisa de ovos e larvas de Enterobius Vermiculares e Taenia sp.
Conceito do Setor
- Exame Parasitológico de Fezes (EPF).
Materiais Necessários
- Espátula de madeira;
- Fita adesiva transparente;
- Lâmina de microscopia;
- Lamínula de microscopia;
- Material fecal recém-emitido;
- Microscópio óptico.
Etapas do Procedimentos
- A coleta pode ser feita no laboratório ou feito na casa do paciente (preferência);
- Colocar um pedaço de fita adesiva transparente em uma espátula de madeira tipo
abaixador de língua com a parte adesiva voltada para fora;
- Pressionar firmemente a espátula contendo a fita adesiva contra as pregas anais e
perianais;
- Colar a fita adesiva em lâmina devidamente identificada;
- Examinar o material imediatamente ao microscópio com pequeno aumento, percorrendo
todos os campos.
6. MÉTODO DE HOFFMANN
Objetivo
- Aumentar a concentração de ovos, larvas ou cistos e o isolamento de óleos e gorduras da
maior parte dos detritos;
- Identificar cistos, oocistos, ovos e larvas no sedimento.
Conceito do Setor
- Exame Parasitológico de Fezes (EPF).
Materiais Necessários
- Microscópio;
- Cálice 250 mL;
- Bastão de vidro;
- Gazes;
- Pipeta de Pasteur;
- Lâmina;
- Lugol.
Etapas do Procedimento
- Em um pequeno recipiente colocar um pouco de água e pequena porção de fezes;
- Homogeneizar bem com auxílio de um palito de madeira ou bastão de vidro;
- Transferir as fezes homogeneizadas para um copocônico (Cálice) com uma peneira para a
filtração das fezes e completando o cálice com água;
- Deixar em repouso de 2 a 24 horas;
- Com o auxílio de uma pipeta, retirar pequena porção do sedimento formado no fundo e
transferir para uma lâmina;
- Adicionar uma gota de lugol e analisar em um microscópio.
7. MÉTODO KATO-KATZ
Objetivo
- Identificar ovos de parasitas como: Schistosoma Mansoni, Trichuris Trichiura e Ascaris
Lumbricoides;
- É possível a observação de Ancilostomídeos se a leitura for feita até uma hora após o
processamento do material.
Conceito do Setor
- Exame Parasitológico de Fezes (EPF).
Materiais Necessários
- Amostra fecal;
- Papel toalha absorvente;
- Kit Bio-Manguinhos contendo: espátula, placa perfurada, tela, lamínula de papel celofane,
solução verde malaquita a 3% e bula;
- Lâmina de vidro;
- Microscópio óptico
Etapas do Procedimento
- Comprimir a tela de nylon sobre as fezes (pelos orifício passam os ovos de helmintos e os
detritos menores);
- Com a espátula do kit, raspar uma pequena quantidade das fezes passadas pela malha e
preencher o orifício central da placa perfurada, o qual deve estar colocado sobre a lâmina
de vidro, nivelando a superfície;
- Retirar cuidadosamente a placa perfurada, deixando as fezes sobre a lâmina de vidro;
- Com a lamínula de papel celofane previamente embebida em Verde Malaquita a 3%, cobrir
as fezes, inverter a lâmina pressionando-a sobre o papel absorvente;
- Deixar a preparação em repouso por 1 a 2 horas e realizar a leitura em microscópio óptico
de toda a superfície da lâmina de celofane. O número de ovos contados deve multiplicado
pelo fator 24 (24x) e corresponderá ao número de ovos por grama de fezes.
8. MÉTODO MEYER
Objetivo
- Utiliza-se anticorpos monoclonais para detectar a hemoglobina humana.
- Evidenciar problemas na região retal, como hemorróidas, fissura anal ou mesmo câncer
colorretal;
- Detecção de hemoglobina;
- Redução da fenolftaleína a anidrido ftálico pelo zinco presente no Reativo
Conceito do Setor
- Pesquisa de Sangue Oculto.
Materiais Necessários
- Copo cônico;
- Amostra Fecal;
- Espátula ou palito de madeira;
- Gaze para filtração ou equivalente;
- Bastão de Vidro;
- Tubo de ensaio
- Estante para tubo de Ensaio;
- Água destilada;
https://drauziovarella.uol.com.br/doencas-e-sintomas/hemorroidas/
https://drauziovarella.uol.com.br/proctologia/mitos-e-verdades-sobre-a-fissura-anal/
https://drauziovarella.uol.com.br/cancer/cancer-colorretal/
https://drauziovarella.uol.com.br/cancer/cancer-colorretal/
- Cálice de vidro graduado;
- Reativo Meyer;
- Peróxido de Hidrogênio
- Pipeta de Pasteur.
Etapas do Procedimento
- Em um copo cônico, dispor as gazes a modo de realizar a filtração da amostra fecal. Pegar
uma pequena quantidade da amostra fecal com o palito ou espátula e colocar no cálice de
vidro e adicionar água e diluir a amostra.
- Após a diluição da amostra, transferir o líquido para o copo cônico e retirar 5 mL do
sobrenadante da amostra filtrada com a pipeta Pasteur, adicionar o líquido da pipeta em um
tubo de ensaio.
- Adicionar a amostra do tubo de ensaio, 1 mL de Reativo Meyer e homogeneizar. Após esse
processo, adicionar 4 gotas de peróxido de hidrogênio, homogeneizar novamente e
aguardar alteração de cor no tubo.
- Amostras que evoluírem para a coloração avermelhada, serão positivas para sangue.
9. MÉTODO DE RITCHIE
Objetivo
- Identificar cistos de protozoários, ovos pesados e larvas de helmintos presentes nas fezes.
Conceito do Setor
- Exame Parasitológico de Fezes (EPF).
Materiais Necessários
- Amostra fecal;
- Espátula de madeira;
- Éter 2ml;
- Lugol;
- Formol 10% 10ml;
- Funil de vidro;
- Bequer de vidro;
- Gazes;
- Lâmina;
- Lamínula;
- Pipeta Pasteur;
- Tubo cônico;
- Centrífuga;
- Microscópio óptico.
Etapas do Procedimento
- Dissolver cerca de 5g de fezes em 10ml de água e filtrar em gaze dobrada em quatro;
- Depositar o material em tubo cônico de centrífuga e centrifugar a 1500 rpm por 2 minutos;
- Desprezar o sobrenadante e ressuspender novamente em 10 ml de água.
- Repetir os passos 2 e 3 até que o sobrenadante apresente-se claro;
- Adicionar cerca de 10 ml de formol a 10%, homogeneizar, descansar por 10 a 20 minutos;
- Adicionar cerca de 2 ml de éter, agitar vigorosamente e centrifugar a 1500 rpm por 2
minutos;
- Desprezar o sobrenadante e examinar o depósito ao microscópio adicionando uma gota da
solução de lugol.
10. MÉTODO DE WILLIS
Objetivo
- Usa-se o método de flutuação para pesquisa de ovos leves, cistos e oocistos de
protozoários e ovos de helmintos, principalmente os de ancilostomídeos
Conceito do Setor
- Exame Parasitológico de Fezes (EPF).
Materiais Necessários
- Amostra fecal fresca ou conservada;
- Coador;
- Becker de vidro (02 unidades);
- Gaze (04 unidades);
- Lâmina para microscopia;
- Lamínula para microscopia;
- Solução saturada de Cloreto de Sódio (NaCl);
- Tubo de ensaio ou cuba de vidro (3 cm de diâmetro);
- Bastão de vidro (01 unidade);
- Microscópio óptico.
Etapas do Procedimento
Microscopia
- Pegar uma pequena quantidade da amostra com bastão de vidro, colocar em um Becker e
diluí-la na solução saturada de cloreto de sódio;
- Homogeneizar bem a solução com a amostra;
- Transferir a amostra para outro Becker para que seja realizada a filtração;
- No becker onde a amostra será transferida, colocar as gazes para que sejam utilizadas
como coador e transferir a amostra homogeneizada;
- Transferir a amostra para o tubo de centrifugação ou cuba de vidro e colocar para
centrifugar até a amostra formar um menisco positivo;
- Sobrepor no menisco uma lamínula de microscopia e aguardar 15 minutos;
- Desvirar rapidamente a lamínula de vidro e sobrepor na lâmina de microscopia;
- Levar a amostra para a análise microscópica.
11. PESQUISA DE PROGLOTES DE TÊNIA COM ÁCIDO ACÉTICO
Objetivo
- Identificar os diferentes tipos de Taenia Sp. em um indivíduo através da ação do ácido
acético.
Conceito do Setor
- Exame Parasitológico de Fezes (EPF).
Materiais Necessários
- Ácido acético;
- Amostra;
- Lâminas;
- Luz artificial;
- Amostra fecal;
- Microscópio.
Etapas do Procedimento
- Colocar a(s) proglote(s) a ser(em) identificada(s) em pequeno recipiente contendo ácido
acético glacial;
- Decorrido pelo menos 15 minutos, retirá-la e comprimir entre 2 lâminas;
- Examinar sob iluminação intensa (artificial);
- Os caracteres do útero e suas ramificações permitirão distinguir se a proglote grávida em
exame é de T. solium ou T. saginata;
- É aconselhável utilizar lâminas largas para comprimir as proglotes como medida de cautela
para uma eventual contaminação do examinador, pelos ovos do parasita (principalmente
em se tratando da T. solium);
- O mecanismo de ação do ácido acético está baseado na dissolução de sais, calcários e
carbonato de cálcio que impregnam o corpo do parasita;
- Taenia saginata: proglotes grávidas: útero com ramificações laterais finas,
dicotômicas e numerosas;
- Taenia solium: proglotes grávidas: útero com ramificações espessas,
dendríticas e em pequena quantidade.
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