Histoquímica, Citoquímica e Imunocitoquímica (Resumo do Livro "Histologia Básica", CAP 1: Métodos de Estudo em Histologia)

Prévia do material em texto

- A histologia é o estudo das células e dos tecidos do corpo e de
como essas estruturas se organizam para constituir os órgãos;
 
HISTOQUÍMICA E CITOQUÍMICA
- São termos utilizados para indicar métodos que identificam e
localizam substâncias em células e matriz extracelular, seja em cortes
histológicos ou em células cultivadas;
- Os procedimentos são baseados nas reações químicas específicas ou em
interações de alta afinidade entre moléculas;
- Os métodos originam substâncias insolúveis coloridas (microscopia de
luz) ou elétron-densas (microscopia eletrônica);
 *ÍONS: íons como cálcio, ferro, fosfato podem ser localizados em
tecidos a partir de reações químicas que produzem produtos insolúveis
escuros ou coloridos;
 *ÁCIDOS NUCLEICOS: o DNA pode ser identificado e quantificado
nos núcleos por meio das reações de Feulgen, que o deixam de cor
avermelhada. O DNA e RNA podem ser evidenciados pela coloração de
células ou cortes com corantes básicos;
 *PROTEÍNAS: métodos histoquímicos revelam algumas enzimas
como as Fosfatases, desidrogenases, peroxidase;
 *POLISSACARÍDEOS E OLIGOSSACARÍDEOS: os polissacarídeos podem
ser livres ou combinados com proteínas e lipídios, e quando combinados
eles constituem um grupo heterogêneo e complexo de moléculas. Eles
podem ser demonstrados pela reação de ácido periódico-Schiff (PAS). O
glicogênio, um polissacarídeo livre, pode ser demonstrado pela reação de
PAS em fígado, músculo e em outros tecidos;
 Já as glicoproteínas são moléculas de proteínas associadas a cadeias
pequenas e ramificadas de açúcares (oligossacarídeos), em que algumas
não contém nenhum grupo ácido e são PAS-positivas, e outras possuem
radicais carboxila ou sulfato;
 As glicosaminoglicanos são polissacarídeos, que quando em grande
número de cadeias se prendem ao longo de um eixo proteico e
constituem os preteoglicanos. Por serem fortemente aniônicas devido ao
seu alto conteúdo de grupos carboxila e sulfato, reagem intensamente
com o corante alcian blue.
HistologiaHistologia
 *LIPÍDIOS: aplicação de corantes solúveis em lipídios, como o sudan
IV e sudan black. O corante se dissolve nas gotículas de lipídios,
adquirindo a cor do corante.
DETECÇÃO DE MOLÉCULAS EM CORTES HISTOLÓGICOS POR MEIO
DE INTERAÇÕES MOLECULARES DE ALTA AFINIDADE
- Uma molécula pode ser detectada por meio de compostos que
interagem especificamente e se ligam com a molécula de interesse. Esses
compostos geralmente não possuem cor e devem ser acoplados a um
marcador, que é visível a microscopia de luz ou eletrônica. Os
marcadores mais utilizados são: substâncias fluorescentes, átomos
radioativos, moléculas de enzimas como a peroxidase, metais. Esses
métodos objetivam detectar principalmente açúcares, proteínas e ácidos
nucleicos. A faloidina, proteína A e anticorpos são exemplos de
compostos que interagem especificamente com outras moléculas.
IMUNOCITOQUÍMICA
- A relação entre uma molécula e um anticorpo que a reconhece é
altamente específica, por isso, os métodos que usam anticorpos são de
grande utilidade para identificar e localizar proteínas e glicoproteínas;
- A imunocitoquímica é uma metodologia que permite identificar, por
meio de anticorpos, moléculas em cortes ou em células cultivadas. 
- O material que se supõe conter uma determinada proteína é incubado
em uma solução que contém um anticorpo que reconhece essa proteína.
Um marcador deve ser acoplado ao anticorpo para a visualização em
microscopia de luz ou eletrônica;
- A proteína deve ter sido previamente purificada e isolada de modo
que anticorpos possam ser produzidos contra ela
.REFERÊNCIA: JUNQUEIRA LC & CARNEIRO J. Histologia básica, texto e atlas.
Rio de Janeiro. 12ª edição, 2013.