Relatorio Aula Prática 2 bioquimica

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Acadêmicos:
Letícia Indicattia Micheli Pierozanb Suelen F. Pereirac
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA 
DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS
Caxias do Sul 2021
Acadêmicos:
Letícia Indicattia Micheli Pierozanb Suelen F. Pereirac
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA 
DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS
Relatório de aula prática entregue a Disciplina de Bioquímica Clínica do a,b,cCurso de Biomedicina, do Centro Universitário da Serra Gaúcha (FSG), como pré-requisito para obtenção de aprovação.
Professora Nicole Sartori Ribeiro
Caxias do Sul 2021
SUMÁRIO
INTRODUÇÃO.	4
OBJETIVO GERAL	6
OBJETIVOS ESPECÍFICOS	6
MATERIAIS E MÉTODOS	6
RESULTADOS	6
CONCLUSÃO	7
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS	9
INTRODUÇÃO
As proteínas são componentes importantes de todas as células e tecidos; além de funções estruturais, constituem enzimas e hormônios que regulam funções corporais. Esse exame mede a quantidade total de proteínas na parte líquida do sangue (plasma), separada das células.
As proteínas plasmáticas são classificadas em dois tipos: albumina e globulinas. A albumina representa 55% a 65% do total e mantém a pressão osmótica do sangue, impedindo a passagem excessiva da água para os tecidos. Muitas moléculas pequenas são transportadas no sangue ligadas à albumina. 
A albumina é a proteína mais abundante circulante do plasma e dos líquidos extracelulares. Possui meia-vida longa (18 a 20 dias) e funções de ligação e transporte de inúmeras substâncias (cálcio, zinco, magnésio, cobre, ácidos graxos de cadeia longa, esteroides, drogas e etc.), além de ser responsável pela manutenção da pressão coloidal osmótica do plasma, preservando a distribuição de água nos compartimentos corporais. Tem baixa sensibilidade na avaliação da desnutrição aguda. As globulinas incluem enzimas, anticorpos e mais de 500 outras proteínas. A relação albumina/globulinas é obtida dividindo a quantidade de albumina no sangue pela quantidade de globulinas.
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1. OBJETIVO GERAL
Realizar a dosagem de proteínas totais utilizando-se sangue como material biológico, seguindo as instruções do kit de determinação de prroteinas totais monoreagente por metodologia colorimétrica. Além disso, motar um gel para simular técnica de Eletroforese de Proteínas.
2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Revisar as principais funções das proteínas de fase aguda no organismo e correlacionar valores de quantificação com possíveis disfuções, e também entender mais sobre a técnica de eletroforese de proteínas e como é realizada.
3. MATERIAIS E MÉTODOS
Na aula prática foi realizado um teste que consiste na determinação das proteínas totais, sem a utilização de equipamentos automatizados existentes hodiernamente nos laboratórios. Para a realização do teste foi utilizado um kit no qual estão presentes reagentes prontos: Biureto (R1), o qual tem em sua composição : Hidróxido de Sódio < 500 mmol/L, Tartarato de Potássio e Sódio <100 mmol/L, Iodeto de Potássio <20 mmol/L e Sulfato de Cobre <200 mmol/L. dentre estes, as enzimas são misturadas a amostra sofrendo uma reação no tubo de ensaio; e um reagente padrão (R2), que possui Albumina 4g/dL, estabilizante e conservante.
Para a determinação dos níveis de proteínas totais, foram identificados três tubos de ensaio, um foi chamado de tubo Amostra (A), outro denominado tubo Padrão (P) e o último Branco (B). No tubo A, P e B foram pipetados 2,5mL de Reagente 1. Posteriormente, no tubo A foi pipetado 50μl de amostra (soro, líquido com coloração amarelada, onde estão presentes carboidratos, lipídeos, proteínas etc., separado por centrifugação). Já no tubo P foram pipetados 50μl de R2. E por fim, no tubo B foram pipetados 50 μl de água deionizada. Então, as soluções foram agitadas e os tubos ficaram em repouso por 10 minutos. Depois leu-se o resultado no espectrofotômetro através de cubetas.
Para a simulação da técnica de Eletroforese de Proteínas primeiramente foi feito o gel. Para isso, utilizou-se 100 ml de tampão 10x diluido 1x (900ml de água e 100 ml de tampão), além de 0,8-1 g de pó agarose. Esses compostos foram medidos e misturados, levados ao microondas por mais ou menos 1 minuto. Após isso, foi despejado em uma placa retangular com um pente para formação dos poços para posteriormente pipetar as amostras. Aguardou-se até a gelificação. Quando ficou pronto, o pente foi retirado e o gel foi submerso em líquido, sobre um campo elétrico. Assim, as amostras, previamente misturadas a um corante, foram pipetadas nos buracos deixados pelo pente. O campo elétrico foi assionado permitindo a migração das proteínas.
4. RESULTADOS
A reação enzimática que ocorre nos tubos consiste na reação das ligações peptídicas das proteínas (-CONH-) com os ions cúpricos, em meio alcalino, formando um complexo de coloração violeta que é proporcional ao teor das Proteínas no meio. A presença do Tartarato de Sódio e Potássio estabiliza o reagente e a concentração adequada de Iodeto de Potássio previne a sua auto-redução. A intensidade da cor é proporcional a concentração de proteínas em função disso temos o valor de absorbância lido no espectrofotômetro em 545nm.
Os valores que foram obtidos no espectrofotômetro foram:
· Absorbância da Amostra: 0,328
· Absorbância do Padrão: 0,318
· Absorbância do Branco: 0,005prro
O valor do branco deve ser diminuído dos valores de amostra e padrão para evitar interferência. Assim temos:
· Absorbância da Amostra: 0,323
· Absorbância do Padrão: 0,313 
O cálculo feito para determinação das proteínas totais foi seguinte: 
Proteínas Totais (g/dL) = Absorbância da Amostra x 4
 Absorbância do Padrão
Feito isso (0,323 / 0,313 x 4) obteve-se um valor de 4,1 g/dL. Esse valor, comparado aos valores de referência (Tabela 1- Retirada da Bula do kit utilizado) e considerando um indivíduo adulto, indica um quadro de dimiuição das proteínas totais. Nesse sentido, percebe-se que a amostra pertence a um indivíduo provavelmente desnutrido. Este provavelmente não consome a quantidade de preteínas necessárias na sua dieta diária, causando essa diminuição.
Tabela 1
Fonte: Bioclin, Porteínas Totais Monoreagente, REF: K031, Instruções de Uso.
OBS: Não foi possível verificar os resultados da eletroforese posto que é um processo demorado e não hávia tempo hábil para fazer sua leitura
5. CONCLUSÃO
O teste de preteínas totais é um exame importante para averiguar o estado geral do paciente, posto que proteínas aumentadas indicam possíveis inflamações e quando diminuídas representam um quadro de desnutrição. Com a medição das proteínas totais, temos indicativos importantes que ajudam no desfecho clínico dos pacientes. Quato a eletroforese de proteínas, foi incrível aprender a maneira como é feita, posto que é interessante praticar os conhecimentos e o passo a passo visto em aula. A aula prática foi muito importante para revisar os conhecimentos e esclarecer dúvidas gerais e, dessa forma, aprender ainda mais sobre a matéria.
(May 17, 2007) Van Voorhees B. MedlinePlus Medical Encyclopedia. Total Protein. Available online at http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003483.htm. Accessed April 2009.