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BCM2 Replicação do DNA -DNA- repetições de uma mesma unidade, cadeia polimérica de nucleotídeos. -Nucleotídeos: uma pentose (açúcar com 5 carbonos)/ ribose; base nitrogenada (5 opções: purinas (adenina e guanina (dois anéis aromáticos); pirimidinas (um único anel aromático) citosina, timina e uracila (só encentramos uracila no RNA; variação de uma timina, timina que falta o grupo metil); grupo fosfato. -Nucleotídeo monofosfato: ADP, ATP, GDO, GTP -Nucleotídeo difosfato -Nucleotídeo trifosfato: -Leitura: Alberts sobre AMP; sinalização celular. -Nucleosídeo: refere-se a uma molécula formado apenas for: 1) Pentose 2) Base nitrogenada; Ou seja, não temos grupo fosfato. -DNA: repetição de nucleotídeos. Divisão Celular -Célula viva tem que ter capacidade de replicação. -Tempo médio 10-12h; 24h. -Como uma célula se torna duas? R: Duplicar seus constituintes. -Mitose e meiose: ato da célula se dividir; mas antes desse processos há fases preparatórias. - 4 fases básicas: 1) G1: Célula metabolicamente ativa, preparando seus constituintes, para começar a duplicar se DNA; precisa de ATP, GTP livres ‘’tijolos do DNA’’ para começar a produzir outra molécula. 2) Fase S: fase de síntese; começa a sintetizar uma nova molécula de DNA. 3) G2: Celula esta ativa se preparando, aumentando numero de organelas, alterando a estrutura nuclear; serie de alterações que ocorrem dentro da célula, conferir se houve erros na replicação. 4) Fase M: Mitose ou meiose. -A replicação do DNA: Utiliza o nosso DNA, como modelo, abrir minha fita de DNA original, vou utilizar cada uma dessas fitas de DNA (dupla); como molde e vou utilizar em cima desse modelo, uma fita nova (vermelho); nova molécula de DNA formado tem uma fita molde (acima) e uma fita nova. (Processo semiconservativo: uma fita nova e uma fita molde). -Sempre conservo da fita anterior. -Fita molde e vou pareando/ acrescentando nucleotídeos (livres) um por um, pareando CITOSINA c/ guanina, depois ADENINA com TIMINA e etc. De acordo com o pareamento do par de base. Tijolo por tijolo. -Desoxirribonucleosídeo trifosfato normal (dNTP): livre/ nucleotídeo : questão de nomemclatura. -Hidroxila livre, retira -Saber ligação fosfoester. -Formam pontes através da ligação carbono 3’ e carbono 5’. -Chamada de fosfodiéster pois a ligação fosfoéster ocorre 2 vezes, para “montar” o nucleotídeo e para “montar” a fita de DNA. -DNA-polimerase (enzima): promove a adição de nucleotídeos, promovendo ligação fosfoester. Retirada do grupo OH. Promove a ligação fosfoester.* -Há hidrolise utilizada como fonte energética para que aconteça ligação entre os nucleotídeos. -Ligação de hidrogênio não é ligação química, é interação. Não precisa de enzima. -A DNA-polimerase estrutura de palma de uma mao, tem sítios catalíticos diferentes, sitio de polimerização (P) (promove adição de nucleotídeos; faz a ligação fosfoester entre o nucleotídeo livre e o carbono 3’, porque tem o H livre). Precisa de OH livre para ocorrer a polimerização. -A polimerase não faz síntese de novo de nucleotídeos, não acrescenta nucleotídeos se não tiver um OH livre. -Exonuclease (E): enzimas que removem os nucleotídeos/ papel de retirar/nucleotídeos. A polimerase tanto pode como colocar e retirar. Esse termo ex-fora. Retirar nucleotideos que estao na extremidade. -A DNA-polimerase tem papel de permitir que o DNA seja replicado com alta fidelidade. -Quem reconhece as interações erradas? A DNA-polimerase. -Multifuncional- DNA-polimerase: -Reconhece pela geometria desses pareamentos(sitio E) e o OH livre (sitio P) (reconhecem como dano no DNA). Faz o controle de qualidade. -Primer: marca o inicio da replicação; DNA-polimerase (cinta deslizante antígeno de proliferação nuclear (procariontes). -Primers: pequenas sequencias de nucleotideos de RNA (10 a 20 de pequenos RNA). Primer entra pra dar inicio, mas tem que sair. -As fitas são anti-paralelas. - vídeo : https://www.youtube.com/watch?v=T3RK7w0nfOc&t=125s Origem de replicação - Tenho múltiplas origens de replicação em eucariotos (regiões que primeiro se abrem para acontecer a replicação do DNA); procariotos só tenho uma. -Forquilhas de replicação: encontro enzimas do processo replicativo. Todas as enzimas vão em sua direção (encontros). -Se ligam a fita de DNA fita simples, se ligam estabilizando a fida DNA para se manter aberta. Evitar o repareamento das bases. Revisao -dNTPS: nucleotídeos trifosfato; -Polimerases: procariotos-> tipo III; eucariotos-> delta; -Primeira região que se abre, região rica de timinas e adenina (chamada origem de replicação), para acontecer a quebra dessa fita preciso da enzima HELICASE (dependente de ATP, e quebra as ligações de H). As fitas que estao se abrindo, eu tenho que estabilizar e manter aberta (serie de proteinas que vou chamar de FATOR REPLICATIVO A (eucariotos/ manter fita aberta); a medida que vou abrindo a fita, vou formando regiões do DNA (abrindo e estabilizando); tenho regiões que vao se formando em formato de Y (AS FORQUILHAS DE REPLICACAO): encontro as ENZIMAS DE REPLICACAO (bidirecional); tenho em eucariotos mais de 30 mil de forquilhas. -Formei a forquilha -Preciso inicar o processo replicativo, colocar o prime (enzima DNA PRIMASE- eh um PRIMER DE RNA (10 a 20 nucleotideos); agora consigo polimerizar, quem vem polimerizando (colocando nucleotídeo por nucleotídeo: eucariotos- POLIMERASE DELTA. Ocorre 5’-3’, mas consigo retirar ao contrario (DNA primase) -Fita retardade: vou colocando os primers, região do dna sendo expostar para mim; -Coloco um primer, polimerizo, quem tira os primers? Em eucariotos: EXONUCLEASES; quem alonga, quem coloca o nucleotido no espaço? DNA- POLIMERASE -Quem liga os fragmentos de OKASAKI -> DNA LIGASE -TOPOISOMERASES: provoca quebra. Ex fármaco: etoposideo (inibidores da topoisomerases). -As que replicam as regiões topo- ENZIMA TELOMERASE. Livro: A célula cap. 5: -