Preparo de Lâminas Histológicas e Técnicas de Coloração

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BRUNA SILVEIRA ANTUNES – CITOLOGIA E HISTOLOGIA GERAL 
MED XXVIII UIT - AULA EXTRA- 23/08/21 
 
• Oriundos de animais de laboratório (normalmente ratos) 
➢ Boa qualidade = material vivo 
➢ Patologias = biópsias de pacientes 
➢ Exceção = pele 
• Células sem O2 → degeneração 
➢ ↑ tempo = ↑ degeneração 
➢ Soluções fixadoras = paralisar reações bioquímicas 
para evitar degeneração celular (planejamento antes 
de realizar procedimento) 
 
• MÉTODO FÍSICO 
➢ Congelamento = câmara fria → cortes 
→ para observação morfológica não é muito bom 
→ identificação de moléculas = ideal (agride menos 
os resíduos superficiais das células) 
• MÉTODO QUÍMICO 
➢ Imersão = volume mínimo de 10x da solução fixadora 
em relação ao volume do tecido 
→ mergulhar na solução 
→ solução adentra no fragmento (periferia fica bem 
paralisada e o miolo pode ficar mal fixado) 
→ para minimizar = fazer pelo menos 1 corte (face 
não encapsulada para facilitar penetração) 
→ Cada substancia fixadora demanda um protocolo 
diferente (tempo e temperatura variam) 
 
➢ Perfusão 
→ mais eficiente = com órgão vivo – acessa órgão 
de interesse e insere uma cânula na artéria nutrícia 
e na veia drenadora (interromper fluxo sanguíneo), 
ponta da cânula da veia fica em um béquer, já a da 
artéria, anexa seringa ou bomba de infusão e infunde 
no órgão solução salina (mantém células vivas) – 
cânula da veia parou de sair sangue, troca de seringa 
e passa solução salina para a veia 
→ qualidade maior de detalhes 
 
• Necessidade de cortes → 5 a 7 micrômeros 
• Órgão ou tecido enrijecido = inclusão 
• Substância enrijecedora precisa penetrar internamente 
(parafina ou resina plástica - metacrilato) → necessário retirar 
água 
• imergir material na série alcoólica crescente (concentração 
crescente) → parte da água saia e misture com álcool e parte 
do álcool adentre nas células 
• 6 banhos (parafina) – se for metacrilato pode ser menos 
• só tem essa etapa se for incluso em parafina 
• objetivo é fazer com que a parafina (apolar) adentre no 
material nos espaços intercelulares e intracelulares 
• passar o material em 3 banhos de 20min a 30min em xilol 
(xileno) – corrói PVC (pia do laboratório) 
• Parafina 
➢ Estufa (para parafina ficar líquida/fundida) 
➢ 3 béqueres = 3 banhos 
➢ Xilol sai do material e parte da parafina entra nas 
células e substitui 
➢ Preparação de formas de papel com parafina fundida 
e com uma pinça o material é coletado de acordo 
com o plano de corte → temperatura ambiente 
(solidificação da parafina) 
• Metacrilato 
➢ Temperatura ambiente 
➢ Formas plásticas + gotas de catalisador para resina 
solidificar 
• Órgão ou tecido enrijecido = inclusão 
• Parafina ou resina plástica (metacrilato) 
• Aparelhos de cortes = micrótomos 
• Assim que fizer cortes = banho-maria com água morna = 
hidratar parafina para poder esticar e posteriormente pescá-
lo com lâmina de vidro 
• Navalhas de vidro para cortes em metacrilato = cortes + 
finos (2 a 3 micrômetros) 
• Criostatos → micrótomos que mantém temperatura baixa 
em função da fixação do congelamento 
 
• Lâminas no varal (bloco de madeira) com identificação 
• Secagem na estufa durante 12h (temperatura varia de 35°C 
a 45°C) → aderir corte à lâmina 
• 1º Retirar parafina 
➢ Banhos de xilol 
• 2º Hidratar material 
➢ Corantes são feitos em solução aquosa 
➢ Xilol solubiliza lipídeos 
➢ 6 banhos de álcool (série alcoólica decrescente 3 
banhos de álcool absoluto e 3 banhos 90°/80°/70°) 
• Coloração 
➢ Mais comum = HEMATOXILINA-EOSINA (HE) 
➢ Hematoxilina básico e roxo (tempo depende do grau 
de hidratação/utilização) 
➢ Lavagem com água corrente (diferenciação e 
retirada o excesso) 
➢ Eosina é ácido e alaranjada (corante 
rápido/segundos) 
➢ Contraste de roxo e rosa → coloração bem feita 
 
• Núcleo = ácido (basófila) 
➢ Ácidos nucleicos 
➢ Afinidade pelo corante básico 
• Fibras colágenas = básicas (acidófilas) 
➢ Afinidade pelo corante ácido 
• preservação do corte e da lâmina 
• fragmento de vidro = lamínula = cobrir o corte 
• material amarelado (entellan ou bálsamo de Canadá) = fixar 
o corte à lâmina → excesso pode ser retirado por xilol 
• se ficar ar entre lamínula e lâmina = oxidação e prejudicar 
da observação 
 
• HE (inespecífica e mais frequentemente usada) 
Cartilagem Hialina: Matriz da cartilagem = rica em ácido 
hialurônico (hematoxilina roxo e básica) 
Pericôndrio = formado por fibras colágenas básicas (eosina 
rosa e ácida) 
• AZUL DE TOLOUIDINA 
Afinidade pelos grânulos dos mastócitos (célula que armazena 
grânulos de secreção) tecido conjuntivo 
• TRICRÔMICO DE MALLORY 
Fibras colágenas em azul – 
destacar/distinguir tecido conjuntivo 
 
Tecido epitelial e muscular – 
vermelho/rosa 
 
• TRICRÔMIO DE GÔMORI 
Coloração das fibras colágenas em 
verde 
 
 
 
• ALCIAN BLUE 
 
Carboidratos ácidos → mucopolissacarídeos em azul 
• ÁCIDO PERIÓDICO DE SHIFF – PAS 
Carboidratos em rosa → 
mucopolissacarídeos/glicogênios 
 
 
 
• VERHOEFF 
 
Fibras elásticas em roxo escuro ou preto