Coloração de Gram -

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Coloração de Gram – O que é 
bactéria Gram-positiva e Gram-
negativa? 
 
A coloração de Gram é um passo muito importante na caracterização e 
classificação inicial das bactérias. Afinal, esse método de coloração 
permite que as bactérias sejam visualizadas no microscópio óptico, uma 
vez que sem a coloração é impossível observá-las ou identificar sua 
estrutura. 
O método de coloração de Gram recebeu esse nome em homenagem 
ao patologista dinamarquês Hans Christian Joachim Gram que realizou 
a descoberta em 1884 e, aliás, até hoje continua sendo a mais utilizada 
nos laboratórios de análises clínicas e microbiologia. Através da 
coloração é possível identificar e diferenciar os dois principais grupos 
de bactérias, sejam Gram-positivas ou Gram-negativas. 
PRINCÍPIO DA COLORAÇÃO DE 
GRAM 
Em suma, o procedimento de coloração de Gram permite que as 
bactérias retenham a cor com base nas diferenças nas propriedades 
químicas e físicas da parede celular. De fato, o uso dos corantes 
permite aumentar o contraste e evidenciar a estrutura bacteriana. 
A coloração envolve 3 etapas principais: 
 Coloração com violeta de cristal (um corante solúvel em água, roxo); 
 A descoloração (utilizando etanol / acetona); 
 A contra-coloração (utilizando corante Safranina, vermelho). 
DIFERENÇA ENTRE BACTÉRIA 
GRAM-POSITIVA E GRAM-
NEGATIVA 
A princípio, há diferentes graus de permeabilidade na parede dos 
microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos. 
As bactérias Gram-positivas retém o cristal violeta devido à presença 
de uma espessa camada de peptidoglicano (polímero constituído por 
açúcares e aminoácidos que originam uma espécie de malha na região 
exterior à membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares, 
apresentando-se na cor roxa. 
Já as bactérias Gram-negativas possuem uma parede de 
peptidoglicano mais fina que não retém o cristal violeta durante o 
processo de descoloração e recebem a cor vermelha no processo de 
coloração final. 
Exemplos de bactérias Gram-positivas 
Bacillus, Nocardia, Clostridium, Propionibacterium, Actinomyces, 
Enterococcus, Cornyebacterium, Listria, Lactobacillus, Gardnerella, 
Mycoplasma, Staphylococcus, Streptomyces, Streptococcus. 
Gram-
positiva 
Exemplos de bactérias Gram-negativas 
Escherichia, Helicobcater, Hemophilus, Neisseria, Klebsiella, 
Enterobacter, Chlamydia, Pseudomonas, Salmonella, Shigella. 
Gram-negativa 
PASSO A PASSO DA 
METODOLOGIA DE GRAM 
1. Cubra o esfregaço com violeta-de-metila e logo após deixe por 
aproximadamente 15 segundos; 
2. Adicione igual quantidade de água sobre a lâmina coberta com 
violeta-de-metila e então deixe agir por mais 45 segundos; 
3. Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; Cubra a 
lâmina com lugol diluído (1/20) e deixe agir por aproximadamente 1 
minuto; 
4. Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente; 
5. Adicione álcool etílico (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando-a, até 
que não desprenda mais corante; 
6. Lave em um filete de água corrente; 
7. Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 
segundos; 
8. Lave em um filete de água corrente; 
9. Deixe secar ao ar livre, ou seque suavemente com o auxílio de um 
papel de filtro limpo; 
10. Visualize no microscópio. Logo após leia em objetiva de 
imersão (100 X). 
Método de coloração de Gram 
APLICAÇÃO E BENEFÍCIOS DA 
COLORAÇÃO DE GRAM 
De fato a metodologia irá ajudar na identificação de uma infecção 
bacteriana, determinando qual é o tipo de bactéria. Em outras palavras, 
a diferenciação das bactérias Gram-negativas e Gram-positivas permite 
ao médico determinar um tratamento eficaz ao paciente, dessa forma 
aplicando a terapia adequada em cada caso. 
Mesmo que nem todas as bactérias possam ser diferenciadas através 
da coloração de Gram, com certeza a metodologia tem grande 
aplicação no diagnóstico clínico e pesquisa biológica. 
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METODOLOGIA DE COLORAÇÃO 
DE GRAM 
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