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19/05/2021 – aula 9 Professora Anna Léa – MAD aplicado Diagnóstico imunológico - o teste sorológico tem esse nome pois se usa soro como material - detecta anticorpo e antígeno - soro x plasma = plasma possui fibrinogênio - diagnóstico - acompanhamento terapêutico (para saber como o indivíduo está respondendo a um tratamento) - epidemiologia (os dados sobre COVID atualmente não correspondem com a realidade pois não testamos em massa a população e os casos assintomáticos não entram nos dados) - os dados epidemiológicos são importantes para que decisões sejam tomadas em relação a vigilância e saúde pública - tem doenças que só podem ser controladas a partir dos dados epidemiológicos - nos testes imunológicos pode-se procurar antígenos ou anticorpos - importância da pesquisa de anticorpos no diagnóstico imunológico: Esclarecer processos patológicos Diferenciar fase da doença (buscando igm e igg) Diagnosticar doença congênita Selecionar doadores de sangue Selecionar doadores de órgãos Avaliar eficácia terapêutica Avaliar imunidade naturalmente adquirida ou induzida artificialmente Verificar o agravamento da doença - importância da pesquisa de anticorpos nas pesquisas epidemiológicas: Estabelecer a prevalência (quantos casos novos tem) Verificar a erradicação Verificar a re-introdução de novos casos (descoberta da re-introdução do sarampo através dessas pesquisas epidemiológicas) - importância da pesquisa de antígeno: Como critério de cura (pesquisa o antígeno para ver o curso da doença no paciente) Definição de etiologia da doença (ao invés de procurar anticorpo procura-se antígeno pois consegue detectar em menos tempo de sintomas) Inquéritos epidemiológicos → seleção de doadores de sangue - diagnóstico laboratorial por meio de técnicas imunológicas - busca anticorpo ou antígenos no corpo do paciente por meio de ensaios - ensaios de precipitação, aglutinação, fixação de complemento, neutralização ou imunoensaios (usa um revelador da interação antígeno-anticorpo) - os atuadores desses imunodiagnósticos serão os antígenos, anticorpos e nos imunoensaios, um revelador - nos ensaios de imunoprecipitação detecta-se antígenos e anticorpos solúveis que vão precipitar - envolve antígeno particulados (células carregando o antígeno) ou antígenos solúveis aderidos a partículas - detectam antígeno ou anticorpo - pode ser direta ou indireta - direta → antígenos celulares grandes presentes nas superfícies das células (tipagem sanguínea); acontece a aglutinação das células com os anticorpos - indireta → prende-se antígenos solúveis na superfície de partículas inertes, que não interferem na interação antígeno-anticorpo (bolinha de látex, hemácia) e coloca o soro do paciente nas partículas; aglutinação passiva TIPOS DE PARTÍCULAS USADAS NOS ENSAIOS DE AGLUTINAÇÃO - aglutinação indireta: Plástico (ensaio de imunolátex) Gelatina Carvão Hemácias formolizadas e taninizadas de aves e carneiros (ensaio de hemoaglutinação) ALGUNS EXEMPLOS DE TESTES DE AGLUTINAÇÃO - tipagem sanguínea - ensaios de aglutinação em látex - ensaio de proteína c reativa (ao invés de procurar anticorpos, procura-se proteínas, então a bolinha de látex tem que estar marcada com um anticorpo contra proteína c reativa) - ASO - fator reumatóide - staphiclin látex – - usa sistema revelador (substancia fluorescente) - busca-se antígenos - fixa o esfregaço na lâmina - trata o esfregaço com anticorpo marcado com fluoróforo - incuba para o anticorpo e antígeno se ligarem - faz a lavagem para remover excesso de anticorpos e visualiza no microscópio - desvantagem → não é todo lugar que possui microscópio de fluorescência pois é mais caro - utiliza anticorpos monoclonais marcados com fluorescência diagnóstico de sífilis – - procura antígeno ou anticorpo - pode ser usada para detectar autoanticorpos em doenças autoimunes - fixa antígeno que vem no kit na lâmina > adiciona soro do paciente > incuba > lavagem > adiciona 2 anticorpo conjugado, antihumano - antihumano pois os anticorpos que estão no soro são humanos, portanto, precisa-se que o secundário reconheça anticorpos humanos - o antihumano esta conjugado com a substancia fluorescente - na imunofluorescência indireta tem-se uma amplificação melhor da resposta pois tem um maior número de anticorpos conjugados com fluoróforos
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