Relatório Microbiologia

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RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA 
DE MICROBIOLOGIA MÉDICA 
 
 
Acadêmico: Nicolas Carvalho 
Data: 16/03/2021 
 
 
 
 
 
 
 
INTRODUÇÃO: 
Na aula prática utilizamos dois métodos para fazer a diferenciação das bactérias. A coloração 
de Gram, que é o método mais utilizado no meio da microbiologia e análises clínicas para a 
diferenciação em bactérias Gram negativas e Gram positivas, permitindo assim que consiga 
se preparar e orientar seu tratamento dependendo da classificação obtida. Diferenciando 
em vermelho (Gram negativas) e roxo (Gram positivas). 
E a prova da Catalase, em que a enzima catalase é fator determinante para diferenciar uma 
bactéria aeróbica de uma anaeróbica. Caso haja reação com a água oxigenada, seu 
esfregaço começará a soltar bolhas, indicando que a enzima catalase está sofrendo a reação 
e está soltando oxigênio, sendo assim catalase positiva (aeróbica). Caso não solte bolhas 
nenhuma após misturar bem, então será catalase negativa (anaeróbica). 
COLORAÇÃO DE GRAM: 
MATERIAIS UTILIZADOS: 
• Cristal violeta (corante) 
• Lugol (fixador) 
• Álcool 100% 
• Fucsina (corante) 
• Solução salina 
• Lâmina 
• Bico de Bunsen 
• Microscópio óptico 
• Alça de platina 
• Placa de Petri (A.EMB) 
• Pipeta de Pasteur 
• Meio de suporte para sustentação da lâmina 
1º PASSO: PREPARAR O ESFREGAÇO 
Primeiro pegue a lâmina e pingue cerca de 2 a 3 gotas da solução salina, em seguida deve-
se selecionar a bactéria que deseja analisar e capturá-la com a alça de platina (já esterilizada 
pelo bico de Bunsen) e misturá-la na lâmina, de maneira que fique homogênea. 
2º PASSO: FIXAÇÃO DO ESFREGAÇO 
Pegue o suporte para sustentar a lâmina e coloque-a sobre o fogo do bico de Bunsen a 
uma distância moderada (para que seque sem queimar a bactéria). Após ter secado, deve-
se passar a lâmina 3 vezes pelo fogo do bico de Bunsen. 
3º PASSO: COLORAÇÃO DE GRAM 
Nessa etapa deve-se seguir o passo a passo de coloração para que não prejudique seu 
diagnóstico final. 
1. Adicionar o corante cristal violeta e deixar na lâmina por 1 minuto agindo. 
2. Lavar com água corrente. 
3. Adicionar Lugol (a fim de fixar o corante cristal violeta) e deixar novamente por 1 
minuto agindo. 
4. Lavar com álcool 100% (nessa etapa já é possível ter uma ideia de Gram negativa ou 
Gram positiva, sendo uma etapa diferencial). 
5. Lavar com água corrente. 
6. Aplicar o corante Fucsina (para colorir de vermelho) e deixar agindo por 30 segundos. 
7. Lavar em água corrente. 
8. Deixar secar em temperatura ambiente. 
4º PASSO: ANÁLISE NO MICROSCÓPIO ÓPTICO. 
Após a lâmina ter secado em temperatura ambiente, deve-se colocar no microscópio a fim 
de obter seu resultado, comparando suas características morfotintoriais. 
RESULTADOS DA COLORAÇÃO (AULA PRÁTICA): 
A bactéria analisada na aula prática se tratava da chamada escherichia coli, um bacilo Gram 
negativo que se corou conforme o esperado, assumindo a cor vermelha provida do corante 
fucsina. 
A bactéria se corou de vermelho devido as etapas de coloração de gram. A adição do 
corante cristal violeta cora a parede celular da bactéria, que posteriormente tem essa cor 
fixada a sua parede pelo Lugol, porém, na etapa diferencial, que é a lavagem com álcool 
100%, há a quebra da parede celular da bactéria, levando junto o corante cristal violeta, 
sendo esse o ponto diferencial das bactérias. 
Gram negativa: pouca parede celular, há a quebra da parede e o corante se perde todo 
(sendo corada posteriormente pela fucsina). 
Gram positiva: muita parede celular, não perde a coloração violeta após a lavagem devido 
seu grande número de camadas de parede celular. 
Sendo assim, após analisar a microscopia e ter nos deparado com uma coloração 
avermelhada, foi possível diagnosticar essa bactéria em questão como um bacilo Gram 
negativo. 
O meio utilizado foi o A.EMB (Agar Eosina Azul de Metileno), para determinar se há ou não 
fermentação, no caso da E.Coli, como ela fermenta o meio fica mais escurecido (preto ou 
vermelho) enquanto as que não fermentam costumam assumir cor âmbar transparente. 
PROVA DA CATALASE: 
MATERIAIS UTILIZADOS: 
• Lâmina 
• Água oxigenada 
• Placa de Petri (A.EMB) 
• Alça de platina 
• Bico de Bunsen 
• Pipeta de Pasteur 
PASSO A PASSO: 
1. Com auxílio da Pipeta de Pasteur, adicionar 1 gota de água oxigenada na lâmina. 
2. Capturar a bactéria com a alça de platina. 
3. Misturar bem a bactéria com a água oxigenada na lâmina. 
4. Esperar para ver se haverá reação com água oxigenada. 
 
 
 
 
RESULTADOS (AULA PRÁTICA): 
A bactéria analisada na aula prática (Escherichia coli) provou-se ser catalase positiva (aeróbica) 
por ter sofrido reação com a água oxigenada, soltando então as bolhas já descritas. 
 Catalase positiva: Bacilo Gram negativo: