Aula 14 - Métodos Laboratoriais em Imunologia (1)

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MÉTODOS LABORATORIAIS EM IMUNOLOGIA
IMUNOLOGIA MÉDICA
PROF. PHELIPE S. SOUZA
AVALIAÇÃO DA RESPOSTA IMUNOLÓGICA
 Diferentes métodos
 Inata
 Específica
 Humoral
 Celular
 Reações secundárias da interação com o antígeno
REPOSTA IMUNE INATA E ADAPTATIVA
AVALIAÇÃO HUMORAL
 Reações de Precipitação
 Reação entre o epítopo do antígeno e o determinante de complementaridade do anticorpo em meio de 
solução
 Quantidades equivalentes
 Zona de precipitação
 Teoria das redes
 Quantidades desproporcionais
 Zona de excesso (de Ag ou Ac)
 Tubos com quantidades constantes do Ag, submetidos ao contato com diluições subsequentes do Ac
 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64...
 Também para reconhecimento de Ag
 Metódo Intidero x Direto
julia
Nota
Método Indireto.
REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO
REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO
REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO
REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO
AVALIAÇÃO HUMORAL
 Reações de Aglutinação
 Semelhante a teoria das redes
 Ag grandes (partículas, células, bactérias)
 Formação de grumos
 Aglutinação natural (superfície de microrganismos) ou passiva (partículas)
 Hemaglutinação
 Reconhecimento de antígenos na superfície das hemácias
 Tipagem ABO
REAÇÃO DE AGLUTINAÇÃO
AVALIAÇÃO HUMORAL
 Imunodifusão radial simples
 É uma reação de precipitação em meio de agarose. 
 Utilizam-se placas de Petry com agarose e quantidades conhecidas de antianticorpos monoclonais contra IgM
ou IgG ou IgA, avaliando-se a quantidade existente no soro testado.
IMUNODIFUSÃO RADIAL SIMPLES
AVALIAÇÃO HUMORAL
 Reações de Radioimunoensaio
 São as reações que se tornam visualizadas por isótopos radioativos, como iodo131, unidos às substâncias. 
 Para reações diretas (pesquisa de antígeno), são marcados anticorpos conhecidos; 
 Nas reações indiretas como para determinação de IgE (análise do anticorpo), marcam-se antígenos 
previamente conhecidos. 
RADIOIMUNOENSAIO
RADIOIMUNOENSAIO
AVALIAÇÃO HUMORAL
 Reações imunoenzimáticas (ELISA)
 A reação imunoenzimática ou método ELISA é útil para determinação de anticorpos em baixas concentrações, como IgE. 
 Participação de enzima e substrato e avaliação de mudança no padrão de cor pela degradação
 A intensidade de degradação depende da quantidade de Ac presente no soro estudado.
 Espectofotômetro
 ImmunoCap
 Determina IgE específica a alérgenos recombinantes ou naturais pelo método floroenzimaimunoensaio.
 Microarray – ISAC
 Microarranjos de proteínas, também determina IgE específica, analisando múltiplos alérgenos simultaneamente, em triplicata e com menor 
quantidade de sangue. 
ELISA
ELISA
ELISA
ISAC
AVALIAÇÃO HUMORAL
 Nefelometria
 A nefelometria é realizada com solução adicionada de antígeno em concentrações variáveis, para uma 
quantidade fixa de anticorpo, por meio de uma reação celular espectrofotométrica 
NEFELOMETRIA
AVALIAÇÃO HUMORAL
 Western Blotting
 Determinar a presença e o tamanho de uma proteína em uma amostra biológica
 Essa abordagem fornece informação sobre o tamanho e a quantidade de antígeno. 
 Em geral, as sondas de anticorpo secundário são marcadas com enzimas geradoras de sinais de 
quimioluminescência e imprimem imagens em filme fotográfico.
AVALIAÇÃO DE LINFÓCITOS
 Reações de Imunofluorescência
 Úteis para quantidades pequenas do elemento a ser identificado. 
 São acrescentados corantes florescentes como a floresceína para que a reação antígeno-anticorpo se torne 
visível, observando-se a luz emitida. 
 Citometria de Fluxo
 Contagem da subpopulação de linfócitos
AVALIAÇÃO DO SISTEMA COMPLEMENTO
 Ensaio Hemolítico
 CH50 para avaliar via clássica – C1 a C9
 AP50 para avaliar alternativa
 Imunodifusão radial simples, nefelometria e ELISA
AVALIAÇÃO DOS FAGÓCITOS
 Digestão por fagócitos
 O teste do nitroblue tetrazolium (NBT) avalia a etapa do metabolismo oxidativo da digestão por neutrófilos. 
 O NBT é um corante solúvel amarelo, que é reduzido, após o metabolismo oxidativo das pentoses, pelos elétrons liberados. Quando 
reduzido apresenta-se sólido, como pigmentos de coloração azul escura, quae se depositam no citoplasma de fagócitos com digestão 
normal.
 O teste da dihidrorodamina (DHR) também avalia a etapa da digestão da fagocitose.
 Fluorescência
 Atividade bactericida
 Bactérias vivas coradas em verde pelo corante acridina, quando morta se cora em vermelho e se conta.
NBT