Introdução a bioquimica clinica, espectrofotometria e enzimologia clinica

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Júlia Lorena – Biomedicina 
Análises clinicas I 
Aula 2 – dia 11/08 
Professor Luiz Hendrix 
Dados bioquímicos na medicina 
clínica 
- muitas doenças possuem alterações bioquímicas, 
portanto área bioquímica é extremamente importante 
para detectar essas alterações 
- laboratório de bioquímica possui muita variação de 
equipamento, onde se tem desde os grandes e 
automatizados, capazes de realizar vários exames, até 
os pequenos e simples que exigem poucos 
componentes 
- mas com tanta tecnologia, o ser humano tende a 
automatizar tudo e confiar apenas num computador 
 viés tecnológico: acreditar que um computador 
sempre vai fazer tudo melhor que a gente e 
isso acaba nos deixando preguiçosos 
- setores onde possui muita tecnologia tem-se rodízio 
de funcionários para não haver preguiça 
- devemos considerar os exames bioquímicos em um 
contexto pois eles refletem muito as características das 
pessoas 
 Ex: diabético parar de comer doce 3 dias antes 
= exame de glicose vai dar ok mas a 
hemoglobina glicada vai dar alterada 
- biomédico no laboratório tem muito contato com o 
médico e sempre que ligar, anota tudo que vai falar 
antes 
Diagnóstico 
- biomédico faz diagnóstico? Sim e não 
- biomédico da laudo mas quem fecha o diagnóstico é o 
médico 
- biomédico na hematologia é importante para o 
diagnóstico (descobrir câncer ao analisar células do 
câncer, leucemia, etc) 
- realizar diagnóstico é propor uma hipótese que surgiu 
de uma pergunta, e para testá-la é preciso os exames 
 Porque o céu é azul? (pergunta) 
 Porque jogaram tinta azul nele (hipótese) 
 Para testar essa hipótese precisa-se de testes 
- A validez de um diagnóstico clínico é testada por meio 
da observação do histórico natural da condição, de sua 
resposta ao tratamento apropriado ou pelos resultados 
de exames definitivos 
- 80% dos casos um diagnóstico confiável pode ser 
realizado com base somente no histórico 
- todos os esforços devem-se concentrar em minimizar 
a influência tanto de fatores analíticos quanto pré-
analíticos na precisão dos dados 
Conduta num contexto de análises 
clínicas 
- avaliação da gravidade da doença através de 
marcadores, de forma quantitativa 
- na bioquímica, quanto mais anormal um resultado, 
mais provável de ser um distúrbio patológico 
- monitorar prognóstico: 
 pessoas com mesma doença reagir de forma 
diferente ao tratamento 
 estimar benefícios e riscos de um tratamento 
- monitoramento do progresso da doença: 
 pessoas com diabetes são monitoradas nos 
primeiros meses de tratamento 
- rastreamento: 
 quanto mais cedo descobrir, mais fácil de tratar 
Requisição e interpretação de 
dados bioquímicos 
- a requisição dos exames precisa conter: 
 nome do paciente 
 número 
 idade 
 sexo 
- precisa-se de tudo isso para se construir um contexto 
no exame 
Fatores que afetam o resultado 
dos exames 
- fatores pré analíticos 
- fatores analíticos (erros que acontecem durante a 
análise) 
- fatores pós analíticos (liberar exames ou dados 
errados) 
- fatores biológicos do paciente (endógenos ou 
exógenos) 
 endógeno: paciente tem alguma doença 
 exógeno: paciente faz uso de drogas ou algum 
medicamento 
Interpretação dos resultados 
- o que é ser normal:? Estar dentro dos valores de 
referência ou dentro do seu histórico médico 
- se a pessoa fez o exame pela primeira vez e deu 
alteração, precisa olhar para valor de referência pois 
não tem um anterior para comparar 
- valores de referência = valores da normalidade clínica 
- os valores são criados em grandes centros de estudo 
onde se pega uma quantidade de pessoas e separa em 
grupos e cria um valor de referência para cada grupo 
E se der alterado? Como libero? 
- antes de liberar um laudo alterado é preciso: 
 verificar a calibração do aparelho, reagentes e 
controles (os equipamentos precisam passar 
por controle todo dia quando chegar no 
laboratório) 
 confirmar se a amostra é do paciente 
 conversar com o médico (pedir histórico do 
paciente) 
 ligar para o paciente (caso não consiga histórico 
com o médico) 
 solicitar nova coleta 
- nunca liberar resultado se tiver duvida ou algo que 
não saiba explicar 
- e se mesmo depois de todas as etapas o resultado 
continuar dando alterado, pode liberar pois não é erro 
Auditoria laboratorial 
- grandes laboratórios tem seu próprio setor de 
auditoria 
funções do auditor 
- faz a organização pra saber se o laboratório esta 
fazendo tudo certo, faz checagem dos aparelhos, etc 
Qualificação de sistemas 
analíticos 
- como saber se o sistema do laboratório é bom? 
- precisão x exatidão 
 
- grau de exatidão e precisão vai depender do grau de 
aceitabilidade de cada laboratório 
- cada laboratório tem seu grau de aceitabilidade nos 
exames, portanto, não se apegue a valores de 
referencia 
 Ex: amostra do paciente saudável precisa dar 10 
mas deu 8, isso é aceitável por conta da 
variabilidade 
Principais interferentes em 
resultados 
hemólise 
 
 Quando a hemólise é leve, pode ser que o 
exame não de tanta alteração 
 Muitos laboratórios não aceitam amostra 
hemolisada, portanto, precisa realizar nova 
coleta 
lipemia 
 
 Má alimentação, triglicerídeo, doenças, etc, 
podem ser os causadores da lipemia 
hemoglobinopatia e hemoglobina glicada 
 Existem pacientes que possuem distúrbios na 
hemoglobina (A1, A2 e F) e isso faz que com 
que elas não sejam sintetizadas 
 Quem possui distúrbio na hemoglobina A e 
precisa dela para fazer hemoglobina glicada, o 
exame vai dar erro 
Principais instrumentos em 
bioquímica clinica 
centrifuga para microtubos 
 
centrifuga de bancada 
 
centrifuga para microhematócrito 
 
centrifuga de placa 
 
tipos de banho Maria 
 
Espectrofotometria; o que é? 
- método de análise quantitativa instrumental mais 
utilizado nas investigações biológicas e físico químicas 
 
- aparelho que mede o espectro da luz na amostra; 
intensidade de luz 
- todo composto químico absorve, transmite ou reflete 
luz (radiação eletromagnética) 
- a luz será transmitida em um certo comprimento de 
onda 
- quanto mais concentrada a solução, maior absorbância 
de luz e menos transmitância 
 Ex: camisa preta esquenta mais que branco 
pois absorve mais calor 
- dependendo da cor da amostra, vai ter um 
comprimento de onda diferente 
- absorbância: capacidade de absorver luz 
- transmitância: capacidade de transmitir luz 
 
Como funciona um 
espectrofotômetro 
 
Absorção de radiação 
- cada substancia absorverá a radiação luminosa 
característica da sua estrutura 
Cubeta 
 
- recipiente onde vai a amostra 
- pode ser de diferentes materiais: 
 Quartzo 
 Vidro 
 Plástico 
- sempre ter cuidado ao manusear 
- nunca secar por aquecimento 
- nunca tocar na parte óptica 
Princípios de diluição 
- tornar uma solução menos concentrada é aumentar o 
solvente (geralmente água) 
- substância pura = soluto 
- substância diluidora = solvente 
- diluição seriada: forma seqüencial; feita em alguns 
exames onde a amostra ta muito concentrada 
 1:2 = fator de diluição 2 
 Quanto maior o fator de diluição, menor a 
concentração 
 Faz-se isso para poder passar luz 
Enzimologia Clínica: reações 
químicas 
- nosso corpo possui capacidade de extrair energia do 
meio externo e utilizar para sustentar os processos 
vitais 
- o estudo dos fluxos energéticos através do sistema 
biológico chama-se bioenergética 
- as reações químicas são um meio de transferir 
energia de uma parte do corpo para outra 
- as reações são interruptas no nosso corpo e 
acontece a todo momento 
- energia = agitação = enzimas 
Enzimas 
- são proteínas que aceleram as reações químicas 
- catalisar uma reação química significa alterar sua 
velocidade 
- principais funções: 
 Alterar a velocidade / tempo de reação 
 Alterar aenergia de ativação (energia 
necessária para iniciar uma reação) 
 Não alteram a natureza da reação e 
concentração final (nunca irão transformar uma 
reação de síntese em uma reação de 
decomposição) 
Nomenclatura enzimática 
- oxidorredutases (catalisam as oxidações; oxidar = 
perder elétrons) 
- transferases (enzimas especificas para alguns tipos de 
grupos químicos) 
- hidrolases 
- liases 
- isomerases (alteração geométrica; enzimas que 
mudam estrutura de uma molécula) 
- ligases (metabolismo de ATP) 
Fatores que influenciam na 
atividade enzimática 
Temperatura 
 Toda enzima tem uma temperatura ótima de 
ação, se temos uma temperatura muito alta, 
acontece a desnaturação proteica e se temos 
uma temperatura muito baixa, há a inativação 
 Ex: batata quando cozinha fica mole pelo 
rompimento das ligações 
Ph 
 Influenciam em como as enzimas são ativadas 
 Cada enzima tem um ph ótimo 
 Validade altera o ph 
Reações enzimáticas 
método enzimático 
 Muito utilizados na rotina bioquímica 
 São os mais utilizados para determinação de 
lipídios plasmáticos (colesterol e triglicerídeos) 
 As enzimas vão atuar diretamente no analito 
que você quer dosar 
 Ex: para medir glicose precisa-se da amostra 
(glicose) que irá reagir com a enzima e irá 
produzir um produto, esse produto vai reagir 
com o reagente e gerar uma cor que é 
medida no espectrofotometro 
 
Mecanismo de catálise 
- podem acontecer por diversos mecanismos 
- proximidade 
- acidobásico 
- tensão 
- covalente 
Exemplo de kit enzimático para 
glicose 
 
- no kit tem quais reagentes, metodologia, o que você 
vai olhar, etc 
- princípios: a enzima vai produzir o peróxido de 
hidrogênio 
- precisa-se nomear 3 tubos: branco, padrão e amostra 
- tubo padrão = é o valor que precisa dar de resultado 
naquele kit 
- tubo branco = remover interferências do 
espectrofotômetro (utiliza-se água) 
 
Enzimas no diagnóstico clínico 
- isoenzimas 
- catalisam o mesmo tipo de reação mas em órgãos e 
tecidos diferentes elas podem ter aumentos ou 
descréscimos 
- são irmãs mas não gêmeas 
- as estruturas são ligeiramente diferente 
- papel importante no diagnóstico de patologias 
Fosfatase ácida 
- relacionada a alteração prostática 
- atividade ideal em ph abaixo de 7 
- possuem certo grau de especificidade tecidual 
- maior concentração na próstata, fígado, baço e osso 
- valores de referencia dependem de sexo, idade, 
status hormonal (em mulheres), etc 
- principal causa de aumento = doença prostática 
(tumor) 
- não possui significado clinico caso seja reduzida 
Fosfatase alcalina 
- ALP 
- ligada a membranas celulares 
- dependendo da dosagem aplicada, não terá 
especificidade pois muitos órgãos precisam dela 
- produzida por hepatócitos ou osteoblastos 
- causas mais comuns do aumento = doenças 
hepáticas e ósseas 
- ligadas a diversas atividades do fígado 
 
Enzima conversora de angiotensina 
- porta de entrada do covid 
- ligada a diversas funções arteriais 
- podem variar de acordo com a função exercida no 
momento 
- modula a resistência vascular periférica e funções 
renais e cardiovascular 
- encontrada em menor quantidade no plasma 
- faz-se pedido de quantificação dos níveis de ACE para 
diagnóstico de sarcoidose (pois faz aumentar o numero 
de ACE) 
Acetilcolinesterase 
- produzida em diferentes tecidos 
- cliva a acetilcolina 
- encontrada no soro de forma diferente (PChE) 
- quantifica-se PChE para: 
 Monitoramento da exposição aos inibidores de 
colinesterase 
 Uso como teste de função hepática 
 Diagnostico de variantes genéticas 
- pode ser alterada por pesticida 
- aumento afeta sistema nervoso 
Lactato desidrogenase (LDH) 
- encontrada dentro de todas as células do corpo 
- altamente inespecífico 
- deve permanecer dentro da celula, se for encontrada 
fora quer dizer que tem uma lesão 
- as isoenzimas da LDH podem ser úteis para 
determinar fonte da lesão 
- marcador de morte em experimentos de pesquisa 
Creatina quinase (CK) 
- muito pedida na medicina do esporte 
- envolvida com funções musculares 
- causa comum de aumento = transtorno muscular 
(lesão) 
- lesão muscular pode ocorrer a partir de vários fatores 
- CK-MB (isoenzima) = alterações musculares cardíacas 
Alanina aminotransferase (ALT) e 
aspartato aminotransferase (AST) 
- TGO e TGP 
- ALT = ocorre em maior concentração no fígado 
- AST = localização citoplasmática e mitocondrial; maior 
concentração no miocárdio e no fígado e menor 
quantidade no músculo esqueletico 
 mede-se para monitoramento de hepatite 
- muitos medicamentos alteram os níveis de alt e ast