DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL HIV E DOENÇAS OPORTUNISTAS

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DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL HIV E DOENÇAS OPORTUNISTAS
HIV
●HIV - RETROVIRIDAE - retrovírus (VÍRUS RNA). 
●ANTÍGENOS: HIV1 E HV2, sendo o HIV-1 O TIPO MAIS VIRULENTO E MAIS DISSEMINADO PELO MUNDO.
●MATERIAL GENÉTICO: 2 FITAS DE RNA, POLARIDADE POSITIVA (+ssRNA).
●FASES DA REPLICAÇÃO VIRAL: 
1. Ligação ao receptor e co-receptor de LTCD4+.
2. Fusão.
3. Desnudamento.
4. Transcrição reversa no citoplasma celular.
5. Importação para o núcleo.
6. Integração ao genoma da célula hospedeira.
7. Transcrição.
8. Exportação a partir do núcleo.
9. Tradução no citoplasma.
10. Montagem.
11. Brotamento.
12. Liberação.
13. Maturação. 
História Natural do HIV:
●FASE AGUDA Alta replicação viral com migração aos linfonodos. É a fase assintomática ou sub-clínica: febre, calafrio, diarréia, artralgia, mialgia, mal estar, letargia, anorexia, náusea, faringite, eritema, leucopenia, monocitose relativa e trombocitopenia.
●FASE CRÔNICA ou LATENTE Indivíduo assintomático; perda gradativa de LTCD4; duração +/- 10 anos. Aumento da carga viral havendo diminuição dos linfócitos TCD4; Há vírus em todos os órgãos linfóides primários e secundários. 
	- ↑ 200 LTCD4/mm³ = indivíduo que vive com o HIV.
	- ↓ 200 LTCD4/mm³ = AIDS infecções oportunistas, tumores e alterações neurológicas. 
Transmissão:
●Sexual; Sanguínea (transfusão e compartilhamento de drogas injetáveis); Vertical (mãe para filho); Ocupacional (materiais perfurocortantes).
Marcadores da infecção pelo HIV:
●O QUE POSSO PESQUISAR E ONDE PESQUISAR? 
	- Antígenos (NO SANGUE) Material genético viral (RNA viral) e proteína viral (p24).
	- Anticorpos contra o antígeno de interesse (NO SANGUE E NA SALIVA) IgM e IgG. 
Diagnóstico do HIV/AIDS: 
O diagnóstico sorológico da infecção pelo HIV é realizado com pelo menos 2 testes: 
• O primeiro para Triagem com máxima Sensibilidade. 
• O segundo Confirmatório com máxima Especificidade. 
1) DIAGNÓSTICO RÁPIDO:
• Teste rápido fácil execução e teste de primeiro momento realizado presencialmente. 
• Amostra saliva, sangue, soro/plasma.
• Permite detectar rapidamente a presença de antígeno ou anticorpo na amostra. 
• >99,5 % de sensibilidade e >99 % especificidade. 
• Teste que permite uma resposta de uma janela de 1-3 meses. 
• Usa-se em situações em que o diagnóstico é essencial para a conduta imediata (parturientes, acidentes ocupacionais e multidões); Regiões sem infraestrutura laboratorial ou de difícil acesso. 
2) ELISA: ENSYME LINKED IMMUNO SORBENT ASSAY
• Imunoensaio marcado.
• Permite a detecção de anticorpos e antígenos específicos no soro e plasma sanguíneo.
• O teste é feito em placas de microtitulação, que indica a presença/ausência e QUANTIFICA os antígenos ou anticorpos na amostra. 
•Ensaio imuno-enzimático.
• Dois tipos de ELISA: 
- ELISA DIREITO (sanduíche) pesquisa Antígenos (antígenos do capsídeo p24).
- ELISA INDIRETO pesquisa Anticorpos (IgM e IgG contra proteínas do vírus).
• 1º e 2º geração INDIRETO IgG. 
• 3º geração INDIRETO IgM e IgG. JANELA IMUNOLÓGICA 20 - 30 DIAS.
• 4º geração INDIRETO IgM e IgG e DIRETO antígeno p24; JANELAS SOROLÓGICA 15 dias (reduz mais ainda o tempo de janela).
3) Western Blot / Imunoblot:
• Ensaio imunoenzimático (marcado). 
• Proteínas (virais) são separadas por diferença de peso molecular e transferidas para membranas de nitrocelulose / PVDF.
• É a técnica empregada na confirmação de testes positivos de ALTA ESPECIFIDADE (teste para fechar diagnóstico).
• Amostra: soro do paciente para detectar anticorpos (IgG). 
4) PCR quantitativo (qPCR): 
• Estima o número de cópias do genoma viral circulando no paciente (MONITORAMENTO DA CARGA VIRAL).
• Expresso em número de cópias do RNA de HIV/mL.
	- >= 5.000 cópias/mL Reagente (positivo).
	- < 5.000 cópias/mL Indeterminado.
	- <= 50 cópias/mL (negativo ou não detectável). 
• qPCR – Diagnóstico Molecular para HIV em Banco de Sangue. 
• Metodologia Sequenciamento Automático de DNA: RNA→ cDNA → PCR → Sequenciamento do gene pol. 
5) Contagem CD4/CD8: citometria de fluxo: 
• Função: monitorar a eficácia do tratamento antiretroviral.
• Feito quando sabe que a pessoa tem HIV; pesquisando a quantidade de CD4.
• Metodologia: Citometria de Fluxo. 
• Imunoensaio marcado. 
• Diferenciação das populações de linfócitos T através da identificação de moléculas expressas na superfície (CD), com uso de anticorpos monoclonais conjugados a fluorocromo.
	
	Amostra
	O que detecta
	Quando realizar
	Observações
	
Teste rápido
	
Saliva, soro, sangue/plasma. 
	
Presença de antígeno ou anticorpo na amostra. 
	Situações em que o diagnóstico é essencial para a conduta imediata, em regiões sem infraestrutura laboratorial ou de difícil acesso. 
	•Fácil execução.
•Realizado presencialmente.
•Alta sensibilidade. 
	
ELISA
	
Soro e plasma. 
	
Detecção de anticorpos (INDIRETO) e antígenos específicos (DIRETO). 
	Como detecta tanto antígenos quanto anticorpos, pode ser realizado antes e após a soroconversão.
• 3º geração janela imunológica de 30 dias.
• 4º geração janela sorológica de 15 dias. 
	•Quantifica antígenos e anticorpos na amostra. 
•Ensaio imuno-enzimático. 
	
Western Blot
	
Soro. 
	
Anticorpo IgG. 
	Técnica empregada na confirmação de testes positivos de ALTA ESPECIFIDADE, ou seja, é um teste para fechar diagnóstico.
	•Proteínas (virais) são separadas por diferença de peso molecular. 
	
qPCR
	
Sangue/plasma.
	Estima o número (QUANTITATIVO) de cópias do genoma viral circulando no paciente. 
	Obrigatório em banco de sangue.
Monitorar a infecção pelo HIV, orientar o tratamento e prever a evolução futura da doença.
	• Monitoramente da carga viral. 
•Expresso em número de cópias do RNA de HIV/mL.
	
Citometria de fluxo
	
Sangue.
	
Identificação de subpopulações de linfócitos (Ex. CD4 e CD8). 
	
Monitorar a eficácia do tratamento antiretroviral.
Periodicidade: em média três vezes ao ano.
	•Diferenciação de LTs pela identificação de moléculas expressas na superfície.
TUBERCULOSE E PNEUMONIA
	
			Tuberculose
	Pneumonia
	
Agente etiológico
	Mycobacterium tuberculosis (bacilo de Koch).
	*Hospitalar: Staphylococcus aureus. 
*Comunidade: Streptococcus pneumoniae. 
	
Resposta
	Hipersensibilidade Tipo IV - tardia (grânulos) leva a necrose caseosa. 
	Resposta inflamatória (sistema complemento) e Infiltração neutrofílica. 
	Radiografia torácica
	Cavitação e Tuberculose Miliar. 
	Condensação. 
Diagnóstico
Amostra Escarro pela manhã (2 ou 3 amostras).
1) Microscopia Direta:
● Pneumonia técnica de Gram; sendo os patógenos gram-positivos.
● Tuberculose coloração de Ziehl-Neelsen; sendo o patógenos BAAR. 
2) Cultura:
● Pneumonia Meio: Ágar sangue. 
- Staphylococcus aureus (Catalase +, Hemólise β, Coagulase +).
- Streptococcus pneumoniae (Catalase -, Hemólise α).
● Tuberculose Meio: proteína de ovo, Ágar ou automatizado. 
3) Teste Tuberculínico (TT ou PPD):
· Diagnóstico de: 
- Infecção Tuberculosa.
- TB latente.
- Não necessariamente a presença da doença. 
· Injeção intradérmica do antígeno tuberculínico (PPD–Rt23).
· Leitura: 72-96h após injeção (Hipersensibilidade IV - tardia).
· Falso-positivo: vacina BCG, micobactérias não TB.
· Falso-negativo: imunodeprimidos, gestação. 
4) IGRA: Ensaio de liberação de IFN-gama
· Testa se paciente possui células sensibilizadas contra proteínas de TB.
· Quantifica células T efetoras específicas as quais foram ativadas após exposição aos antígenos do M. tuberculosis.
· Atualmente, os IGRAs têm sido recomendados como potenciais substitutos da prova tuberculínica nos países de alta renda devido ao seu elevado custo. 
· Até o momento esta tecnologia não está incorporada ao Sistema Único de Saúde (SUS).
Tuberculose extra-pulmonar:
· Tuberculose pleural: 
- Amostra: líquido pleural.
- Diagnóstico por Microscopia Direta e Cultura. 
· Tuberculose miliar:
- Amostra: biópsia de fígado, medula óssea, urina.
- Diagnóstico por Microscopia Direta e Cultura. 
· Meningite (tuberculose x bacteriana): 
- Amostra: líquido cerebroespinhal (LCS).
- Contagem de células brancas (presençade Linfocitose):
* Bacteriana Polimorfonucleadas (Neutrófilo, Eosinófilo, Basófilo)
* TB Mononucleares (monócito, linfócito T/B).
- Glicose (baixa), Proteína (elevada).
- Diagnóstico por Microscopia direta e Cultura.
- qPCR (Primers específico) – exame complementar.